大豆基因组DNA提取纯化方法研究

[目的]通过逐步富集的方法,提高大豆DNA的纯度和质量,为其他动植物基因组DNA的提取纯化提供参考。[方法]以梅桥大豆为试验材料,在CTAB法提取大豆基因组DNA的基础上,对大豆基因组DNA进行了纯化,对纯化后的DNA进行了光密度、紫外光谱、琼脂糖电泳和RAPD-PCR等的检测。[结果]光密度和紫外光谱检测表明A260/A230介于1.678~1.722,平均为1.697,A260/A280介于1.733~2.022,平均为1.844;琼脂糖电泳检测证实DNA分子量较大、完整性好、RNA残留少;RAPD-PCR检测得到了谱带清晰、多态性丰富的电泳谱带。DNA的得率为66.969μg/g。该试验的研究方法具有DNA质量高、操作简便、试验条件要求不高的特点。[结论]该方法可以应用于其它动植物的DNA提取纯化。     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较研究

实验用优化煮沸法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,DNA的OD260/OD280达1.77±0.06,证明所提DNA质量较好,用于PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿法相比,优化煮沸法避免了用氯仿、酚等剧毒试剂,且节约了时间和成本,是一种较好的提取基因组DNA的方法。     

野生桃幼叶DNA提取方法的改良研究

以野生桃幼叶为材料,为适应AFLP分析要求,对常规SDS法、CTAB法、SDS-CTAB结合法以及改良CTAB法等4种基因组总DNA的提取方法的效果进行了比较研究。结果表明,常规SDS法难以去除桃幼叶组织中的蛋白质、多糖和酚类等杂质,使所提取的DNA呈黏稠状的浅褐色沉淀,难以溶解;CTAB法和SDS-CTAB结合法提取的桃基因组DNA,虽然蛋白质和酚类等杂质去除较干净,但对多糖类物质的去除能力仍然有限,且提取效果在品种间重复性较差;而改良CTAB法提取DNA完整性较好,杂质少,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。     

商洛野生蕙兰基因组DNA提取方法的比较

为探讨野生蕙兰基因组DNA最佳提取方法,本研究以商洛野生蕙兰幼嫩叶片为材料,采用SDS、CTAB、高盐CTAB法提取商洛野生蕙兰的基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取DNA进行完整性检测,用紫外分光光度法对DNA进行纯度、浓度和提取率检测。结果表明,3种方法所提DNA的浓度分别为2 223,2 980和3 371μg·mL-1,提取率分别为222.3,298.0和337.1μg·g-1,D260/D280分别为1.583,1.672和1.967,高盐CTAB所提取DNA的D260/D280比值1.8～2.0,浓度、纯度及提取率均最高,电泳条带清晰,由此初步确定3种方法中高盐CTAB法为商洛野生蕙兰基因组DNA最佳提取方法。     

蜡梅花瓣基因组DNA提取及RAPD-PCR反应体系优化

以蜡梅花瓣为试材,用改良CTAB法提取基因组DNA,并设置不同浓度梯度对每个PCR反应因子进行相应试验,结果表明,改良CTAB法提取蜡梅花瓣基因组纯度高、质量好。并采用正交试验设计的方法,对蜡梅RAPD-PCR条件进行了优化,结果表明,最佳的蜡梅RAPD-PCR反应体系(20μL)为:1×buffer,1.0 U TaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物和模板DNA 30～40 ng;适宜的扩增条件为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸90 s,38个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。     

甘蔗基因组DNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗基因组DNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。试验以甘蔗的嫩叶为材料,通过对前人的CTAB提取方法进行改良,建立了甘蔗基因组DNA的CTAB提取方法Ⅲ。该方法具有成本低、操作简单、省时和量多等特点,并且得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A260/A280值处于1.673～1.929之间、A260/A230集中处于1.903～2.358,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条分子量大于23.37kb的明亮主带并无拖尾现象,经RAPD-PCR检测各样品均能扩增出清晰而多态性丰富的条带,说明方法Ⅲ提取得到的DNA完整性好,纯度高,可以直接用于各种分子标记。     

烟叶基因组DNA提取方法研究

为探索适宜烟草叶片DNA提取的方法,对提取植物DNA的CTAB法和SDS法进行了优化,主要是在提取液的种类和浓度上做改进.以烟草叶片为材料,采用4种方法从烟草叶片中提取基因组DNA.结果发现,采用1%CTAB法可从烟草叶片中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23 kb,以此方法提取的DNA为模板进行随机引物的PCR扩增,可获得清晰的RAPD条带,该研究初步建立了适合烟草叶片的RAPD技术体系.     

一种新的梨基因组DNA提取方法及其应用

摸索出一种新的DNA提取方法--CTAB改良法,从梨成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA.同时,分析了模板DNA和dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量等对RAPD反应体系的影响,建立了一套适合梨基因组RAPD分析的技术体系.     

黄刺玫基因组DNA提取方法的研究

以黄刺玫的嫩叶为材料，比较了改良SDS法、CTAB法和陈大明法等3种方法对其基因组DNA的提取效果。结果表明：采用裂解前加入不含SDS的缓冲液，提取过程中用4％β-巯基乙醇的改良SDS法，可有效地控制材料的褐变及DNA污染。提取的DNA纯度和产率均较高，可完全满足RAPD扩增的需要。     

提取方法及部位对三裂叶豚草基因组DNA的影响

利用改良的CTAB法、SDS法及斑迹抽提法提取三裂叶豚草(Ambrosia trifidaL.)不同部位的基因组DNA.结果表明,改良的CTAB法提取三裂叶豚草韧皮部基因组DNA的提取效果最好.     

腊梅的研究进展

介绍了腊梅的化学成分、药理作用、临床应用、功效特点等研究进展以及在保健营养、园林上的应用研究,并指出腊梅生产利用中存在的问题和对策。     

微波场协同提取腊梅花总黄酮的研究

对微波提取腊梅花总黄酮的新工艺进行研究。结果表明,最佳的提取工艺为:原料0.500 g的腊梅花粉末,提取剂为60%乙醇,提取剂用量为1∶60(m/V),微波功率为464 W,提取时间为450 s,提取3次。与溶剂提取法相比,微波提取腊梅花总黄酮的每次提取时间从36 000 s减少为450 s,提取率从68.17%提高到94.61%。     

Chemical Composition of Essential Oil from Chimonanthus praecox Flower

[目的]分析腊梅花精油的香气成分。[方法]采用微波辅助-水蒸气蒸馏法对腊梅花精油的香气成分进行提取,用气相色谱-质谱法对香气成分进行分析,结合谱库检索对化合物进行鉴定,应用峰面积归一化法测定各化合物的相对百分含量。[结果]在腊梅花精油中共鉴定出27种香气成分,占总含量的98.85%。其中香气化合物主要由烯烃类、醛类、酯类、醇类和烷烃类组成。相对百分含量在5%以上的主要成分有大香叶烯 D （占25.62%）、醋酸冰片酯（占16.71%）、石竹烯（占10.51%）、顺-α-罗勒烯（占5.18%）、γ-榄香烯（占8.05%）、β-芳樟醇（5.01%）、1-乙基-1-甲基-2,4-二-（1-异丙基）环己烷（占7.18%）、2,3,4,4α,5,6-六氢化-1,4α-二甲基-7-异丙基萘（占5.20%）。[结论]该研究为腊梅花资源开发利用提供了理论参考。     

蜡梅研究进展

对1992—2008年蜡梅类植物的研究成果进行了分析。在此基础上,从种质资源、形态分类、繁殖栽培、新品种选育、生物学特性、化学成分研究以及蜡梅的园林用途、切花保鲜等方面进行了论述,并对今后一段时期研究的重点提出了建议。     

蜡梅花色色素种类的初步分析

通过颜色反应和紫外-可见光谱初步研究了15种颜色表现有代表性的蜡梅中、内被片的色素组成,并将颜色反应结果进行数量转化,采用类平均的方法进行Q型聚类分析。结果表明:蜡梅花色色素主要属黄酮类化合物,包括橙酮、查耳酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇等;乔种和红心类蜡梅的内被片还含有花色素及其苷类。15个样品按照内被片有紫纹(乔种)、满布紫纹(红心),中被片白黄色、金黄色及其它被聚成了5类,这与实际颜色的表现基本一致。     

蜡梅天然群体表型多样性分析

以蜡梅分布区内随机选取的9个天然群体为研究对象,对其叶片、果实、种子等8个表型性状进行多样性分析。结果表明：蜡梅表型性状在群体间存在广泛变异,8个性状群体间F值为0．99—65．90,除果实长和千粒质量,其他性状均达显著或极显著水平;群体内只有果实宽达显著水平,其他性状均不显著。8个性状的平均表型分化系数圪为63．16％,群体间多样性贡献率为8．90％,群体内多样性贡献率为3．04％,显示群体间变异是蜡梅表型性状变异的主要来源。蜡梅表型性状与地理因子的相关分析表明：果实宽与纬度成极显著负相关,种子数和千粒质量与纬度成显著负相关,而其他性状和地理位置的相关性均不显著。利用群体间欧氏距离进行的UPGMA聚类分析结果表明,9个蜡梅天然群体性状的表型特征并没有完全依地理距离而聚类,反映了蜡梅呈间断式岛状分布现状。     

浙江省野生蜡梅群落及其区系

经调查和考证，确认在浙江省临安市和富阳市2市交界处所发现的蜡梅属植物为野生蜡梅，蜡梅群落中共有维管植物511种（含种下等级），隶属于117科332属。通过对蜡梅群落植物区系的分析，认为其区系组成具有复杂性、多样性和古老性的特点，且以温带地理成分为主体，与湘西北蜡梅群落区组成具有较明显的相似性，调查发现蜡属喜钙树种，群落中喜钙植物、具刺植物及藤本植物相当发达，表2参15。     

蜡梅花粉活力检测方法筛选及保存时间观察

用氯化三苯基四氮唑(TTC)法、无机酸法和离体萌发法等3种测试方法检测不同蜡梅Chimonanthus praecox品种的花粉活力。结果表明:TTC法和无机酸法检测效果较差,而经过改良的培养基离体萌发法能有效地检测蜡梅花粉活力。该实验条件下,蜡梅花粉离体萌发最佳培养基为聚乙二醇(分子量6 000)300 g.kg-1 硼酸100 mg.L-1。在20℃暗培养条件下,品种大金星‘Dajinxing’、圆被素心‘Rotunbaticoncolor’和金龙紫穴‘Jinlong Zixue’的萌发率分别为64.4%,35.8%和35.5%,不同蜡梅品种花粉活力差异较大。室温露置条件下,蜡梅花粉活力能保持18~19 d,而经干燥后,在密封冷藏条件(4±2℃)下能保持2个月左右。图3表2参11