E.coli Nissle 1917(EcN)curli菌毛和鞭毛对其生物被膜形成的影响

E.coli Nissle 1917是被广泛认可的益生菌,可以通过形成生物被膜定殖在肠道中抑制沙门氏菌等病原菌的生长.通过λ-Red同源重组系统构建curli菌毛合成基因(csgA)和鞭毛调控基因(hnsA)突变菌株,探究curli菌毛和鞭毛对EcN生物被膜形成的影响.结果表明,curli菌毛对EcN运动能力以及生物膜形成没有影响;EcNΔhnsA菌株的运动能力下降,生物被膜含量升高,说明鞭毛通过促进EcN运动,抑制细菌的附着,从而抑制生物膜的形成.     

黄芪多糖对藏系羊免疫力水平的影响

为探究不同水平的黄芪多糖对藏系羊血清免疫指标的影响,试验选择60只藏系羊,对照组饲喂基础饲料,3个试验组在基础饲料的基础上分别添加0·1,0·2,0·4 g/kg黄芪多糖。试验期为30 d。结果表明：0·2 g/kg和0·4 g/kg黄芪多糖组藏系羊血清中的免疫球蛋白A和免疫球蛋白G含量显著高于对照组（P <0·05）;IL-6和TNF-α含量显著低于对照组（P <0·05）;黄芪多糖组藏系羊血清中的IL-10含量均显著高于对照组（P <0·05）。综上,在藏系羊生产中添加使用适量的黄芪多糖可以提高其机体的体液免疫和细胞免疫水平,且黄芪多糖的适宜添加量为0·2～0·4 g/kg。     

棉酚对多浪羊淋巴细胞凋亡的影响

通过棉酚对多浪羊淋巴细胞的研究,探索棉酚体积分数对淋巴细胞的影响.主要用细胞培养、瑞氏-吉姆萨染色、DNA电泳等方法观察棉酚对多浪羊淋巴细胞的凋亡效应.结果表明:当细胞培养液中棉酚体积分数为0.071mol/L,培养淋巴细胞8h后,可抑制多浪羊淋巴细胞的增殖,并且促进其凋亡.     

不同精料补饲水平对藏羊生长及效益的影响

[目的]为藏羊选择适宜的精料添加量。[方法]选用1岁左右、体重接近的藏绵羊30只,随机分为3组。以青干草为基础日粮,150、300、450 g/d 3种精料水平对各组藏羊进行补饲育肥,采用单因子分组设计,研究精料补饲水平对藏羊采食量、饲料转化效率及经济效益的影响。[结果]藏羊日采食量、日增重均随精料补饲水平的提高而增加,而对青干草的采食量略有下降趋势;不同精料补饲水平下,育肥后期藏羊日增重均呈下降趋势。精料和日粮转化效率随精料补饲量的提高呈二次曲线变化。精料和日粮转化效率、经济效益均以300 g/d精料处理组为最高。[结论]藏羊育肥时间以45~50 d为宜,精料添加量以300 g/(只.d)最好。     

大蒜素对藏羊瘤胃发酵及甲烷产量的影响

本文研究了大蒜素对藏羊瘤胃液体外培养青藏高原高寒草甸4期牧草体外发酵及甲烷产量的影响。选取2只健康、年龄相近的瘘管藏羊为瘤胃液供体,采用体外产气法,全年4期牧草作为发酵底物,分别添加0、0.5%、1.0%、1.5%和2.0%的大蒜素,筛选出最佳添加量。结果表明,各期累积产气量随大蒜素添加量的增多均呈下降趋势,1.5%和2.0%组均显著下降,甲烷产量均显著降低;对各期p H影响不显著;大蒜素1.0%以上时,枯草期NH3-N浓度下降显著,返青期2.0%时下降显著,青草期无显著变化,返青期和枯黄期0.5%和1.0%时升高显著;大蒜素0.5%以上时,枯草期短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFA)下降显著,返青期2.0%时下降显著,青草期无显著变化,枯黄期1.0%以上时下降显著;大蒜素2.0%时,枯草期、返青期和枯黄期有机物质消化率(organic matter digestibility,OMD)下降显著,青草期无显著变化;大蒜素0.5%以上时,枯草期代谢能(metabolic energy,ME)下降显著,返青期、青草期和枯黄期均无显著变化;各期泌乳净能(net energy of lactation,NEL)仅枯草期大蒜素为2.0%时下降显著,其余组无显著变化。大蒜素作为藏羊日粮添加剂的适宜添加量为0.5%~1.0%。     

日粮蛋白水平对育肥藏羊瘤胃细菌多样性的影响

为了研究不同蛋白水平对育肥藏羊瘤胃细菌多样性的影响，选取健康且体况相近的3月龄早期断奶藏羊公羔15只，平均体重为(（22.05 ± 2.06) kg，随机分为3组，日粮粗蛋白水平分别为10.08%（Ⅰ组），12.84%（Ⅱ组）和14.97%（Ⅲ组）。预试期7 d，正试期112 d。饲养实验结束后对试验羊进行屠宰并于不同位点采集瘤胃液样品，测定瘤胃细菌的相对丰度。结果表明：（1）Shannon指数和Simpson指数各组之间无显著性差异（P > 0.05），ACE指数和Chao l指数Ⅰ组显著高于Ⅱ组和Ⅲ组（P < 0.05）。（2）门水平下，拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes）为瘤胃细菌的优势菌门，且均随日粮蛋白水平提高而显著增加（P < 0.05）；变形菌门（Proteobacteria）和放线菌门（Actinobacteria）相对丰度Ⅱ组显著较高（P > 0.05）。（3）科水平下，毛螺菌科（Lachnospiraceae）相对丰度较高，但各组之间差异不显著（P > 0.05）； 瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）相对丰度Ⅱ组和Ⅲ组显著高于Ⅰ组（P < 0.05）；韦荣氏菌科（Veillonellaceae）相对丰度Ⅲ组显著高于Ⅰ组（P < 0.05）。（4）属水平下，Prevotella（普雷沃氏菌属）的相对丰度Ⅲ组显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P < 0.05），瘤胃球菌属（Ruminococcus）Ⅱ组相对丰度显著较高（P < 0.05）。 （5）PCA分析显示各组间瘤胃细菌结构差异不明显，但采食低蛋白水平日粮的藏羊瘤胃细菌相似度更高，能更好聚类在一起。综上可知，不同蛋白水平对育肥藏羊瘤胃细菌多样性无显著影响，但可影响其丰富度；同时随着日粮蛋白水平的提高，厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）相对丰度显著增加，普雷沃氏菌属（Prevotella）在日粮蛋白水平为14.97%时更适宜生长，瘤胃球菌属（Ruminococcus）则在日粮蛋白水平为12.84%时活性更高。     

藏羊传染性胸膜肺炎的诊治体会

2011年10月对某牧户家2011年10月,玉树州畜牧兽医工作站接到某牧户家200多只藏羊中有40只羊发生传染性胸膜肺炎,死亡率较高,进行了诊治.有如下体会:患羊体温升高至41℃~42℃,精神沉郁,呼吸急促,咳嗽,鼻孔流出脓性黏膜,呈现铁锈红色.肺部听诊呼吸音减弱或消失,羊只有痛感,叩诊肺部有浊音或实音.可视黏膜充血、发绀、羞明流泪,眼角有黏膜.后期病羊无法站立,呼吸极度困难,最终窒息而亡.剖检见肺脏有明显病变,颜色变浅,表面不光滑,切面呈大理石样,2~5 d死亡.早期用恩诺沙星和泰乐菌素效果较好,后期基本无治疗价值.     

青海省藏羊链球菌病的综合预防措施研究

链球菌病是一种严重威胁绵羊和山羊健康的疫病.作为绵羊的一种,藏羊也很容易受到链球菌病的感染.临床认为,链球菌病的发病原因主要是天气寒冷,特别是青海省的海拔较高,而且冬季较长,最低温度可达零下20℃,更易发生链球菌病.因此,深入分析研究青海省藏羊链球菌病的防治措施势在必行.     

给药途径对虫草抗E.Tenella活性的影响

本研究以雏鸥E.Tenella病为模型,存活率、增重率、盲肠病变值、盲肠E.Tenella卵囊值为观察指标,美国默克公司提出的抗球虫指数为判定标准,探讨了给药途径对虫草(均为30mg/kg)抗E.Tenella活性的影响。结果观察到:滴鼻、皮下注射和灌服的抗球虫指数分别为163、167和148,均有抗E.Tenella活性。皮下注射和滴鼻为中效,灌服为弱效。     

牦牛、藏羊5种疾病的流行病学调查

青海地区是我国畜牧业发展的重要区域,牦牛及藏羊是主要养殖牲畜。但青海地区的海拔比较高,紫外线强,自然环境恶劣,牲畜发病率相对来说较高。而在养殖业发展过程中,如果牲畜的发病率比较高,将会增加养成成本,损害养殖户的经济效益。因此,在养殖业发展过程中,如何有效地做好疾病防御工作,提高牲畜品质是养殖业发展的关键所在。本文将以藏区的牦牛和藏羊5种疾病为例,对其流行病学进行调查和分析,探讨相关疾病的防治策略。     

食源性大肠杆菌的PCR检测

为了将PCR技术更好地应用于食品安全检测,利用多重PCR对大肠杆菌uidA基因和7种毒理基因进行扩增,并对人为污染大肠杆菌的水和牛奶进行普通和实时定量PCR限度检测。结果发现,2组多重PCR反应即可完成uidA和7种毒理基因的检测;普通PCR和实时定量PCR检测限度相同,对人为污染水检测限度为2.8×10 cfu/mL, 对人为污染牛奶的检测限度为2.8×10⁴ cfu/mL。     

利用Red重组系统敲除APEC毒力岛irp2基因

应用质粒pKD46介导的Red同源重组系统,以质粒pKD3为模板,设计irp2基因序列敲除引物,引物5'端有51 bp的拟敲除基因的同源臂,3 '端为扩增引物,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因,通过第1次同源重组将拟敲除的irp2基因替换为氯霉素抗性基因,再通过重组酶质粒pCP20在FRT位点发生第2次同源重组,消除抗性基因.结果表明,利用该重组系统成功敲除了禽致病性大肠杆菌HPI毒力岛irp2基因.为深入研究irp2基因在禽致病性大肠杆菌致病过程中所发挥的作用打下基础.     

球磨生物炭的性质及其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的毒性效应研究

为研究球磨生物炭的微生物毒性效应,采用元素分析、比表面积分析(BET)、扫描电子显微镜(SEM)及傅立叶红外(FTIR)表征等手段研究了500℃裂解小麦秸秆生物炭(BC)和球磨生物炭(BM)的性质,采用毒性暴露实验分析了不同浓度(0、10、20、50、100、200 mg·L~(-1))下两种生物炭对大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 25922和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 25923的毒性效应。结果表明:BC的比表面积为98 m~2·g~(-1),而BM的比表面积提升到309 m~2·g~(-1),球磨可以增加生物炭中含氧官能团的数量;在0.9%NaCl溶液中,添加10 mg·L~(-1)的BM时,S.aureus存活率为90.1%,E.coli存活率为98.2%。当浓度增大到200 mg·L~(-1)时,S.aureus的存活率降低为23.5%,E.coli的存活率仍可达91.8%;而在LB培养基中,BM浓度为200 mg·L~(-1)时,S.aureus的存活率增加到58.1%;相同条件下,BM对微生物的毒性显著强于BC,这可能与粒子大小差异相关。而BM对革兰氏阳性菌S.aureus的毒性显著强于革兰氏阴性菌E.coli,这可能与E.coli产生的胞外聚合物(EPS)有关;添加活性氧自由基(ROS)消除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)发现,氧化损伤是造成S.aureus细胞死亡的主要原因,但是纳米颗粒对细胞的机械碰撞等其他因素也有可能是BM产生毒性的原因。研究表明BM对微生物具有一定的环境毒性效应,因此在BM使用过程中应注意其可能的环境影响。     

中药复方对断奶幼兔大肠杆菌-魏氏梭菌混合型腹泻的预防效果

旨在探究中药复方预防幼兔大肠杆菌和魏氏梭菌混合型腹泻的效果。32只断奶肉兔随机分为对照组、攻毒组(Ⅰ)、0.5%中药组(Ⅱ)、1.0%中药组(Ⅲ),饲喂7 d后,对照组腹腔注射生理盐水,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组注射混合菌液。记录各组攻毒后0～48 h的腹泻率;ELISA测定IgM、IgA、SIgA、hs-CPR水平;16S rDNA扩增子测序补充盲肠菌群水平与多样性。结果表明,Ⅱ组可显著抑制有害菌肠杆菌属水平,同时显著提高有益菌拟杆菌属、Akkermansia属的水平;Ⅱ、Ⅲ组幼兔腹泻率远低于Ⅰ组;Ⅲ组IgM、IgA、SIgA、hs-CPR水平均极显著高于Ⅰ组,Ⅱ组IgM、SIgA、hs-CPR水平极显著高于Ⅰ组、IgA水平显著高于Ⅰ组。饲粮中添加0.5%的中药可有效预防幼兔大肠杆菌-魏氏梭菌混合型腹泻,可能与调控肠道菌群有益菌和有害菌水平有关。     

五谷虫蛋白粗提液对牛源致病性Escherichia coli O_1和E.coli O_(78)体外抑菌作用

为研究五谷虫蛋白粗提液对Escherichia coli O_1和E.coli O_(78)的体外抑菌作用,采用试剂盒测定五谷虫粗提液蛋白含量;牛津杯法测定蛋白粗提液对牛源病源性E.coli O_1和E.coli O_(78)的抑菌圈直径;通过二倍稀释法测定蛋白粗提液对2种细菌的最低抑菌浓度(MIC);平板法测定最低杀菌浓度(MBC);酶标比浊法测定粗提液对2种细菌的24h生长曲线、细胞膜通透性以及碱性磷酸酶(AKP)的含量。研究表明:1)五谷虫蛋白粗提液蛋白质量浓度为0.680mg/mL;粗提液对E.coli O_1和E.coli O_(78)的抑菌圈直径分别为(25.09±0.62)和(20.96±0.48)mm,MIC分别为15.625和31.250mg/mL,MBC为62.5和125mg/mL,传统中药水煎剂和提取缓冲液没有体外抑菌效果。2)粗提液能影响E.coli O_1和E.coli O_(78)的生长曲线,增加细菌细胞膜和细胞壁通透性。由此可见,蛋白粗提液对E.coli O_1和E.coli O_(78)均有体外抑菌效果,且对E.coli O_1的体外抑菌效果优于E.coli O_(78)。     

禽大肠杆菌毒力岛主要摄铁基因及生物膜的检测

以临床病禽分离17株E.coli为研究对象,分别检测分离菌株的毒力岛中irp2、irp3、irp4、irp5和生物膜形成能力。先用irp2 PCR扩增检出7株致病性大肠杆菌,并对其进行ERIC-PCR分型,结果分为2个类型。又对分离株进行irp3、irp4和irp5基因检测,结果分离株中irp2、irp3、irp4和irp5的阳性检出率分别为41.2%、64.7%、29.4%和35.3%;最后对分离株进行生物膜形成能力的检测,结果携带irp2的阳性菌株都有较强的生物膜形成能力。结果提示,禽致病性大肠杆菌的HPI中irp2与生物膜的形成有一定的关联。     

一株可裂解耐黏菌素大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及全基因组分析

为研究耐黏菌素大肠杆菌的噬菌体治疗方法,本研究以耐黏菌素大肠杆菌为宿主菌,采用双层琼脂平板法从山东烟台某养鸡场污水样中分离纯化得到裂解性噬菌体SDYTW1-F1-2-2。通过透射电镜观察,最佳感染复数,一步生长曲线,温度稳定性,酸碱度稳定性等生物学特性测定,并对其进行全基因组测序分析。结果表明：1）噬菌体SDYTW1-F1-2-2噬菌斑呈现透亮,外周无晕圈,形态学观察显示其具有可伸缩性尾鞘。2）生物学特性分析表明,噬菌体最佳感染复数为0.1,潜伏期为50 min,爆发期为40 min,爆发量为（331±9）PFU/cell。在温度4～40℃,pH为4～12的环境下,噬菌体活性较为稳定。3）通过噬菌体全基因组测序及核酸类型鉴定显示,该噬菌体基因组全长为74 752 bp,双链DNA,GC含量42.1%。在噬菌体基因组中共鉴定出121个编码蛋白（CDS）,包括结构组成、DNA代谢与复制和包装以及细菌裂解相关的功能基因,发现一个tRNA基因,且未检测到如stx-1等致病性基因和mcr-1等耐药基因相关的基因。综上,噬菌体SDYTW1-F1-2-2裂解谱较宽,具有良好的酸碱性、热稳定性以及安全...     

林麝肠源和圈舍土源大肠埃希菌的分离鉴定及其耐药基因的检测

为了解林麝肠源大肠埃希菌耐药表型和耐药基因及其与圈舍土源大肠埃希菌的关系。从茂县、都江堰、理县、陕西、泸定、汉源6个林麝养殖场采集66份林麝新鲜粪便及养殖场20份土壤样本,通过分离纯化、生化试验、16S rRNA基因序列分析鉴定,得到59株林麝肠源大肠埃希菌和12株土源大肠埃希菌,并对其进行药敏试验。据其结果,设计相关12对引物,采用PCR方法对所有菌株的耐药基因进行检测。药敏试验显示,林麝肠源大肠埃希菌对青霉素、庆大霉素、链霉素、四环素、氯霉素具有较强耐药性,在所有菌株中所占比例分别为81.36%、5.08%、13.56%、20.34%和6.78%;土源大肠埃希菌对除氯霉素以外的同种类药物具有较强耐药性,在所有菌株中所占比例为91.67%、16.67%、16.67%、25.00%。PCR结果显示,林麝肠源大肠埃希菌7个基因检出率较高;而土源大肠埃希菌3个基因检出率较高。对于同一种耐药基因而言,林麝肠源大肠埃希菌耐药基因检出率普遍高于土源大肠埃希菌,但从耐药基因检测整体结果来看,林麝肠源大肠埃希菌与土源大肠埃希菌又存在一致性,这说明二者之间可能存在某种相互影响的关系。     

西藏牦牛源大肠杆菌分离株的致病性及遗传进化分析研究

为研究西藏牦牛源大肠杆菌的致病性及其遗传进化情况,了解其与其他动物源大肠杆菌的亲缘关系,采集西藏牦牛腹泻粪便240份,采用微生物学方法对其进行细菌的分离培养、血清型鉴定和致病性研究,并运用分子生物学方法对其进行16SrRNA鉴定、测序和系统发育分析。结果表明:获得的16株牦牛致病性大肠杆菌分离株中:3株与猪源致病性大肠杆菌亲缘关系较近;5株与禽源致病性大肠杆菌亲缘关系较近;2株与犊牛源大肠杆菌亲缘关系较近;4株与牛源大肠杆菌亲缘关系较近;1株牦牛源致病性大肠杆菌单独形成一个较远的分支;1株与痢疾杆菌和人源出血性大肠杆菌亲缘关系较近,可能成为对人类造成潜在危险的病原菌。西藏牦牛源大肠杆菌与牛源、禽源、猪源、人源大肠杆菌的之间亲缘性很近,存在跨种间传播风险。该种西藏牦牛源大肠杆菌动物致病试验表明,致死率高达95%,应引起高度重视。     

牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性分析

【目的】了解牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药特征,为临床合理用药提供理论依据。【方法】从不同牛场采集腹泻犊牛粪样分离鉴定大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星3种氟喹诺酮类药物的最小抑菌浓度（MIC）,PCR检测质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）基因（qnrA、qnrB、qnrD、qnrS、aac（6′）Ib和qepA基因）及喹诺酮耐药决定区（QRDR）突变（gyrA和parC基因）,并选择2株携带PMQR基因的大肠杆菌经恩诺沙星诱导后检测QRDR的gyrA和parC基因突变。【结果】分离鉴定得到75株大肠杆菌,其中60.00%的菌株对至少2种FQs耐药,40.00%的菌株对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药,且对恩诺沙星的耐药程度较为严重。75株大肠杆菌均未检测到qnrA、qnrD和qepA基因,但检测出qnrS、aac(6′)Ib亚型aac(6′)-Ib-cr和qnrB基因,61.33%的菌株至少携带1个PMQR基因,其中以qnrS和aac(6′)-Ib-cr最为常见。58.67%的大肠杆菌发生了QRDR突变,主要突变方式为GyrA:(Ser⁸³Leu＋Asp⁸⁷Asn)＋ParC:Ser⁸⁰Ile,发生突变且携带PMQR基因的大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药。恩诺沙星诱导后,PMQR阳性菌的gyrA基因发生5处碱基突变,PMQR阴性菌无碱基突变。【结论】大肠杆菌耐氟喹诺酮类药物主要与QRDR突变密切相关,因此兽医临床上应合理使用氟喹诺酮类药物来减缓大肠杆菌的耐药性。