胸膜肺炎放线杆菌血清分型多重PCR方法的建立

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneunoniae）旧称副溶血性嗜血杆菌或猪胸膜肺炎嗜血杆菌。根据NAD依赖性,App划分为两个生物型,依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）生长的生物Ⅰ型,无需NAD的生物Ⅱ型,致病菌主要为生物Ⅰ型。目前依据荚膜多糖（capsular polysaccharide,CP）和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）的抗原性己分离鉴定出了15种血清型的App。已建立的多重PCR方法将10株参考菌株分为5个血清群。但该方法还未能区分血清2型和8型、     

猪传染性胸膜肺炎的诊断和防治

1病原体 猪传染性胸膜肺炎属于巴氏杆菌科，放线杆菌属的成员。根据其基因型和对Ⅴ因子，即烟碱腺嘌呤二核苷酸（NAD）的需要情况，可将猪传染性胸膜肺炎分为两个不同的生物型：生物型Ⅰ和生物型Ⅱ。     

胸膜肺炎放线杆菌APXⅢA基因的克隆及原核表达

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumon- iae,APP)是引起猪传染性胸膜肺炎(porcine infec- tious pleuropneumonia)的病原菌。该菌为革兰阴性菌,根据其生长是否需要Ⅴ因子(NAD,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸)可将其分为2个生物型,即生物Ⅰ型和生物Ⅱ型。生物Ⅰ型具有致病性。根据可溶性荚     

胸膜肺炎放线杆菌生物学特性概述

胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacilluspleuropneumoniae ,Ap)早称为副溶血嗜血杆菌 (H .Parahaemolytious) ,现归属于放线杆菌属中 ,命名为胸膜肺炎放线杆菌 (A .pleuvropneumoniae)。放线杆菌属引起动物发病主要种有胸膜肺炎放线杆菌 (A .pleuropneumoniae) ,林氏放线杆菌 (A .lignieresii)、猪放线杆菌 (A .suis)、驹放线杆菌 (A .equili)、人放线杆菌 (A .hominis)等几种菌。胸膜肺炎放线杆菌包括两个生物型 ,生物Ⅰ型即依赖V因子 (烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD辅酶Ⅰ)生长的原胸膜肺炎嗜血杆菌 ;生物Ⅱ型即也能引起猪坏死性胸膜肺炎的低…     

猪传染性胸膜肺炎(APP)的病因与防治

由胸膜肺炎放线杆菌（副溶血嗜血杆菌或称胸膜肺炎嗜血杆菌）引起,兼性厌氧革兰氏阴性多形性小球杆菌。不运动,有荚膜、生长需要V因子。在含NAD（还原型辅酶Ⅰ,参加三羧循环所必需酶）的血琼脂平板上才能生长,目前已分离到两个生物群的15个血清型,Ⅰ群中的l、5、9、10、11五个血清型致病力最强,我国发现10个型而以1、3、7型多见,主要血清型之间无交叉免疫,给本病的防治带来困难,Ⅱ群各型分布于欧、美,毒力较弱。     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清型研究进展

猪传染性胸膜肺炎是当前养猪业的主要呼吸系统传染病之一 ,其病原菌是胸膜肺炎放线杆菌 ,血清型多。准确区分此病原菌的不同血清型是研制预防有效疫苗的前提。根据 NAD依赖性 ,本菌可以分为生物 I型和生物 II型 ;采用传统的血清学方法 ,本菌又分为 1 5个血清型。各种血清学方法仍是现阶段对胸膜肺炎放线杆菌开展血清型鉴定的主要手段 ,但不足之处是存在一定程度的交叉反应以及不能对新分离的病原菌进行分型。采用聚合酶链式反应对不同基因进行扩增 ,根据扩增结果进行血清型鉴定的基因分型方法 ,具有准确和特异的优点 ,并可以克服传统血清学方法的不足 ,已经逐渐成为胸膜肺炎放线杆菌研究中的新的分型方法     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清型的PCR鉴定

据胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）生物I型各血清型之间外毒素（apx）基因组结构差异,参考GenBank上已发表的4种毒素（apxⅠ/apxⅡ/apxⅢ/apxⅣ）的核酸序列设计了6对特异性引物,对APP的12个血清型进行多重PCR扩增,得出不同的特异性的扩增片段,得以准确鉴定APP生物I型中的9种血清型,但其中血清型2和8,血清型5、9和11仍未能区分。     

胸膜肺炎放线杆菌的实时荧光PCR检测

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的危害养猪业的五大疾病之一。至目前为止App共报道有2个生物型15个血清型。所有型都可能致病，但有显著差异。使用血清学方法监测猪传染性胸膜肺炎有其局限。一些猪细菌分离培养阳性，但血清反应仍为阴性，对这些猪群只能使用病原分离进行确诊。亚临床感染及处于潜伏期的动物，     

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及对茶多酚敏感性的研究

猪传染性胸膜肺炎是世界公认的危害养猪业的5个主要传染病之一，该病病原为猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）。由于各国流行的血清型不尽相同，各型之间及同一血清型的不同菌株之间的毒力和致病力有差异嘲，几乎无交叉保护；此外，多杀性巴氏杆菌和链球菌都会引起继发性猪急性胸膜肺炎。随着我国养猪业的迅速发展，猪的引进与跨省区运输加速了APP的广泛流行，给该病的诊治带来极大困难。     

胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素研究进展

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种呼吸道传染性疾病.根据荚膜多糖和脂多糖抗原表位不同,将胸膜肺炎放线杆菌分为15个血清型,不同血清型的菌株毒力大小不同,致病性也有强弱之别.研究发现与APP致病性有关的毒力因子包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、溶血外毒素等,其中溶血外毒素是APP引起猪致病最主要的毒力因子,也是主要的保护性抗原.论文从猪传染性胸膜肺炎溶血外毒素的分子结构、致病机制、免疫原性几个方面对其进行综述,为获得以Apx为抗原制备减毒活疫苗提供参考资料.     

鲁西地区猪胸膜肺炎放线杆菌血清型多重PCR研究

本研究建立了鉴定猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清型的多重PCR方法,并对鲁西地区流行的APP血清型进行了鉴定.根据猪胸膜肺炎放线杆菌的外膜脂蛋白(OmlA)基因设计1对种特异性引物;并且根据血清1型、5型、7型荚膜多(cps)基因设计型特异性引物,建立检测血清1型、5型、7型的PCR方法.运用多重PCR对临床分离鉴定的89株APP进行血清型鉴定,结果表明建立的多重PCR检测方法特异性和敏感性良好,可作为猪传染性胸膜肺炎快速诊断和流行病学调查的重要手段.     

涪陵区集约化猪场猪传染性胸膜肺炎血清学调查

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎嗜血杆菌(HPP)又称胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种猪的呼吸道传染病,其主要造成猪急性纤维素性胸膜肺炎或慢性局灶性坏死性肺炎。APP是有荚膜的革兰氏阴性小杆菌,是对猪有高度宿主特异性的呼吸道寄生菌。高度保守的弱溶血毒素ApxⅣ存在于APP15个血清型中,具有特异性。在体外培养的APP不能检测到该毒素,只有在体内感染(自然感染)的情况下才能够检测到ApxIV毒素及其抗体。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型PCR程序优化及分子鉴定

猪接触性传染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumonia,PCP）又称坏死性胸膜肺炎,是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。以急性出血性纤维素性肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜炎为主要特征。各种年龄、性别的猪对本病均易感,急性者死亡率高,慢性者常能耐过。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌有15个血清型,不同血清型之间没有或仅有较弱的交叉保护作用,这给猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的诊断防治和免疫预防带来了很大的困难。因此建立一种快速血清型分子鉴定方法尤为重要。为了快速、简便的建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分子鉴定的方法,本研究所从临床发病疑似病例猪肺脏和气管中分离到的放线杆菌,首先经过血清型鉴定,确定部分血清型为2型,为了确定血清型鉴定的准确性,在此基础上,采用分子鉴定的方法,对这些菌株进行鉴定,确定分离到的11株菌为猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型。这为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分子鉴定及防治提供了理论依据,为今后临床血清型定型提供了一种简便方法。     

胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布

胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布吴硕显（上海动植物检疫局，２０００３２）胸膜肺炎放线杆菌（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ａｐ）为猪胸膜肺炎的病原，曾称作副流嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）...     

复合PCR进行胸膜肺炎放线杆菌血清型快速分型

根据胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）各血清型之间外毒素apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣA基因差异，设计6对引物，对16株标准菌株进行1次5对引物的多重PCR和1次根据apxⅣA基因设计1对引物PCR的扩增，得到各血清型特异性片段，并将片段特征相同的血清型归为同一组。通过这2步PCR分组情况的不同能将16株标准菌株中的大多数血清型区别开，但是仍然不能将血清2型和8型、血清9型和11型、血清5型中的2个亚型以及血清12型和13型区分开。又根据血清2型英膜多糖（CP）基因差异设计1对引物将血清2型和8型区分开。将此分型系统应用于23株未知病原菌检测，检测到胸膜肺炎放线杆菌9株，并全部能够将其分型。本试验PCR分型体系可以作为胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的一种快速而有效的鉴定方法。     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立

根据猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白基因序列，设计合成了1对特异性引物。经PCR扩增，APP1～10标准血清型菌株均能扩增出大小为980bp的DNA片段，而大肠埃希氏茵、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎霉形体和葡萄球菌等的扩增结果均为阴性。该方法检测APP DNA的敏感性可达2pg。表明，此PCR方法特异性好，敏感性高，可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的鉴定和耐药性研究

猪传染性胸膜肺炎是由猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuralpneumoniae,APP)引起的一种高度传染性呼吸道疾病,临床上准确鉴定该病原菌并合理选择抗生素施药十分重要。研究比较了应用传统方法、PCR方法和MALDI TOF方法鉴定45株临床APP,并比较了三种优势血清型的毒力表型,最后测定了其对临床34种常见抗生素的MIC。结果发现MALDI TOF微生物学鉴定方法具有快速、准确的优势;临床菌株血清型主要包括3型（20株）、1型（13株）、7型（7株）,其他血清型菌株5株,其中1型毒力最强;APP对罗红霉素、头孢噻呋、恩诺沙星、氨苄西林等高度敏感,对四环素、土霉素等耐药率较高。研究为临床快速鉴定APP和合理选择用药提供了参考依据,为APP临床耐药折点的制定奠定了基础。     

猪传染性胸膜肺炎新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究

利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ，提取表达产物包涵体，再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌，和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗，免疫BALB／c小鼠，间隔2周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素I、Ⅱ、Ⅲ的EuSA抗体和7型菌的血凝抗体，第2次免疫2周后用5LDso的猪胸膜肺炎放线杆菌1型、7型菌株进行攻毒。结果发现第2次免疫后抗体水平显著升高，用2种血清型进行攻毒后其保护力分别为83．3％和91．7％，从死亡小鼠的体内分离到了攻毒菌株，初步的动物试验表明此种新型亚单位菌苗对同型和异型的APP菌株具有较好的保护力，为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。     

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定

从山东省泰安市采集的38份具有严重呼吸道症状的病死猪的肺脏、气管和扁桃体进行胸膜肺炎放线杆菌（APP）的分离鉴定,其中14株菌株表现出形态多样性、革兰氏染色阴性等特点,小鼠试验显示有较强的毒力,PCR电泳结果得到了650bp的预期目的片段。系统的生物学鉴定表明,这14株分离菌为胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus Pleuropneaumoniae,APP）。对确诊的14株APP采用凝集试验进行血清型检测。结果从山东省泰安市分离到14株2个血清型的胸膜肺炎放线杆菌,其中,血清7型8株、血清5型6株,血清7型、5型为绝对优势血清型。     

猪传染性胸膜肺炎的诊断及防治

猪传染性胸膜性肺炎(PCP),原称猪嗜血杆菌病、猪嗜血杆菌胸膜肺炎,是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一类以呼吸系统疾病为主的接触性传染病。该病以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维性坏死胸膜肺炎为主要特征。急性型死亡率高,慢性型常能耐过。近年来随着养殖业规模化、集