应用RT-PCR及RFLP技术对鸡传染性支气管炎病毒进行诊断与分型的研究进展

本文概述了近年来国内外应用ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＦＬＰ技术对对外开放传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）进行诊断与分型的研究进展。介绍以ＩＢＶ通用引物的ＲＴ－ＰＣＲ进行诊断及其应用、型特异引物的ＲＴ－ＰＣＲ及其应用以及ＲＴ－ＰＣＲ结合ＲＦＬＰ分析技术进行分型的应用,而且还展望了这上结技术在临床诊断及分子流行病学研究上的应用前景。     

DD-PCR技术在植物抗土壤逆境遗传研究中的应用

差示ＰＣＲ（ＤＤ－ＰＣＲ）技术是分离特异表达目的基因的重要手段,在环境逆境诱导表达基因的分离、克隆研究中已有报道。随着ＤＤ－ＰＣＲ技术的不断改进,它将在植物抗土壤逆境胁迫诱导表达基因的背景研究中显示出广泛的应用前景。文章介绍了差示ＰＣＲ的方法原理与技术改进及其在分离土壤植物营养胁迫诱导表达基因方面的初步应用。     

用DNA-RNA杂交检测新城疫病毒的研究

用光敏生物素标记鸡新城疫病毒ｃＤＮＡ，制备核酸探针，经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后，探针同该ｃＤＮＡ的ＰＣＲ产物、ＰＣＲ产物重组子和新城疫强弱毒株呈现阳性反应，与ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＭＧ和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应，田间病料的杂交试验也表明，该ｃＤＮＡ探针是敏感且特异的检测方法     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及其重组鸡痘病毒转移载…

根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中     

PCR技术新应用与水产分子生物学研究

本文简述了ＰＣＲ及其新衍生技术（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ,ＡＰ－ＰＣＲ,ＡＦＬＰ－ＰＣＲ,ＩＳ－ＰＣＲ）的原理,特点及其在水产分子生物学研究中的应用展望。     

染色体显微切割两种体外扩增方法的比较

以处一数分裂中期１的水稻三体花粉母细胞为材料,对额外染色体进行了显微分离,通过两种体外扩增方法,即接头引物ＰＣＲＩｌｉｎｋｅｒ－ａｄａｐｔｏｒ－ＰＣＲ,ＬＡ－ＰＣＲ）和简并寡聚核苷酸引物ＰＣＲ（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ－ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｐｒｉｍｅｄ－ＰＣＲ,ＤＯＰ－ＰＣＲ）,研究了这两种ＰＣＲ方法在本研究所采用的微分离染色体体外扩增中的优缺点,认为两种方法都可以有效地体外扩增,但扩增     

应用RAPD技术快速进行西瓜杂交种纯度鉴定的研究

本研究建立了简单,快速提取西瓜半粒种子ＤＮＡ方法,并简化了适合西瓜的ＲＡＰＤ－ＰＣＲ分析程序。对“无籽京欣一号”西瓜种子纯度开展了分子鉴定研究,找到了一个随机引物ＯＰＰ－０１,用它扩增的ＯＰＰ－０１／５６４只在父本与杂交种上出现,母本不出现,本文还针对ＲＡＰＤ技术在西瓜杂交种纯度鉴定上实际应用的可能性进行了讨论。     

cDNA文库和PCR技术相结合的方法克隆目的基因

建立了一个以ＰＣＲ为基础,结合ｃＤＮＡ文库构建来克隆基因的方法。即通过寻找基因的保过区段,设计合成一对特异性引物。以双链ｃＮＡ－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ载体连接物为模板,利用载体上的标准测序引物和基因的特异引物,ＰＣＲ扩增出包含ｃＤＮＡ两末端部分的基因。运用该方法我们克隆了稻瘟病菌的３－磷酸甘油醛脱氢酶基因。与其它克隆方法相比,该方法不但稳定而且有快速与简便的优点。     

新城疫北京强毒株融合糖蛋白（F）基因的克隆及序列分析

ＮＤＶ北京强毒株Ｆ４８Ｅ９经ＳＰＦ鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒ＮＡ后,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与ｐＧＥＭ＾Ｒ－Ｔ载体相连接转化,经过ＡｍｐＩＰＴＧ－Ｘｇａｌ（ＡＩＸ）平板筛选,ＨｉｎｄⅢ酶切及ＰＣＲ鉴定,初步获得了含Ｆ基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长１７４４个核苷酸的ＮＤＶ Ｆ蛋白基因。     

影响PCR-SSCP的因素分析

ＰＣＲ－ＳＳＣＰ是一种基于ＰＣＲ的单链构象多态性（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）分析技术,是ＤＮＡ已知突变的检测或未知变异分析中十分常用和实用的技术之一,本研究从非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制、样品的变性处理、电泳条件,显色方法和结果分析等方面对影响ＰＣＲ－ＳＳＣＰ实验室操作的因素进行了分析,并结合作者的经验给出了大小在１００～２００ｂｐ范围以内的