甘蔗原生质体RNA提取条件和方法的优化

为了获得高产量和高纯度的甘蔗原生质体RNA,本研究以新台糖22号（ROC22）和桂糖28号（GT28）甘蔗原生质体为材料,探究了渗透压和原生质体活力对甘蔗原生质体RNA提取效果的影响,并比较了Trizol法、改良Trizol法、改良CTAB法、试剂盒法4种RNA提取方法。结果表明：原生质体渗透压与RNase活性呈显著正相关,原生质体活力与RNase活性呈极显著负相关;RNase活性越高,RNA提取效果越差;使用0.5 mol/L的甘露醇作为渗透压调节剂可获取活力最高的甘蔗原生质体;原生质体活力为70%和90%时所提的RNA完整性好且纯度高,符合后续分子实验的需求,原生质体活力为90%时,RNA产量最高。因此,需要提取甘蔗原生质RNA时,至少需要保证原生质体的活力在70%以上,且原生质体活力越高,RNA的产量越高;采用改良Trizol法,可以大量制备能满足后续分子实验的完整性好且纯度高的RNA,利用该条件和方法,可以确保获得大量高质量的甘蔗原生质体RNA。本研究结果为甘蔗体细胞融合育种过程中的分子生物学研究提供了方法和技术支撑。     

两种不同甘蔗基因组DNA提取方法的比较

采用改良CTAB法和SDS法提取甘蔗嫩叶与正一叶基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳与紫外光吸收检测,证明SDS法能获得高质量的DNA,适合分子生物学操作的要求,为后续甘蔗遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究奠定基础。     

球磨机高通量提取甘蔗叶片DNA研究

简便快速地获得高质量、高纯度的DNA模板是进行分子遗传学研究和大批量分子检测的基础。常用的液氮手工研磨提取DNA方法存在着耗时、费力、污染等诸多不足。利用从美国引进的球磨机,根据甘蔗叶片的特点,采用国产钢珠,通过优化实验步骤,建立了一种高通量制备甘蔗叶片DNA的方法,其中,叶片快速研磨使用不锈钢珠的直径为4 mm,对叶片进行液氮预冻,时间为30～45 min,叶片用量为50～100 mg,打磨时间为30～40 s。这种方法缩短了提取DNA的时间,提高了效率,而DNA质量与经典方法相当,能够满足分子生物学研究的需要。     

玉米叶片基因组快速提取方法研究

SSR(Simple Sequence Repeat)分子标记技术已经成为玉米常规育种某些性状辅助选择的重要手段,需要对大量个体样本进行标记分析。高效、快速提取植物组织基因组DNA是关键的技术环节。本研究以高油玉米回交世代群体25～30d单株幼叶为材料,建立以EDTA、CTAB、KCl为主要试剂,结合组织研磨棒液氮研磨为主要步骤的基因组DNA快速提取方法,并探讨了将提取的DNA应用于SSR分子标记辅助选择的可行性。     

甘蔗基因组DNA提取方法的比较

采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种高质量去除多糖、色素和蛋白质等杂质的有效方法,所提取的DNA适合于甘蔗各分子生物学研究。     

从茶树鲜叶中提取RNA的方法

本文是在前人提取RNA的方法上略加改进，从而设计出一种高效的从茶树鲜叶中提取RNA的方法该方法同时也适用于其它高等植物，具有操作简便，耗资少等优点，特别适用于经费相对较少的实验室。     

不同提取方法在橡胶树总RNA提取中的应用研究

总RNA的纯度和完整性对橡胶树分子生物学实验至关重要。为探索更适合橡胶树总RNA的提取方法,本文以巴西橡胶树无性系热研7-33-97叶片为试材,利用凝胶电泳、紫外吸光值测定、RT-PCR检测等方法对CTAB-LiCl法和CTAB-NaAc法提取的总RNA进行比较。结果显示：CTAB-LiCl法提取RNA不仅耗时产率低,且RNA溶液中的Li+和Cl-影响反转录效率。CTAB-NaAc法提取叶片的总RNA经DNaseⅠ处理后凝胶电泳条带完整,产率高,无DNA污染;A260/A280比值为2.03,A260/A230比值为1.96;反转录的cDNA 经PCR检测质量较好。另用CTAB-NaAc法对橡胶树的花、树皮、胚、根进行总RNA的提取,均能得到较高质量的总RNA。     

甜菜基因组DNA三种提取方法的对比研究

采用CTAB法、SDS法、蛋白酶K法分别提取甜菜基因组DNA,并对得到的DNA进行含量测定、PCR扩增效果鉴定、限制性内切酶酶切。比较3种方法的提取效果,结果表明:CTAB法提取的DNA产量最高,蛋白质和多糖含量低,PCR结果和酶切结果均比较好;SDS法提取的DNA产量也较高,PCR结果不如CTAB法效果好;蛋白酶K法提取的DNA产量最低,且含有较多的RNA,PCR扩增无结果。所以,CTAB法是适合于甜菜基因组DNA提取的最佳方法。     

一种简单高效的真菌总RNA提取方法

介绍一种真菌总RNA的提取方法,此法无需特殊试剂和贵重仪器设备,可有效地排除真菌中大量存在的RNase以及多糖的干扰。此方法在变性剂存在的条件下,用酚/氯仿/异戊醇抽提,除去DNA和蛋白质,再用醋酸钠和无水乙醇沉淀RNA,去除多糖。用该方法提取的RNA样品,经核酸蛋白测定仪检测和1%琼脂糖凝胶电泳检测,RNA的均一性和完整性很好。     

茶树基因组DNA提取纯化技术研究

本研究以福鼎大白茶，云南在叶种为材料，设计了六种茶树基因组DNA提取纯化方案，以纯品DNA的OD260／OD280比值1．8为标准，参考基因组DNA的制率及分子量大小，确定了茶树基因组DNA最佳提取纯化方法，实验表明，不溶性聚乙烯吡咯烷酮和饱和酚对提高茶树基因组DNA纯化质量是十分有益的。     

2种提取椰子树RNA方法的比较研究

椰子树组织中富含多糖和酚类化合物,为了获取高质量的RNA,笔者以椰子树叶片和根部为材料,比较分析CTAB法和SDS法提取RNA的效果。结果表明：CTAB法提取椰子树组织的总RNA效果较好,能有效克服酚类物质和多糖对RNA提取的影响。经OD值检测和电泳检测,总RNA的28 S和18 S条带清晰可见,纯度较高,完整性好,无明显降解,以此RNA为模板进行RT-PCR反应,能获得特异条带,表明该RNA完全可以用于后续的分子生物学操作。     

SDS法提取石斛基因组DNA的研究

以密花石斛(Dendrobium densiflorum Lindley ex Wallich)为研究试材,对植物SDS方法提取基因组DNA中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析。结果表明：不同的SDS缓冲液配制方法提取效果差异较大,Wang's配方产率及纯度都较高;石斛花苞的DNA提取产率较叶片高,但纯度较叶片低;提取过程中,适宜的水浴时间当为30～40 min,过短DNA产率下降,过长会引起DNA的降解,或最后产物中增加     

甘蔗染色体组构成系统演化的研究

用核型分析方法对甘蔗祖亲种、含两物种血缘栽培种、含三物种血缘栽培种、含四物种血缘栽培种染色体组型的系统演化特征进行了研究．从祖荣代野生种向高代杂交栽培种（含两物种血缘以上）系统演化的基本特征是：染色体数目、异染色质含量相对增加,易位现界普遍存在,中部着丝点染色体所占比例逐渐减少,核型从对称向不对称方向演化。野生种和栽培种的染色体数目分别为2n=68－92和2n=90－120;染色体约对长度为1．56－6．38μm,相对长度为1．03－4．01;染色体主要为中部着丝点染色体,少数为亚中部及亚端部着丝点染色体,未见端部着丝点染色体;除春尼为1B核型外,其余6个品种（印度割手密、墨车里本、POJ2875、Co419、F134和ROC10）全为2B类型．分别以印度割手密和春尼基因组DNA为探针,对栽培种Co419进行染色体原位杂交,结果表明,Co419（2n＝114）染色体组构成中,有6条来源于割手密种,12条来源于印度种,96条为热带种或种间重组染色体．      

不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较

从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA.     

彩色甜椒基因组DNA提取方法的优化

以不同颜色的甜椒为试验材料,采用CTAB法、SDS法、ROSE法和氯化苄法提取彩色甜椒基因组DNA。结果表明,CTAB法所提取DNA的质量和纯度较高,以此DNA为模板进行RAPD-PCR分析,DNA扩增效果较好,带形清晰、整齐,说明CTAB法提取的DNA较为完整,能用作RAPD-PCR模板来开展彩色甜椒分子水平的研究。     

玉米RNA提取方法的比较研究

以玉米嫩单10为材料,比较TRIzol法、CTAB法和SDS法改进法提取总RNA的效果。结果表明,SDS法改进法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,OD₂₆₀/OD₂₈₀值介于1.7～2.2;CTAB法提取的RNA 28S rRNA明显缺失,泳道模糊不清,杂质多;TRIzol法RNA降解严重,沉淀方法以无水乙醇配合LiCl沉淀RNA节省时间,反转录和RT-PCR效果好。改良的SDS酸酚法适合玉米总RNA的提取。     

2种荔枝RNA提取方法的比较

比较利用TRIZOL法和改进SDS法2种方法提取荔枝叶片总RNA的可行性。通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计检测,对提取所得RNA的完整性、纯度及浓度进行分析。试验结果表明,改进SDS法适合荔枝叶片总RNA的提取,能有效获得纯度高、完整性好的RNA样品。     

2种微藻总RNA提取方法的比较

以微茫藻和莱茵衣藻为材料,比较Trizol试剂法和SDS-LiCl沉淀法提取2种微藻总RNA的效果,以期筛选出适合微藻RNA的提取方法。结果表明,SDS-LiCl沉淀法能从微茫藻中提取高质量的RNA,而Trizol法和SDS-LiCl沉淀法均能从莱茵衣藻中获得高质量的RNA,但Trizol法更为简单有效。RT-PCR结果表明,SDS-LiCl沉淀法提取的微茫藻总RNA和Trizol法提取的莱茵衣藻总RNA都能直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。