树兰组织培养外植体消毒方法初探

以树兰（Epidendrum）为材料,分别研究了NaClO和HgCl2对树兰侧芽、茎段和花梗3种外植体的消毒效果,探讨树兰3种外植体的有效消毒方法。试验结果表明：（1）3种外植体中最易消毒的为花梗,其次是侧芽,最难消毒的为茎段;（2）HgCl2对3种外植体的消毒效果优于NaClO;（3）3种外植体最适宜的消毒方法分别为：花梗0.1%HgCl2消毒8 min,侧芽0.1%HgCl2消毒4 min,茎段0.1%HgCl2消毒10 min,其存活率分别为90.9%、42.3%和30.9%。本研究结果将为树兰外植体途径的组培再生提供理论依据和技术指导。     

木薯外植体快速、高效消毒的简易方法

本研究以木薯栽培种华南7号的幼嫩茎段为外植体,就取材地点,取材时间,取材天气,消毒试剂进行筛选研究,以发展一套木薯外植体快速、有效消毒的简易方法。实验结果表明,来自室内培养植株的外植体接种污染率低。大田取样中午脱菌效果好于清晨和傍晚。连续晴天取材脱菌效果比雨后第2天稍好。0．1％HgCl2对室内所取材料消毒效果好于10％NaClO的消毒效果,前者无菌率平均高达90％以上。     

象草腋芽外植体消毒方法的筛选

为了解决象草组织培养中外植体污染问题,提高象草组织培养的成功率。本研究运用正交设计实验设置自来水冲洗、0.1%升汞浸泡和2%次氯酸钠浸泡3因子的不同消毒组合,通过直观分析和方差分析对象草腋芽外植体消毒灭菌结果进行分析。结果表明,象草腋芽外植体消毒的最佳组合为:自来水冲洗60min,0.1%升汞浸泡25min,2%次氯酸钠浸泡20min。该组合不仅能使污染率降低到13.33%,同时又在外植体的承受范围之内,没有对外植体造成伤害,本文结果将为象草的离体再生培养提供技术参考。     

秋水仙素诱导石斛多倍体的初步研究

本实验以秋水仙素为诱导剂,对石斛杂交种Dendrobium utopia ‘Messenger’×Den. whiterabbit ‘Sakurahime’的二倍体试管苗进行了多倍体诱导、细胞学观察及染色体鉴定等研究。结果表明,当秋水仙素浓度为0.4 ~0.6mg/L时石斛的诱导率较高,最高时可达62.2%。变异植株的叶片变短变厚,假鳞茎明显增粗。在显微镜下观察到变异株的气孔长度和宽度约增加21.44%和28.30%,保卫细胞的长度和宽度约增加30.88%和24.98%。     

霍山石斛快繁技术筛选研究

采用L9（3^4）正交试验设计,对霍山石斛腋茅的增殖培养基进行筛选,研究结果表明,最佳增殖培养基为MS添加6-BA 2～5mg／L、NAA0．5～1．5mg／L、SU 20～30g、CH 0～0．5g／L,且随着增殖继代次数的增加,增殖倍数有加大的趋势。     

缺硼豌豆植株侧芽生长机理的研究

用营养液培养的方法对供硼与不供硼（缺硼）条件下豌豆植株的生长及侧芽发育状况进行了研究。结果表明,缺硼明显抑制豌豆植株生长,根系受抑先于地上部。缺硼１０天后可见侧芽长出,顶端优势不明显。用间接酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）测定了内源生长素（ＩＡＡ）的细胞分裂素（Ｚ／ＺＲ）水平的动态变化,发现缺硼植株顶芽中ＩＡＡ水平高于对照,顶芽的可扩散ＩＡＡ水平低于对照,节中ＩＡＡ水平降低;缺硼初期（３～６天）,根系和节中Ｚ／ＺＲ水平均高于正常供硼植株。认为缺硼豌豆植株节中的低ＩＡＡ水平和高Ｚ／ＺＲ水平是诱导侧芽发育的一个重要因素     

铁皮石斛生物技术研究进展

铁皮石斛是一种名贵中药材。近年来,因为需求量的增加和自然繁殖困难等原因,野生资源日趋濒危。除原生地保护之外,利用生物技术进行人工繁殖和种质改良是解决这一问题的有效途径。本文就近年来有关铁皮石斛生物技术方面的研究进展进行简要综述,重点对种质资源的离体保存、遗传多样性和鉴定、组织培养、诱变育种和基因工程技术等方面的研究进行了综述,同时对铁皮石斛今后的开发利用工作提出了建议。     

春石斛的栽培管理技术

从栽培基质、肥水管理、花期调控和病虫害防治等几个方面简介了春石斛的栽培管理技术。     

铁皮石斛EST-SSR分子标记的开发

为了开发铁皮石斛EST-SSR分子标记,利用SSRIT软件对铁皮石斛近缘物种-金钗石斛的15 383条EST序列进行SSR位点查找,利用Primer 5和Oligo 7软件进行引物设计和评价,之后经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳对引物进行初步筛选,并通过聚丙烯酰氨凝胶电泳对所筛选的引物进行有效性检测。结果表明,SSRIT软件共查找到370条SSR位点序列,共有379个SSR位点,候选SSR位点出现的频率为2.46%。二核苷酸、三核苷酸和六核苷酸重复是最主要的重复类型,分别占41.42%、26.91%和27.44%,其中二核苷酸重复中AG/CT(20.84%)和GA/TC(18.73%)最丰富;三核苷酸重复中TCT/AGA(4.22%)和GA/TC(3.96%)最丰富;而六核苷酸重复基元较多。EST-SSR平均长度为24 bp,平均每8.5条EST序列包含1个SSR位点。设计的106对EST-SSR引物中有50对能扩增出理想的PCR产物,引物有效扩增率为47.17%,其中有43对能够扩增出多态性条带,占可扩增引物的86%。本研究开发的43对引物为铁皮石斛遗传多样性分析、种质鉴定、遗传图谱构建和功能基因研究等提供了重要的参考价值。     

遗传霉素对矮牵牛叶片愈伤组织诱导及生根的影响

为探究遗传霉素对矮牵牛叶片愈伤组织的诱导及生根的影响,以矮牵牛W115叶片为外植体,研究不同浓度的遗传霉素对叶片愈伤组织、不定芽以及生根诱导的影响。结果表明,随着浓度的增加,遗传霉素对愈伤组织,不定芽以及生根诱导的抑制作用增强。其中,诱导不定芽的遗传霉素临界浓度为4mg·L-1,该浓度下,矮牵牛叶片愈伤组织分化出不定芽的分化率为0;诱导生根的临界浓度为5mg·L-1,当遗传霉素浓度≥5 mg·L-1时,植株不能正常生根。研究结果为遗传霉素在矮牵牛遗传转化中的应用提供了参考。     

基于cpDNA条形码鉴定铁皮石斛种质资源

为选择适合鉴定铁皮石斛的条形码,以5份铁皮石斛种质资源和1份串珠石斛(外类群)为试验材料,采用cpDNA条形码技术进行分子鉴定。结果表明,5个条形码序列(matK、rbcL、trnH-psbA、petApsbJ和rpl32-trnL)种间遗传距离均远高于种内遗传距离,符合作为条形码的基本要求,其中petA-psbJ变异位点最多(8.03%),说明其进化速率亦最快,petA-psbJ可作为石斛属候选条形码之一;单个条形码鉴定率均较低(60%),核心条形码matK+rbcL鉴定率亦较低(68.75%),而在核心条形码基础上结合其它序列(≥3)却可以显著提高鉴定率(≥81.25%),matK+rbcL+petA-psbJ鉴定率达到100%,可作为铁皮石斛分子鉴定的最适条形码组合。综上,利用cpDNA条形码技术,可将不同种质资源的铁皮石斛区分开,基本上可将不同采集地的铁皮石斛聚类;同时,建议matK+rbcL+petA-psbJ作为铁皮石斛种质资源鉴定的DNA条形码。本研究结果为铁皮石斛种质资源的快速鉴定提供了一定的参考。     

分子标记技术及其在中药石斛研究中的应用进展

石斛是中国传统名贵药材,因其基源广泛,药效独特,历来都是备受关注的道地药材之一。近年来,随着分子生物学的快速发展,分子标记类型逐年增多,目前在中药材品种研究上应用日益广泛。本文简要阐述了各种不同类型的分子标记及其优缺点,回顾了其在石斛研究中的应用实践,分析了目前分子标记在石斛研究中存在的主要问题,并对分子标记技术在今后研究中的美好前景和深入应用做出了展望。     

外源激素对金花茶花蕾生长的影响(简报)

采用不同激素在不同时期和时间间隔处理金花茶花蕾的方法研究外源激素对花蕾生长的影响。结果表明，用１０００ｍｇ·Ｌ－１的赤霉素（ＧＡ３）处理直径在０．３２～１．１２ｃｍ范围内的金花茶花蕾，可以明显地促进花蕾的生长而无伤蕾现象。在抽梢前用ＧＡ３隔天处理，一个月后促进效果可达１００．７％，而用激动素（ＫＴ）处理则普遍抑制花蕾的生长。在抽梢后每周处理一次，则ＧＡ３的促进效果较差，一个月后促进效果只有４８．５％，而ＫＴ处理反而表现出一定的促进效应     

施氮对铁皮石斛氮磷及非结构性碳水化合物含量的影响

为了深入认识铁皮石斛对氮施加的适应及反馈能力,本试验采用不同质量百分比浓度的尿素[0(CK)、0.2%、0.6%、1.0%和1.5%]处理红杆铁皮石斛二年生幼苗,并于处理后的第5、第15、第30天进行取样,测定茎中氮、磷、多糖和淀粉含量,研究铁皮石斛在氮添加下茎中总氮、总磷及其化学计量比,以及茎中非结构碳水化合物含量的变化。结果表明,氮处理不同程度地改变了铁皮石斛茎中总氮、总磷含量。当尿素浓度为0～0.6%时,处理30 d后的茎中总氮浓度明显下降,随着尿素浓度升高,茎中总氮浓度显著升高。茎中总磷的变化范围相对较小,处理30 d后,施加低浓度的尿素(0.2%～0.6%)更有利于促进磷的吸收和积累,当尿素浓度为0.6%时,N∶P比值降至最低,为3.17。尿素浓度为0.2%时,叶绿素含量达到最高。0.2%浓度尿素处理下的铁皮石斛多糖含量最高,随着氮肥浓度的增加,可溶性多糖含量呈下降趋势。0.2%～0.6%浓度尿素处理有利于茎中淀粉的积累,同时,非结构性碳水化合物含量保持较高水平。铁皮石斛中N∶P比值的变化主要由总N含量变化决定,总N含量、叶绿素含量及N∶P比值会影响可溶性多糖、淀粉和非结构性...     

不同预处理对铁皮石斛热风干燥特性及品质的影响

为了优化铁皮石斛干燥工艺,降低其品质劣变风险,对热风干燥前的铁皮石斛鲜条进行直接剪切、烫漂和冻融预处理。研究不同预处理条件的铁皮石斛干燥特性和品质变化;利用低场核磁共振技术分析预处理对铁皮石斛干燥过程中水分迁移的影响。结果表明,预处理是影响铁皮石斛热风干燥过程的重要因素。与直接剪切相比,烫漂和冻融预处理提高了水分有效扩散系数,缩短了干燥时间,降低了能耗,尤以冻融预处理最为显著,干燥时间缩短了44.4%,能耗降低了42.76%（P<0.05）。微观结构观察表明,烫漂和冻融预处理使铁皮石斛组织间隙变大,细胞壁受到破坏,减弱了铁皮石斛组织对水分的束缚并增强了水分流动性,引起水分的重新分布,有利于水分迁移。低场核磁共振技术分析显示,干燥过程中去除的主要是自由水,烫漂和冻融预处理均降低了自由水的脱除时间,冻融预处理去除自由水的时间最少,为120 min。与直接剪切相比,冻融预处理提高了铁皮石斛干品中多糖和多酚的含量,分别提高了10.66%和12.32%,而烫漂预处理降低了铁皮石斛多糖和多酚的含量,分别降低了11.73%和14.73%,3种预处理铁皮石斛生物碱含量差异不显著（P>0.05）。总之,冻融预处理方法可以降低铁皮石斛干燥品质劣变风险,研究结果为石斛加工规范化生产提供参考。