适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法研究

为了有效消除次生物质、多糖和多酚类物质的严重干扰,获得高质量适宜于实时荧光定量分析的当归总RNA,本研究采用CTAB法、试剂盒法和Trizol法分别提取当归根、茎、叶组织的总RNA,并通过紫外可见光分光光度计、非变性琼脂糖凝胶电泳和反转录荧光定量PCR检测总RNA的纯度、产率、完整性及质量。结果表明：CTAB法提取的当归根、茎、叶组织总RNA纯度较高、完整性较好且叶组织总RNA得率较高;试剂盒法所提的总RNA完整性亦较好,但纯度略差且各组织的得率均较低;Trizol法提取的茎组织总RNA能满足荧光定量PCR要求,但提取的根和叶组织总RNA均出现严重污染,无法满足后续研究要求。因此,CTAB法是一种经济、可靠、适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法。本研究结果为今后有效开展当归分子生物学研究奠定了方法学基础,也为其他药用植物总RNA的提取提供了参考。     

一种快速提取盐桦叶片总RNA的方法建立

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键。盐桦细胞中存在大量的胶质和多糖类物质，用Trizol试剂根本不能获得RNA。本研究采用CTAB-LiCl法，提出了一种适合盐桦叶片总RNA的简单快速提取方法。消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染。该方法提取的盐桦叶片总RNA，完整性好、纯度高，可用于RT-PCR等实验操作，此法无需特殊试剂和贵重仪器，实验结果稳定，重复性好，适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取。     

血红鸡爪槭叶片总RNA提取方法的比较研究

血红鸡爪槭叶片中富含多糖、多酚物质,严重影响了RNA提取纯度和质量。为了获得适宜血红鸡爪槭叶片总RNA提取的方法,采用柱式植物RNAout法、TRIZOL法和改良CTAB法3种提取方法对其叶片总RNA提取效果进行比较分析。结果显示,采用柱子法提取获得的总RNA产率最高,但是有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260∕OD280为1.65,可能有多糖和酚类物质的污染,并且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA纯度很高,OD260/OD280平均值在2.0左右,产率在上述两种方法之间,电泳图清晰,而且改良CTAB法提取的总RNA,经RT-PCR获得了清晰的特异性条带。表明改良CTAB法提取的总RNA纯度和产率高,完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是血红鸡爪槭叶片总RNA提取的适宜方法。     

一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法

摘 要：在药用植物中开展分子生物学研究时的常见困难是RNA提取困难,提取的RNA质量不能满足下一步试验要求。探索了一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法并对提取的RNA质量在随后的分子生物学中进行了检验。结果证实通过该方法提取的RNA纯度和完整性较好,完全可以满足后续的分子生物学实验要求,也可以作为其它药用植物RNA提取的参考方法。     

板栗子叶总RNA提取方法研究?

为了获得板栗子叶总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以板栗幼果子叶为材料,采用改良CTAB法、硼砂-CTAB法、酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒共6种方法提取板栗子叶总RNA。结果表明,除硼砂-CTAB法外,其他5种方法均能获得板栗子叶总RNA。但是,与酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒相比较,改良CTAB法提取的板栗子叶总RNA完整性好,纯度高,且无DNA污染,能够满足cDNA-AFLP等分子生物学研究的要求。     

β-巯基乙醇对不同时期芒果剪口芽总RNA质量的影响

芒果剪口芽中富含多酚,由于多酚易被氧化,且难以与核酸分离,导致总RNA提取困难。为提取适于芒果实时荧光定量PCR分析的高质量RNA,通过在华越洋超快新型植物RNA提取试剂盒的细胞裂解液中加入适量的β-巯基乙醇,研究β-巯基乙醇对芒果剪口芽总RNA提取质量的影响。试验结果表明,在细胞裂解液中加入300μLβ-巯基乙醇,可以排除多酚、色素等杂质的干扰,获得条带完整、质量较好的总RNA样品。RT-PCR实验结果进一步表明,此方法提取的RNA完全适于后续分子生物学试验研究。     

草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测2 种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA 的提取,电泳检测在28S 和18S 处呈2 条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0 左右;改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。     

紫叶李叶片总RNA提取方法的改进与比较

从紫叶李叶片中提取高质量RNA是研究叶色相关基因表达调控的必要前提。实验室常用的RNA提取方法和RNA提取试剂盒有很多种,每种方法只适合某些组织材料。对彩叶植物来说,组织中的次生代谢物含量很高,叶片中的花色素苷、多糖更是高质量核酸提取过程中难以去除的干扰成分。本文利用CTAB法、SDS法以及Trizol法从富含花青素类物质的彩叶植物紫叶李叶片中提取总RNA。电泳检测显示:CTAB法提取的总RNA其28S、18S条带清晰,紫外光谱分析A260/A280比值为1.93,A260/A230比值为2.04,RNA产量可达141μg·g-1·FW-1;而且通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合反转录PCR的要求,而且能去除色素分子的干扰。SDS法提取的总RNA产量较低,且纯度不高。而Trizol法很难从紫叶李中提出完整的RNA。因此CTAB法是一种从富含花青苷的紫叶李叶片中有效提取高质量总RNA的方法。     

银杏叶片RNA提取方法的研究

为了获得一种银杏（Ginkgo biloba L.）叶片总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,笔者以不同生长期的叶片为材料,利用生物分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、乙二醇丁醚法以及改良Trizol法提取的银杏总RNA的产率和纯度。结果表明：改良Trizol法所提取RNA的OD260/OD280比值介于1.8~2.0之间,并且OD260/OD230在1.9~2.1之间,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良Trizol法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;CTAB法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象,乙二醇丁醚法提取效果较差。这表明改良Trizol法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

一种简单高质量的黄伞菌总RNA分离提取方法

为了从转录组水平研究黄伞菌的抗肿瘤等药用价值,需要提取分离得到高纯度、高质量的黄伞菌RNA样品。利用液氮研磨TRIzol一步法提取黄伞菌总RNA,并且对经过和未经液氮研磨的黄伞菌RNA提取产物进行了质量检测和统计对比分析。检测结果显示,经液氮研磨样品RNA浓度远远高于未经研磨样品,OD260/280都约等于2,说明其纯度很高。同时,3个重复样品25S和18S亚基条带荧光强度比值分别为1.8,1.9,1.9,接近于2,证明RNA完整性较好,Agilent 2100的RIN值检测结果分别为9.1,8.7,9.3,均远大于6.8标准,进一步佐证了其完整性。所以,液氮研磨TRIzol一步法是非常适用于黄伞菌总RNA高质量提取的简单且高效的方法。     

棉花RNA的快速提取方法

目前已发展的从植物中提取RNA的方法有多种.但由于棉花中次生物质含量较高,因此有些方法并不适合于棉花RNA的提取.本文介绍经过反复实验后改进的棉花RNA的提取方法,它具有快速、简单等特点.     

大叶羊蹄甲总黄酮的提取及其对羟自由基的清除作用研究

为了研究大叶羊蹄甲中总黄酮的提取、鉴别方法及对羟自由基的清除作用。用乙醇提取法提取大叶羊蹄甲中黄酮类物质,采用分光光度法对提取物中总黄酮含量及羟自由基清除能力进行测定。提取大叶羊蹄甲中总黄酮的最佳工艺条件为：回流温度为80℃,乙醇体积分数为80%,固液比1:20,提取时间为1 h,在此条件下,黄酮的提取率为11.81%。此方法实验步骤简便,无污染,是提取大叶羊蹄甲中黄酮类化合物的有效途径,大叶羊蹄甲中总黄酮提取液对Fenton体系产生的?OH自由基有很好的清除作用。     

一种适合于cDNA文库构建的高质量棉花RNA的简单抽提法

Duetothelargeamountsofpolyphenolicsandpolysaccharides,theextractionofhighqualitybiochemicalmoleculeslikeRNAand DNAisalwaysanobstacletothemolecularbiologystudyofcotton.TheconventionalRNAextractionmethodsandcommercialkits alwaysfailedtogethighqualityRNAorevennothing.PerfectRNA wasextractedfromembryogeniccallusincottonusingTrizol(Invitrogen,#15596026)butfailedtoothertissuesinthisstudy.Hereamodifiedsimpleprotocolwasdescribedusingguanidinium thiocyanatetoextracthighqualityRNAfromcottonwithl…     

棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建

为了从棉花纤维中提取高质量的RNA用于构建酵母双杂交文库,采用4种不同的方法提取9天和19天棉花纤维的RNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明：热硼酸法适用于初生幼嫩纤维和次生加厚纤维的RNA提取,CTAB-PVP法仅适用于初生幼嫩纤维的RNA提取,异硫氰酸胍法和高盐高pH值法提取的RNA由于杂质含量较多而影响反转录效果。采用热硼酸法大量提取总RNA,纯化后的mRNA反转录为cDNA,通过重组将扩增的cDNA片段定向插入到pGADT7-Rec AD克隆载体中,得到棉纤维9天和19天的酵母双杂交cDNA文库。2个文库的滴度分别是1.01×107 cfu /mL和8×106 cfu /mL,cDNA插入片段长度集中分布在250~2500 bp之间。由此可以看出,构建的2个棉纤维文库质量较高,可用于棉花纤维素合成和调控途径的研究。     

甘蔗种质总RNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗种质RNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。本实验是以成熟甘蔗的叶片为材料,通过对前人的植物RNA提取方法进行改良,寻求最佳的甘蔗总RNA提取方法。通过改良最后得到的异硫氰酸胍法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点。用该法提取得到的甘蔗总RNA经琼脂糖凝胶电泳可获得28S、18S和5S rRNA3条带,并且28S rRNA的亮度大于18S rRNA的亮度。表明该方法提取的RNA完整性好,纯度高。另外对所得部分甘蔗种质的总RNA进行RT-PCR检测,可特异扩增出目标片段,说明用异硫氰酸胍法Ⅲ提取的甘蔗种质总RNA,可以直接用于后续的分子生物学试验。     

适用于转录组测序的棉花幼根总RNA提取方法筛选

棉花幼根中含有大量酚类物质、多糖和单宁等多种次生代谢物,且根部取样时会带有少量的泥土和有机质等污染物,因此棉花幼根RNA提取难度较大.本文采用两种试剂盒法和改良的异硫氰酸胍法,筛选适合转录组测序的提取棉花幼根RNA的方法.与试剂盒法相比,改良的异硫氰酸胍法具有浓度高、质量好等特点,能够满足转录组测序的要求.