不同浓度离子霉素对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

试验探讨了不同浓度的离子霉素结合6-二甲氨基嘌呤激活猪体外成熟卵母细胞后对其孤雌发育的影响。体外成熟卵母细胞分别用10、15、20、25mol/L的离子霉素处理40min,再用2mmol/L的6-DMAP处理8h,各组的卵裂率分别是:(13.11±6.75)%,(22.31±14.18)%,(26.93±24.53)%和(26.72±19.75)%,囊胚率分别是2.26±1.03)%,(2.39±2.41)%,(3.32±3.95)%和(11.76±10.76)%,各组之间差异不显著(P>0.05)。结果表明:用10～25mol/L离子霉素和6-DMAP联合激活猪体外成熟卵母细胞,对其孤雌发育能力有一定影响,但效果不显著;猪卵母细胞采用离子霉素激活的最佳方案是用25mol/L处理40min,再用浓度为2mmol/L的6-DMAP处理8h。     

不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

研究了猪体外成熟卵母细胞的电激活、离子霉素激活和乙醇激活的方法。3种不同激活方法筛选试验表明,猪卵母细胞电激活最佳参数为电场强度130V/min,脉冲时程80μs的1次脉冲激活,即130V/mm-80μs-1次,其囊胚(发育)率为18.92%±8.48%(P>0.05);离子霉素激活的最佳条件为15μmol/L、激活时间40min,其囊胚率为21.27%±8.54%(P>0.05);乙醇激活最佳参数以9%乙醇激活处理3min,囊胚率为13.33%±7.64%。进一步对比试验表明,电激活和离子霉素激活处理的囊胚率和囊胚细胞数无显著差异(P>0.05),电激活的卵裂率明显高于乙醇激活(P<0.05),而囊胚率和细胞数差异不显著(P>0.05)。     

激素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究不同激素及其组合在猪卵母细胞体外成熟及对其后孤雌胚胎发育的影响,我们对比了孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛膜促性腺激素(hCG)组合、卵泡刺激素(FSH)与促黄体素(LH)组合、雌二醇(E2)及这些卵母细胞经孤雌激活后囊胚率的影响;以及不同FSH和LH浓度组合对猪卵母细胞体外成熟率。结果表明,在卵母细胞体外成熟液中添加10 U/mL PMSG和10 U/mL hCG的成熟率和孤雌囊胚率都达到最高(85.9%和55.3%);FSH与LH的组合次之,分别为77.1%和53.5%;E2最差,成熟率仅为54.0%囊胚率为19.5%。而在FSH与LH不同浓度配比中以10 U/mL FSH和20 U/mL LH时,猪卵母细胞成熟率最高达到80.9%。     

不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

通过系统探讨不同孤雌激活方法对猪卵母细胞体外激活后发育效果的影响,比较了乙醇（Ethanol,EH）、离子霉素（Ionomycin,Ion：5μmol/L）、氯化锶（Strontium chloride hexahydrate,Sr^2＋：10 mmol/L）、6-二甲氨基嘌呤（6-dimethylaminopurine,6-DMAP：2 mmol/L）和放线菌酮（cycloheximide,CHX：10 mg/L）对猪卵母细胞激活发育的效果。结果表明：（1）9%EH激活处理10 min效果好于15 min;（2）使用9%EH激活处理10 min,再结合CHX、6-DMAP、Sr^2＋、CHX＋Sr^2＋、Sr^2＋＋6-DMAP、CHX＋6-DMAP或CHX＋6-DMAP＋Sr^2＋组处理3～4 h,以EH＋6-DMAP组效果最好,分裂率及囊胚率分别达到82.86%和22.86%;（3）在使用化学激活（Ion＋6-DMAP组和9%乙醇10 min＋6-DMAP组）和电激活（50 V/mm,50μs,2t）的方法中,Ion法激活猪卵母细胞效果较好,囊胚率达到37.50%;（4）卵母细胞包被的卵丘细胞层数不同对卵母细胞成熟激活有显著的影响,卵丘细胞层数4～6层和多于6层的卵丘-卵母细胞复合体孤雌激活的分裂率和囊胚率分别为（68.99%,32.56%）和（75.36%,37.68%）,2组之间差异不显著（P〉0.05）;但其显著高于其他组（P〈0.05）,这2组细胞在猪孤雌激活发育研究中是最佳的实验研究材料。     

Leptin对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后早期胚胎发育的影响

为了探讨瘦素(Leptin)对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后胚胎早期发育的影响,研究选择在Earle's盐缓冲的TCM199中添加10IU/mLeCG,10IU/mLhCG,10ng/mLEGF配制成化学限定的基础液,以添加不同浓度Leptin设定各试验组,对猪卵母细胞进行体外成熟培养。以未添加Leptin的基础液为对照组1,而添加5%的胎牛血清(FBS)、10%猪卵泡液为对照组2。比较分析各组卵母细胞核成熟效率,孤雌激活后胚胎的卵裂率,囊胚发育率。结果表明:各添加组卵母细胞成熟率与对照组之间无显著差异(P>0.05);孤雌激活后,各组间的卵裂率和囊胚发育率也无明显差异。同时,在化学限定的猪卵母细胞体外成熟液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活后早期胚胎的发育无显著效果。     

pFF对猪卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

探讨了两种不同成分成熟液配方(I:含PMSG、hCG、pFF与II:含FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活发育能力的影响。结果表明:当卵母细胞分别在I和II液中成熟培养42 h后,卵母细胞存活率差异不显著(82.66%∶83.5%)(P>0.05)。对成熟卵母细胞孤雌激活后体外培养结果表明:I成熟培养组的卵母细胞卵裂率低于II成熟培养组(69.44%∶78.38%)(P<0.05)。但两组卵母细胞经144 h培养后囊胚发育率差异不显著(35.0%∶32.04%,P>0.05)。由此可知:采用不含pFF、化学成分已知的成熟液可以满足猪卵母细胞体外成熟和卵母细胞孤雌激活后的正常发育。     

不同浓度雌二醇对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活胚胎的影响

为了探讨雌二醇（17β-estrodiol,E2）对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后胚胎早期发育的影响,在卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度雌二醇,研究卵裂率和囊胚率的变化。以未添加雌二醇的基础液为对照组,比较分析各组卵母细胞核成熟效率、孤雌激活后胚胎的卵裂率、囊胚发育率。结果表明,成熟液中添加1μg／mL雌二醇（E2）对猪卵母细胞的体外成熟具有明显的促进作用,而添加100μg／mL雌二醇（E2）对猪卵母细胞体外成熟具有明显的抑制作用。     

猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活参数研究

本研究比较了按不同方法贮藏的培养液对猪卵母细胞体外成熟及成熟后孤雌激活对胚胎发育的影响。此外,还探索了针对初情期前母猪体外成熟卵母细胞和孤雌激活方案。结果如下：①1.4 kv/cm、100 μs、1DC电激活后,卵母细胞死亡率明显高于2.0 kv/cm、30 μs、1DC和2.0 kv/cm、60 μs、1DC处理组,但激活后胚胎卵裂率和囊胚率相似;②使用钙离子载体和6-二甲基氨基嘌呤（Ionomycin+6-DMAP）处理后,胚胎卵裂及囊胚率都明显不如电激活处理;③6次独立试验结果证明：经4℃冷藏和-20℃冷冻保存的培养液用于猪卵母细胞培养,其体外成熟率、孤雌激活后的卵裂率及囊胚发育率无显著差异（P＞0.05）。说明成熟卵在2.0 kv/cm、30 μs、1DC或者 2.0 kv/cm、60 μs、1DC电击参数激活下可以降低死卵率;按本试验设计的电激活方案处理初情期前母猪成熟卵优于化学激活;在-20℃冷冻保存猪卵母细胞成熟液是可行的。      

马尾藻类多糖对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的影响

就马尾藻类多糖对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活的影响进行了探索。试验1证明。体外培养时。成熟液添加马尾藻类多糖能促进卵丘细胞扩展，成熟培养47-48h，添加20g／L马尾藻类多糖能提高核成熟率(41．8％)，与对照组29.3％的核成熟率相比，二者差异显著；试验2证明，进行化学联合激活时，添加20g／L马尾藻类多糖(未添加LH)W获得60.4％孤雌激活分裂率。显著高于对照组42．6％的孤雌激活分裂率。     

不同浓度CO2对牛卵母细胞体外成熟和受精的影响

对牛卵巢卵泡内卵母细胞在不同浓度的CO2培养箱内体外成熟、体外受精后的卵裂率及胚胎体外发育进行了研究。结果显示,含5%小牛血清(CS)的TCM-199内的卵母细胞在2%CO2条件下培养20h后,达到第二次减数分裂期(MⅡ期)的卵子数明显高于在5%CO2条件下培养的卵母细胞数(P<0.05)。两种浓度的CO2条件下培养的牛卵母细胞体外受精后的卵裂率无明显差异,2%CO2浓度下培养的卵母细胞的囊胚发育率高于5%CO2浓度下培养的卵母细胞。     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。     

不同因素对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验旨在探讨不同外源激素组合的添加、胰岛素—转铁蛋白—亚硒酸钠(ITS)的添加、不同培养皿、石蜡油的添加对卵母细胞体外成熟培养(IVM)的影响。结果显示:①孕马血清促性腺激素+人绒毛膜促性腺激素+促卵泡素(PMSG+HCG+FSH)组高于促卵泡素+促黄体素(FSH+LH)组和尿促性腺激素(hMG)组,相互之间差异显著(80.1%、68.3%、53.3%,P<0.05);②添加1% ITS到猪卵母细胞培养液中对卵母细胞成熟率无显著提高(P>0.05),但显著提高了孤雌激活后孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(63.3%、55.1%,18.7%、12.1%,P<0.05);③凹槽皿组猪卵母细胞成熟率显著高于四孔板和30 mm塑料皿组(73.3%、68.0%、68.3%,P<0.05);④石蜡油的添加对卵丘细胞扩展和卵母细胞体外成熟率均有显著提高(84.8%、69.9%,P<0.05)。结果表明培养液中添加PMSG+HCG+FSH和ITS及选用凹槽皿、成熟培养液上覆石蜡油可提高猪卵母细胞IVM效果。     

海狸鼠卵母细胞体外成熟培养初探

实验用ＰＭＳＧ或ＰＭＳＧ＋ＨＣＧ处理或未经激素处理的海狸鼠８只，共获卵巢卵母细胞１３８枚。激素处理对获取卵巢卵母细胞的数量没有影响，而对体外成熟发育至卵丘扩展和半成熟阶段有促进作用。三种不同培养液（Ｗｈｉｔｅｎ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＨＣＧ＋ＦＣＳ）共培养１２５枚卵母细胞，培养后卵丘扩展率及半成熟率分别为５６．５％，４５．７％，４７．６％和２１．７％，１２．３％，９．５％，以Ｗｈｉｔｅｎ液较高（分别为５６．５％和２１．７％），但只有ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ组有２枚卵母细胞出现第一极体。结果表明海狸鼠卵母细胞与其它啮齿动物的卵母细胞一样，能够在体外培养成熟，完成第一次减数分裂，排出第一极体     

不同培养时间对家猫卵母细胞核成熟的影响

为了研究不同培养时间对家猫卵母细胞核成熟的影响,以M 199为基础培养液,并添加FSH、LH,分别培养24、28、32、36和43 h后,观察第一极体排出,然后用地衣红染色,将排出第一极体和染色体处于MⅡ期作为卵母细胞成熟的参考判断标志。结果表明,家猫卵母细胞随着培养时间的延长其成熟率也随之增加。成熟培养43 h,极体排出率极显著高于其他各组（P<0.01）,达到66.89%;而24 h组极体排出率为31.51%,极显著低于其他各组（P<0.01）;28、32、36 h各组间差异不显著（P>0.05）。经地衣红染色后,到达MⅡ期的卵母细胞比例与极体排出率趋势相同。43 h组退化率极显著高于其他各组（P<0.01）,达到22.30%。因此,综合考虑成熟率和退化率两项指标,28～36 h为家猫卵母细胞体外核成熟的最佳培养时间。     

生殖激素对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响

生殖激素是卵母细胞成熟培养液中必不可少的成分,它对卵母细胞的完全成熟至关重要。本文综述了其化学特性和对卵母细胞成 熟培养的影响,并对其作用机理进行了简单阐述。     

不同因素对牛卵母细胞体外成熟培养效果的影响

文章主要从采集方法、性周期阶段以及培养液中FBS浓度3个方面对牛卵母细胞体外成熟的影响进行了分析。结果表明：①不同采卵方法的采卵效果存在差异,但成熟培养和体外受精情况差异不显著（P〉0．05）;②从卵泡期和黄体期卵巢采集到的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率分别,为59.7%,56．6％和39．5％、36．6％,没有显著差异（P〉0．05）;③培养液中添加20％FBS组的卵母细胞成熟率和卵裂率显著高于10%FBS和30%FBS组（P〈0．05）.     

生长激素和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚卵裂的影响

本研究探讨了生长激素(STH)和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:在mNCSU-23液中,添加0.15μg/mLSTH组的成熟率(73.83%)和卵裂率(64.76%)显著高于对照组和添加0.01、0.05、0.1、0.2μg/mLSTH组(P<0.05);添加5μg/mL和8μg/mL胰岛素组的成熟率(66.25%、60.64%)显著高于添加0、0.5、2μg/mL及10μg/mL组(P<0.05);添加5μg/mL胰岛素组的卵裂率(61.63%)显著高于添加0、0.5、2、8、10μg/mL组(P<0.05);最佳的联合添加组为0.15μg/mLSTH+2μg/mL胰岛素,其体外成熟率为79.37%、卵裂率为72.31%。