柑桔溃疡病菌致病性研究初探

从四川、湖北两省收集的柑桔病样分离出2个溃疡病菌株,经生物学和PCR鉴定后,分别针刺接种于纽荷尔脐橙、福本脐橙、卡拉卡拉脐橙和春见桔橙等4个柑桔品种;接种2 d后调查发病情况,使用DPS软件8.01的Duncan新复极差法进行分析.结果表明,接种后4 d是最佳观察时期,4个柑桔品种分别接种上述菌株后发病率无明显差异,老叶和成叶的发病率要高于嫩叶的发病率,叶片不同部位之间的发病率也基本相当,桔橙的抗病性要高于脐橙的抗病性.     

福建柑桔溃疡病菌分化的初步研究

以日本(XC25和 XC29)和南京(XC31)菌株作对照,对从福建柑桔主要栽培品种上分离的28个柑桔溃疡病菌株进行培养性状,形态、生理生化、血清学,噬菌体敏感性和致病性的比较研究。试验初步表明,福建的柑桔溃疡病菌属于毒力较强的 A 致病型,且具有一定的分化。试验还表明,柑桔品种的抗病性变化较大。有感病、中抗和抗病等各种类型。在研究溃疡病菌菌系分化时,应选择中抗品种作为鉴别品种,采用无伤痍接种法较好。     

应用斑点酶联法检测柑桔溃疡病菌

用浓度为１０＾８ｃｆｕ／ｍｌ，Ｘ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ全胞活菌免疫家兔，得以效价为１／２５６０～１／１０２４０的抗血清，应用斑点酶联法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测Ｘ．ｃ．ｐｖ．ｃｉｔｒｉ表明，抗血清经交叉吸收后特异性高，适宜稀释倍数为１：１０＾４～１０＾６，检测灵敏度度要达１０＾４ｃｕｆ／ｍｌ。加有０．５％Ｔｗｅｅｎ２０或０．５％Ｔｗｅｅｎ８０或０．１％ｔｒｉｔｏｎＸ－１００的ＴＢＳ液为适宜封闭液，     

PCR、DIA与致病性测定法检测柑桔溃疡病菌的比较

 依据柑桔溃疡病菌全基因组序列的独有保守区域设计筛选出的特异性引物对JYF5/JYR5，用于柑桔溃疡病菌的PCR检测，具有很好的检测特异性、灵敏度和稳定性。同时比较了PCR与DIA（斑点免疫结合技术）及传统的致病性测定法在检测灵敏度、稳定性及田间样品检出率等方面的差异。结果表明，PCR的检测灵敏度可达103～104 cfu·ml-1（每个反应体积约10个细菌），明显高于DIA（104～105 cfu·ml-1，每个样点约300个细菌）；PCR、DIA和致病性测定法检测田间显症样品的检出率均可达到100%，而检测柑桔无症样品的检出率依次降低。此外，通过排除PCR抑制物质和在PCR反应体系中加入终浓度为15%的甘油，有效地降低了检测中存在的假阴性。     

水稻抗细菌性条斑病菌离体叶片检验法影响因素研究

对水稻细菌性条斑病抗性离体叶鉴定方法的影响因素进行了研究。结果表明:离体叶检验法需在琼脂培养基中加入75~100μL/mL的苯丙咪唑,以保持鉴定叶片非感染部位叶色为绿色;鉴定期间培养温度以25~30℃为宜;接种用菌液浓度不低于3×105CFU/mL;当菌液浓度较高时,潜育期的变化对温度不敏感,为5~6 d;当菌液浓度与温度同时降低时,则潜育期延长。     

柑桔溃疡病菌在武汉地区越冬期适存性的研究

采用栽种易感病的脐橙苗实测法和以供检材料的浸提液或高速离心浓缩浸提液针刺接种脐橙叶片的致病性检测方法,对柑桔溃疡病菌在武汉地区越冬期的适存性进行了研究。结果表明：柑桔溃疡病菌在武汉地区主要病株的病斑内越冬,也有少量能以潜伏侵染的方式在病株的未显症叶片内越冬,成为翌年的初次侵染来源;病原菌不能在田间的病落叶、土壤和杂草上越冬。     

大豆灰斑病菌菌丝块离体叶接种快速鉴定方法的建立

[目的]建立一种室内可重复、快速准确鉴定大豆对灰斑病抗性的方法。[方法]利用大豆灰斑病1号和7号生理小种及6种不同抗性的大豆品种为材料,研究并建立了大豆灰斑病抗性的菌丝块接种快速鉴定方法。[结果]在28℃、12h光照与12h黑暗交替的条件下,Minimal培养基生长的菌丝块接种抗感大豆叶片,菌斑面积明显不同,且鉴定结果与已知抗感品种报道的灰斑病抗性一致。[结论]菌丝块离体叶接种鉴定具有不受生育期和环境条件限制、可重复性强的特点,是大豆灰斑病抗性室内鉴定的一种有效方法。     

应用斑点免疫技术快速检测柑桔溃疡病菌

应用改进的斑点免疫技术在国产微孔滤膜上检测柑桔溃疡病菌（Ｘａｎ－ｔｈｏｍｏｎａｓａｘｏｎｏｐｏｄｉｓｐｖ．ｃｉｔｒｉ）。结果表明，靶细菌检测下限为１×１０４细胞／ｍｌ，柑桔无症材料浸出液稀释（１２８倍）仍可检出。经柑桔叶面腐生黄单胞及近缘细菌交叉吸收，提高了多克隆抗血清特异性，能有效地避免假阳性。３种ＨＲＰ－标结结合物的效果为ＨＲＰ－ＳｐＡ＞ＨＲＰ－ＩｇＧ（鼠抗兔）＞ＨＲＰ－ＩｇＧ（羊抗兔）。封闭液采用ＴＢＳ＋０．１％曲拉通或０．５％吐温２０，吐温８０均可获得白色滤膜背景。对全国８省３８县５１８个柑桔无症样品ＤＩＡ检验结果，平均带菌率３１．８２％，符合实际病情。     

细菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp.citrulli对黄瓜侵染及离体叶片接种方法的研究

由Acidovorax avenae subsp. citrulli引起的细菌性果斑病对西瓜、甜瓜等葫芦科作物是一种毁灭性病害.对分离自发病甜瓜的细菌性果斑病菌供试菌株FC440的抗生素抗性特点、对黄瓜(Cucumis sativus L.)的致病性以及黄瓜离体叶片接种发病条件等病原生物学特性作了研究.结果表明:FC440对氨苄青霉素,氯霉素,壮观霉素,利福平和潮霉素具有抗性,对卡那霉素和四环素敏感,可侵染重要的经济作物黄瓜.离体叶片接种实验显示,不同缓冲液制备的菌悬液在供试黄瓜叶片上形成病斑存在差异,磷酸盐缓冲液(5和10 mmoL/L PBS)悬浮菌液发病较水悬浮菌液快,104 cfu PBS悬浮菌的接种量和107 cfu水悬浮菌的接种量分别可致黄瓜离体叶片在接种8 d内形成典型症状;病斑在划伤条件下以及在老龄叶片上形成快;以5 mmoL/L PBS(pH 7.4) 悬浮,106 cfu的接菌量划伤接种第一、二真叶期叶片,是离体黄瓜叶片上形成病斑的较好的接种方法.这些研究结果为利用该菌的抗生素抗性特点开展其遗传转化工作、离体接种以便规模筛选致病突变体以及研究其与寄主植物互作机制等方面的工作奠定了基础.     

3种杀菌剂对柑桔溃疡病菌的室内毒力测定

为筛选防治柑桔溃疡病的高效药剂,将23种常见商品杀菌剂分别稀释成200 mg/L,采用喷雾法进行室内抑菌试验,选择3种初筛抑菌效果较好的药剂进行室内毒力测定.结果表明,噻霉酮、农用链霉素、溴菌腈的抑菌效果较好,其EC_(50)分别为46.59、86.18、102.91 mg/kg,噻霉酮的毒性最强.结合供试药剂有效成分和作用机理的比较,确定农用链霉素效果最佳.     

利用qPCR技术检测柑橘溃疡病菌的灵敏度分析

以常规PCR为对照,分析了实时荧光定量PCR(q PCR)检测柑橘溃疡病菌DNA和柑橘溃疡病菌菌量的灵敏度,并对接种柑橘溃疡病菌后的冰糖橙样品进行了动态监测。结果显示,q PCR检测柑橘溃疡病菌DNA和柑橘溃疡病菌菌量的灵敏度比常规PCR高1~3个数量级,且常规PCR对柑橘溃疡病菌DNA的检测会受到寄主植物DNA的干扰,q PCR不受寄主植物DNA影响;对接种后冰糖橙样品的分析,q PCR即时就能检测到柑橘溃疡病菌,并能实时观察到柑橘溃疡病菌在寄主叶片的增殖情况,而常规PCR要接种后2 d才能检测到柑橘溃疡病菌。     

Comparison of PCR,DIA and Pathogenicity Assay for Detection of Xanthomonas axonopodis pv.citri,the Causal Agent of Citrus Bacterial Canker Disease

Polymerase chain reaction (PCR) approach based on newly designed primers, JYF5/JYR5, was applied for specific detection of Xanthomonas axonopodis pv.citri(Xac). The efficiency and reliability of PCR method were compared with dot immunobinding assay (DIA) and classical pathogenicity test techniques for detecting suspensions of pure cells of Xac and soaking sap of citrus tissues. Detection sensitivity of PCR was about 4.5 cells or 1.56 pg target DNA per reaction which was higher than that of DIA (ca. 450 cells per dot).These three techniques (PCR assay, DIA and Pathogenecity test) could always detect Xac from symptomatic citrus samples. Different performances were obtained from citrus materials without symptoms, and the positive detection frequency was PCR, DIA and pathogenicity test.     

柑橘溃疡病拮抗放线菌筛选及其抑菌机理研究

[目的]明确保存的放线菌资源对柑橘溃疡病菌的抑制作用和抑菌机理.[方法]通过平板对峙培养法筛选对柑橘溃疡病菌Xanthomonasaxonopodis pv.citri）有抑制作用的放线菌菌株,并采用电导率法、考马斯亮蓝法和斐林试剂法测定拮抗菌株发酵滤液对溃疡病菌的影响.[结果]筛选出3个对柑橘溃疡病菌有拮抗作用的放线菌菌株,抑菌圈直径达42.0～60.0 mm,且该3株放线菌发酵液能提高溃疡病菌菌液电导率,增加还原糖和蛋白质含量.[结论]3株拮抗菌能破坏柑橘溃疡病菌细胞膜完整性,增加细胞膜通透性,引起细胞质外渗.     

湖北柑橘溃疡病菌的PCR鉴定及序列分析

选用引物JYF5/JYR5对湖北疑似柑橘溃疡病标本进行了PCR鉴定和确证,同时改进了DNA抽提方法,优化了PCR条件,并与南京柑橘溃疡病菌株进行分子克隆比较.结果表明,南京菌株NJ-XC分离物扩增片段与Silva等报道的相应序列相似性为99%(411/413);湖北标本菌株HB-X0扩增片段与报道的相应序列相似性为100%(413/413),二者存在一定的差异.此外发现引物JYF5/JYR5能扩增叶表的根癌土壤杆菌,其片段大小为575bp.     

一品红细菌性叶斑病菌在中国的风险分析

[目的]对一品红细菌性叶斑病菌在我国的风险性进行分析,明确其危险性。[方法]根据国际植物检疫措施标准（ISPM）规定的有害生物风险性分析（PRA）程序和全国农业植物检疫性有害生物评估指标体系,对一品红细菌性叶斑病菌在我国的风险性进行定性、定量分析。[结果]其综合风险值R为2.18,具有高度危险性。[结论]根据定性和定量分析结果,提出了相应的风险管理措施方案,并对这些方案的有效性、可行性和对贸易的影响进行了分析和评价。     

几种杀菌剂对柑桔溃疡病的生物活性

为筛选防治柑桔溃疡病的有效药剂,按大田推荐使用浓度,用抑菌圈法测定17种非铜药剂和5种含铜药剂对柑桔溃疡病的毒力,并研究7种非铜药剂田间防治效果。结果表明,代森锰锌、福美双、福美双.溴菌腈、农用链霉素、金核霉素和琥胶肥酸铜.乙磷铝.硫酸锌抑菌作用最强,其次为福美双.福美锌、大蒜素、络氨铜.络氨锌和盐酸吗啉胍.乙酸铜,过氧乙酸、噻唑锌、春雷菌素、中生菌素、琥珀酸铜和噻菌铜有微弱的抑菌作用,百菌清、多菌灵、苯醚甲环唑、叶青双、复硝酚钠和井冈霉素无抑菌作用。大田试验结果表明,30%金核霉素WP 500 mg/L和72%农用链霉素WP 200 mg/L处理对柑桔溃病的防效分别为76.34%和74.94%,显著优于其它药剂处理;80%代森锰锌WP 2000 mg/L、50%福美双WP 400 mg/L和50%福美双.溴菌腈WP 500 mg/L处理对柑桔溃病的防效分别为70.36%、66.55%和69.37%,与对照含铜药剂20%噻菌铜SC 67 mg/L处理无显著差异;大蒜素和叶青双对柑桔溃病防效较差,6%大蒜素EC 120 mg/L和20%叶青双WP 400 mg/L处理对柑桔溃病的防效分别为41.84%和21.8...     

木薯细菌性枯萎病病原菌致病力差异及其胞外酶活性的研究

为寻找与致病性有关的生化因子,在含有酶基质的培养基上测定12株木薯细菌性枯萎病菌(Xanthomonas axonopodis pv.manihotis Vauterin,Kertrin& Swings,简称X am)5种胞外酶的活性,并结合菌株接种后的病斑平均面积进行相关性分析.结果显示,供试菌株的胞外淀粉酶与病斑面积呈正相关,其酶活性与病斑面积的回归方程为:y=0.0426x+4.9522,r值为0.9789,菌株的胞外酯酶和纤维素酶活性与病斑面积相关性不明显,没有检测到菌株胞外蛋白酶和胞外果肢酶的活性.菌株胞外淀粉酶在致病过程中起着比较重要的作用.