梨树内生拮抗细菌的筛选及发酵条件的研究

以梨黑斑病菌(Alternaria alternata)为指示菌,从梨树木质部分离的8株内生芽孢杆菌中筛选出一株抑菌效果最佳的拮抗菌株LP5。为明确该菌株在发酵生产中的最佳营养组分及发酵条件,运用单因素试验和正交试验方法测定了不同因素下LP5菌株发酵液的OD600值及其抑菌作用。研究结果表明:最有利于菌体生长及抗菌物质积累的营养条件是以含蔗糖1.5%,蛋白胨1.0%,酵母粉0.5%,NaCl 0.5%的液体培养液,最适发酵条件为30℃,pH 7.0,发酵培养48 h~72 h。     

人参锈腐病拮抗细菌BSO15最适发酵条件研究

通过单因子试验和正交试验方法对人参锈腐病拮抗细菌BSO15摇床发酵条件和培养基配方进行了研究.结果表明:最适发酵条件为装液量20%,接菌量5%,pH7,温度28～30℃;发酵最适培养基配方为葡萄糖18g/L、L-谷氨酸钠12g/L、牛肉浸膏5g/L、磷酸氢二钾4g/L、硫酸镁1 mg/L、氯化钠3g/L、硫酸锰5 mg/L.     

人参锈腐病拮抗细菌BS015最适发酵条件研究

通过单因子试验和正交试验方法对人参锈腐病拮抗细菌BS015摇床发酵条件和培养基配方进行了研究。结果表明:最适发酵条件为装液量20%,接菌量5%,pH7,温度28～30℃;发酵最适培养基配方为葡萄糖18 g/L、L-谷氨酸钠12 g/L、牛肉浸膏5 g/L、磷酸氢二钾4 g/L、硫酸镁1 mg/L、氯化钠3 g/L、硫酸锰5 mg/L。     

辣椒根腐病拮抗细菌D221发酵条件的研究

利用单因子试验和正交试验方法,对拮抗辣椒根腐病D221菌株培养基成分和发酵条件进行研究.结果表明,最佳培养基成分为蔗糖2.0％,胰蛋白胨0.5％,牛肉膏2.0％,NaCl 0.5％,MgSO4 0.1％.最适的发酵条件为温度30℃,摇床转速150 r·min-1,接种量5％,初始pH为7,在250 mL三角瓶的装液量为...     

响应面分析法优化苦参内生真菌BS003菌株液体发酵条件

对苦参内生真菌BS003的液体发酵条件进行优化,以获得最大的发酵产物。在Plackett-Burman试验设计基础上,采用响应曲面法,以生物量为考察指标,优化发酵条件。结果表明,液体发酵最佳条件组成为:250mL锥形瓶中的培养基装液量为75mL、接种量104 cfu/mL、硝酸铵1.22g/L、马铃薯200g/L、蔗糖10g/L、乙酸钠1.66g/L、温度27℃、pH=7、转速150r/min、时间4d。回归分析表明,整个模型显著,此方法合理可行,相比优化前产量提高38%。     

油菜内生细菌yc8发酵条件优化研究

从山西太谷、运城采集的油菜中分离得到40株植物内生细菌,经过初步筛选得到具有生防潜力的菌株yc8,经鉴定为环状芽孢杆菌(B.circulans).采用正交试验设计对油菜内生细菌yc8进行营养配方和发酵条件的系统研究.通过yc8发酵液中细菌浓度、拮抗物质质量浓度和yc8发酵液对油菜菌核病[Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary]的抑菌作用综合评定,得到优化配方为:麦芽糖(30g/L)、牛肉膏(50g/L)、酵母粉(7g/L)、MnSO4(2g/L)、FeSO4(1g/L)、ZnSO4(2g/L)、CaSO4(2g/L)、CuSO4(2g/L)、K2HPO4(2g/L)、KAl(SO4)2(1g/L)、发酵温度28℃、装液量40%、摇床转数150r/min、发酵液pH=7.5,使环状芽孢杆菌在摇瓶发酵条件产生拮抗物质质量浓度达到为725.1μg/mL和对油菜菌核病茵的平板抑菌率达到85.3%.     

丹参内生拮抗细菌DS-9发酵条件的优化

[目的]从丹参体内分离到一株对番茄灰霉病菌有较好抑菌活性的内生细菌DS-9,为了更好地发挥其抑菌活性,[方法]通过单因素试验和正交试验方法对其培养基配方及发酵条件进行优化。[结果]最佳基础培养基为NYBD,碳源是葡萄糖,氮源是胰蛋白胨和牛肉膏的组合,最优培养条件为pH 9.0,装液量为200 mL/500 mL,接种量为10%,转速为130r·min~(-1),时间为24h,抑菌物质累积量最多,抑菌效果最好。[结论]通过该试验为今后丹参内生细菌生物制剂的开发应用提供理论依据。     

黄瓜细菌性角斑病的拮抗细菌的发酵条件初步研究

从土壤中分离得到的120个菌株中,筛选出对黄瓜角斑病菌有较强抑菌活性的一株拮抗细菌B9。通过对黄瓜细菌性角斑病的拮抗细菌B9的六个单因素试验;按单因素试验结果选择碳源乙酸钠、氮源蛋白胨、NaCl、MgSO4、K2HPO4、CaCO3共6个因素,分别取三个水平,进行正交试验,通过极差分析出较优组合,通过方差分析出碳源乙酸钠和氮源蛋白胨为发酵配方的关键因素;确定该菌株的最佳发酵配方为:乙酸钠3.5%、蛋白胨1.0%、NaCl 0.9%、MgSO40.03%、K2HPO40.075%、CaCO30.04%。     

解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10 d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300 rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6 d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42 mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖＞葡萄糖＞乳糖＞蔗糖＞麦芽糖＞半乳糖＞山梨糖＞甘露糖＞果糖＞可溶性淀粉＞鼠李糖＞甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31 mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6 d、温度28℃、初始pH 6.0、5%接种量、转速300 rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48 mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl 0.10 g/L、KCl 0.70 g/L、MgSO4·7H2O 0.70 g/L、FeSO4·7H2O 0.01 g/L、MnSO4·7H2O 0.01 g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH 6.0,转速180 rpm,接种量5％,发酵时间为6 d。     

解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖〉葡萄糖〉乳糖〉蔗糖〉麦芽糖〉半乳糖〉山梨糖〉甘露糖〉果糖〉可溶性淀粉〉鼠李糖〉甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6d、温度28℃、初始pH6.0、5%接种量、转速300rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl0.10g/L、KCl0.70g/L、MgSO·47H2O 0.70g/L、FeSO4·7H2O 0.01g/L、MnSO·47H2O 0.01g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH6.0,转速180rpm,接种量5%,发酵时间为6d。     

苦参总碱提取条件的优化研究

采用酸水回流提取和乙醇回流提取两种方法对苦参总碱的提取效果进行了综合研究。结果表明，乙醇回流提取效果较好，其最佳提取条件为：采用筛分目数20-60目的苦参粉，以60％的乙醇溶液，液料比为12，回流提取2次，可以得到最佳的提取效果。     

苦参毛状根诱导及其培养条件的研究

[目的]为药用成分苦参碱及氧化苦参碱的来源提供新途径。[方法]考察了R1601菌株对苦参不同外植体在不同浓度乙酰丁香酮和侵染时间影响下苦参毛状根的诱导率;研究了培养基中的组分和浓度对苦参毛状根继代生长的影响。[结果]以苦参幼芽为外植体,在R1601菌液中添加100μmol/L乙酰丁香酮,侵染20 min,(25±1)℃,MS共培养基上暗培养2 d,苦参毛状根的诱导效果较好,诱导率28.6%,存活率46.7%;苦参毛状根在改良的继代培养基上生长良好。[结论]苦参毛状根的最佳诱导条件:以生长1周的苦参幼芽为外植体,R1601为菌株,添加100μmol/L的乙酰丁香酮,侵染20 min,(25±1)℃暗处诱导。     

贵州栽培苦参中苦参碱的含量测定

为建立贵州栽培苦参药材中有效成分苦参碱含星的测定方法,采用HPLC法DiamonsiITM(钻石)C18色谱柱,以乙睛、3%磷酸(70:30)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长210 nm.结果显示方法线性关系良好,平均加样回收率98.01%,RSD=1.15%,表明该法简便快速,结果准确,可以作为控制栽培苦参药材质量的方法.     

拮抗棉花枯萎病菌的苦豆子内生细菌资源

对从塔里木盆地苦豆子中分离得到的内生细菌进行皿内涂布拮抗实验、对峙培养法拮抗实验和胞外分泌物的拮抗性测定等研究,结果表明塔里木盆地苦豆子中存在大量的拮抗性内生细菌资源.皿内涂布法筛选结果表明550株苦豆子内生细菌中有118株相对抑菌率超过50 ;.对峙培养法对118株拮抗性内生细菌进一步筛选结果表明对棉花枯萎病菌抑菌距离超过20 mm的菌株有56株.56株拮抗性内生细菌胞外分泌物对棉花枯萎病菌的抑菌距离超过5 mm的有35株,具有较好的生物防治潜力.56株拮抗性内生细菌经鉴定分别属于气芽孢杆菌属(Aerobacillus sp.,7株)、气单胞菌属(Aeromonas sp.,8株)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.,25株)、黄单孢杆菌属(Xanthomonas sp.,5株)、假单胞杆菌属(Pseudomonas sp.,5株)、土壤杆菌属(Agrobacterium sp.,6株).     

发根农杆菌诱导苦参毛状根的研究

[目的]为苦参有用成分的大量生产提供新的途径。[方法]利用发根农杆菌R1601分别对药用植物苦参的根段、茎段、叶片、子叶进行侵染。[结果]在相同条件下,叶片、茎段和根段成功诱导出毛状根,但诱导频率不同,茎段作为外植体诱导率最高,达到26.7%,更适合作为外植体选用。毛状根除菌后,能在MS培养基上自主生长。[结论]发根农杆菌的RiT-DNA基因已经整合到苦参基因组中。该研究为采用生物技术生产苦参活性成分奠定了基础。     

苦参愈伤组织的诱导及苦参总碱含量的检测

为了探索苦参愈伤组织培养的适宜条件和选择苦参总碱含量高的愈伤组织,用不同的消毒方法和不同的激素配比对苦参的子叶、叶片、地上茎和地下茎进行离体培养,诱导愈伤组织;并对外植体以及分别诱导出的愈伤组织进行苦参总碱的检测。结果表明,对苦参的外植体采用自来水冲洗30 min,75%酒精处理30 s,4%NaClO、滴加一滴tween-20,消毒5min就能取得较好的消毒效果;不同外植体以MS培养基为基本培养基加1.0 mg/L 2,4-D和1.5~2.5 mg/L NAA的条件下,均能高效率的诱导出愈伤,且生长较好;初步认为子叶和地下茎的愈伤组织中苦参总碱含量较高,适合选择子叶或地下茎的愈伤组织进一步进行筛选高产细胞系。     

HPLC法测定苦参不同器官氧化苦参碱含量

采用HPLC法测定苦参不同器官中氧化苦参碱的含量,结果表明,根中氧化苦以碱含量较高;茎、叶、花中含量较低。     

苦参对辣椒枯萎病的抑菌活性

[目的]探讨苦参对辣椒枯萎病的抑菌活性。[方法]采用生长速率法和悬滴法测试不同溶剂、浓度苦参提取物对辣椒枯萎病菌的抑制作用。[结果]乙酸乙酯与丙酮提取苦参所得粗提物的抑菌率显著高于乙醇。随着苦参乙酸乙酯粗提液浓度的增大,其对枯萎病病菌菌丝生长及孢子萌发抑制作用均显著增强;在质量浓度为40 g/L时,其对辣椒枯萎菌菌丝生长、孢子萌发抑制率分别达到94.48%、89.01%。[结论]苦参根中所含活性物质对辣椒枯萎病的抑菌活性较强,具有进一步研究开发的价值。