基因枪介导小麦基因转化体系的建立

以豫麦18幼胚为受体，建立高效基因枪介导转化体系，经除草剂抗性和对目的基因的PCR、PCR—Southern检测，获得了20株转基因植株，转化率高达3．7％，为基因枪高效介导提供了成功的证据。     

禾本科作物基因枪介导遗传转化研究进展

介绍了禾本科作物基因枪介导遗传转化原理，转化受体，讨论外源基因的整治，遗传和表达，以及今后的前景。     

玉米基因枪遗传转化体系的研究

以玉米自交系81162的胚性愈伤组织为受体材料,通过基因枪轰击法将nptII基因和afp基因转入玉米细胞,获得了抗性愈伤组织和再生植株。确定了筛选剂Geneticin的筛选浓度和方法,愈伤组织生长阶段和分化阶段Geneticin的有效浓度分别为60mg/L和30mg/L。对2个轰击参数氦气压力与轰击距离进行了组合试验,结果表明1100psi的氦气压力和8cm的轰击距离为最佳组合。PCR检测证明,目的基因已整合到玉米基因组中。     

基因枪技术与水稻遗传转化

基因枪技术与水稻遗传转化浙江农业大学农学系赵彬薛庆中１９９１年，Ｐ．Ｃｈｒｉｓｔｏｕ等首次应用基因枪技术获得了转基因水稻植株。基因枪转化技术不受植物种类的限制，不需要以原生质体作为转化的受体，可以将外源基因直接导入细胞、组织或器官，因而克服了根瘤农杆...     

基因枪介导的冬小麦临汾5064遗传转化体系构建

以中国小麦优质骨干亲本临汾5064幼胚为试验材料，对诱导、分化、生根培养基中的激素浓度和基因枪轰击压力等关键参数进行对比分析，旨在总结出临汾5064的最适遗传转化体系，为山西小麦育种提供技术平台。结果表明，临汾5064幼胚在3种激素浓度的诱导培养基中均可形成愈伤组织。其中，在含2.0 mg/L 2,4-D的诱导培养基中，参试幼胚具有最高的出愈率（83.0%）。临汾5064愈伤组织在4种激素浓度的分化培养基中均有再生芽产生，当分化培养基包含0.2 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L 6-BA时，愈伤组织具有最高的分化率（70.0%）。临汾5064分化愈伤组织在4种激素浓度的生根培养基中均有根生成，当生根培养基包含0.1 mg/L 2,4-D且不添加6-BA时，分化愈伤组织具有最多的生根率（77.5%），并且形成较多数目的根。利用上述优化激素浓度的培养基对临汾5064幼胚开展基因枪介导的遗传转化，在轰击步骤设置3个压力处理组分别导入测试质粒。结果显示，在900 psi轰击压力下获得192株再生植株，再生植株获得率为28.3%，其中有4株成功扩增出目标条带，具有最高的遗传转化率（0.50...     

基因枪介导棉花成熟种子胚尖的遗传转化

为建立良好的棉花遗传转化系统,本研究采用基因枪轰击棉花成熟种子胚尖的方法,将本实验室克隆的抗黄萎病相关基因GhDAHPS转化到棉花中。抗生素抗性鉴定结果表明:在基因枪轰击的309个胚尖中,有90株为卡那抗性植株,进一步通过PCR检测这些抗性植株,其中有5株呈阳性,PCR阳性率为1.6%。结果表明:基因枪转化棉花成熟种子胚尖是可行的,相对于其他转化方法,具有操作简便,植株成苗较快,转化周期短等优点。     

基因枪在植物遗传转化中的应用

基因枪法 (particlegun)又称微弹轰击法 (microprojectilebombardment,particlebombardment及biolistics) ,是一种新型的遗传转化手段[1～ 3 ] ,已受到人们的普遍重视 ,本文简要综述了基因枪法在植物转基因方面的应用情况     

基因枪介导的玉米NPR1基因的遗传转化

[目的]探索玉米基因枪转化的条件。[方法]以玉米自交系7239的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,研究了轰击距离、气体压力、真空度和轰击次数对转化率的影响。[结果]转化时以金粉用量100μg/枪、发射点与靶细胞距离9 cm、气体压力1 350 psi、真空度25In.Hg、轰击次数2次的组合最佳。经潮霉素(Hygromycin)筛选,获得了再生植株,PCR分析及Southern杂交结果表明NPR1基因已整合到玉米基因组中,平均转化率为1.76%。[结论]该研究为玉米优良抗病品种的培育奠定了基础。     

基因枪介导转化芦荟获得转基因植株的研究

由于芦荟具有医疗、美容、保健、食用等多种功能，近年来成为研究热点。海藻糖对生物体及生物分子具有良好的非特异性保护作用，并已在食品、化妆品、分子生物学领域得到了广泛应用。将海藻糖合成酶基因转入芦荟，对于改良芦荟的商业价值有重要意义。目前为止，关于芦荟转化还没有报道。本实验将含有海藻糖合成酶otsA基因的pBI-otsA质粒与含有bar基因的pAHC25质粒混合包埋金粉子弹，利用基因枪介导的共转化法轰击预培养4～5d的芦荟茎部外植体，经在含1．0～2．0mg／L glufoslnate筛选剂的改良MS培养基上多次筛选和分化，获得了一定数量的抗性再生芽，对移栽成活的抗性再生植株进行了PCR检测。结果表明，otsA基因、nptH基因、bar基因已经整合到芦荟基因组中，首次获得了芦荟转基因植株。     

水稻基因枪转化的研究

自 198 7年以来 ,基因枪转化被广泛应用于水稻转化 ,转化系统得到了优化 ,在水稻抗病虫、抗逆、品质改良方面取得了长足的进展     

雄性不育基因barnase对西瓜的遗传转化

将带有雄性不育基因、除草剂基因及卡那霉素抗性基因的质粒pBI-TBSbar通过冻融法导入根癌农杆菌菌株LBA4404中,采用农杆菌介导法转化西瓜品种(京欣一号,亲本自交系C-1),获得具有卡那霉素抗性植株8株,PCR,Southern blot检测表明,外源片段已经整合到西瓜基因组中.     

利用基因枪技术转化小麦、玉米的研究

采用国产JQ－700型基因枪,以含Bt基因的质粒pHB101为供体,轰击小麦、玉米愈伤组织,轰击后的愈伤组织经潮霉素抗性筛选后,获得32株小麦再生苗,14株玉米抗性植株。以a－32P－dCTP标记的PHB101质粒为探针,对小麦抗性植株进行点杂交印渍检测,发现有15株小苗显示阳性信号,且其中有一株的后代对田间蚜虫及锈病的抗性较好。玉米再生植株种植田间后在其后代中选出一抗玉米螟的稳定株系,尚需进一步的分子验证和饲虫实验。     

甘薯SAAT法遗传转化条件的优化

SAAT即声波辅助的农杆菌遗传转化方法。在遗传转化中,超声波处理可以在外植体上产生许多易于农杆菌进入的微小伤口和通道,从而提高转化率。该研究首次将SAAT法应用于甘薯遗传转化并对遗传转化体系进行优化,根癌农杆菌菌株为EHA101/pROA93(nptⅡ和gus),受体材料为甘薯品种栗子香的胚性悬浮细胞。结果表明,悬浮培养105 d,继代培养3 d,将经超声波处理30 s的胚性悬浮细胞侵染到OD600值稀释至0.5的对数生长期的EHA101菌液中10 m in,经4 d共培养后,GUS瞬时表达率最高,达到86.7%,稳定表达率为37.9%;转化时加入乙酰丁香酮亦能提高转化率;转基因植株筛选的适宜选择压为Kan 10 mg/L;适宜的抑菌剂为Carb 100 mg/L。     

西瓜种质的遗传多样性研究

本研究利用23个表型性状对71份西瓜自交系材料进行了遗传亲缘关系分析。聚类分析结果将供试材料分为7大类群:第1类包含3份西瓜材料,全部为抗病大果型;第2类为10份黑皮类型种质;第3类主要由花皮类型材料组成;第4类包括的7份西瓜种质全部为中小果型高糖材料;瓜面楞沟较深的材料58号单独聚为第5类;第6类主要为美国久比利类型材料;第7类包括几乎所有的网纹类型西瓜材料。变异系数的结果表明果粉有无、果形、纤维粗细、枯萎病抗性等性状能较好地反映出西瓜种质间的差异。本研究为西瓜育种亲本的选配和杂交优势水平的预测提供理论参考。     

根癌农杆菌介导获得转基因西瓜植株

利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。     

AGPase反义基因转化番茄研究*

 将含有魔芋AGPase反义基因的质粒pBAGP通过冻融法转化到根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）菌株LBA4404中,再采用叶盘法将其转化进番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）栽培品种“合作908”中,获得含AGPase基因的番茄抗性植株。最后,经卡那抗性鉴定、NPTⅡ基因和AGPase基因PCR扩增和PCR-Southern杂交检测表明,反义AGPase基因成功整合到番茄基因组,为番茄改良品质育种奠定了材料基础。     

西瓜抗病基因工程研究进展

西瓜是一种重要的世界性园艺作物,但生产中病害严重,抗病种质资源匮乏,遗传基础狭窄,常规抗病育种进展缓慢,利用基因工程改良其抗病性具有重大意义。笔者从西瓜离体培养、遗传转化系统、抗病基因工程中相关目的基因、常用转基因方法、导入目的基因的种类、转基因植株的表现和转基因产品的安全性等方面对西瓜抗病基因工程研究进展做一综述,并进一步提出和讨论了该领域尚待解决的问题,以期为通过基因工程手段改良西瓜抗病性提供帮助。     

西瓜枯萎病菌致病型的遗传多样性分析

从我国7个西瓜产区(山东、湖北、安徽、江苏、湖南、河南及河北)的西瓜枯萎病病株和病土样中分离获得31株西瓜枯萎病菌株,采用幼苗共培养法测定各菌株的致病力。利用12个寡聚核苷酸随机引物对受试菌株的全基因组DNA进行PCR-RAPD分析。结果表明:31个受试西瓜枯萎病菌株可被划分为非致病型、弱致病型和强致病型3种致病型;其中非致病型菌株5株,致病型菌株26株。利用UPGMA软件对受试菌株间的遗传距离进行聚类分析,也发现来自不同地区的西瓜枯萎病菌存在明显的致病型分化;不同致病型的西瓜枯萎病菌具有丰富的遗传多样性,并划分为两个大的基因型,但与菌株的致病型没有显著的关系。     

基因枪法介导的魔芋遗传转化研究

利用基因枪轰击法建立了魔芋的遗传转化体系。试验结果表明,氦气压力／轰击距离以7．58 GPa／9cm最适。在轰击前4 h和轰击后16 h用附加有0．4 mol／L甘露醇的MS培养基进行高渗处理、轰击后恢复培养6～7 d,有利于减少逆境伤害,增加转化成功的几率。早期选用1 mg／L Basta作为选择压,而后期的筛选使用2 mg／L较高浓度的Basta可以获得真正的转化子。对获得的91株抗性植株进行了PCR检测,结果显示21株呈阳性,表明PAT基因和AGPS1反义基因均已整合进魔芋基因组。     

根癌农杆菌介导的植物遗传转化研究

介绍了农杆菌介导的植物原位转基因方法发展状况、技术环节以及在转化机制上的研究结果,并对存在的问题以及应用前景进行了讨论。