DNA提取方法对一串红不同部位DNA提取的比较

本文以一串红的叶片、茎段、花为材料,分别采用高盐低pH法、十二烷基硫酸钠（SDS）法、改良十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法、核DNA法和十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）区室法等5种不同方法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析。结果表明,除用高盐低pH法在一串红花中未提取出DNA外,其它均可提取出DNA,都能进行RAPD扩增。5种方法在一串红DNA提取中,提取效果由高到低依次为：核DNA法、改良CTAB法、SDS法、CTAB区室法、高盐低pH法;3个部位提取结果显示：叶片较容易得到高质量的DNA,茎段次之,花最差。     

土壤微生物总DNA提取方法的比较

采用4种土壤DNA提取方法提取了5种类型土壤的微生物总DNA，并对4种提取方法的DNA提取效果进行综合分析，进一步通过PCR—DGGE扩增提取DNA中的细菌16S rDNA片段，并对扩增产物进行DGGE电泳分析。结果表明，SDS-高盐缓冲液法抽提的DNA得率最高，SDS-酚氯仿抽提法的DNA得率最低。DNA的纯度，以BIO-101 DNA Extraction Kit试剂盒法最高，改进试剂盒法纯度最低。通过PCR-DGGE分析土壤微生物多样性结果表明，BIO-101 DNA Extraction Kit试剂盒法提取的DNA代表的微生物多样性最全，而SDS酚氯仿法抽提的DNA代表性最差。     

组培枣苗基因组DNA提取方法及其含量的比较

本文以组培二倍体木枣、四倍体变异苗和二倍体京枣苗为供试材料,采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测技术,研究了不同提取方法对其叶片基因组DNA的提取效果。结果表明,CTAB法提取枣叶片DNA的效果优于SDS法,表现为蛋白质杂质干扰少,DNA结构完整、纯度与得率高;用不同方法提取的样液中DNA片段的大小和分布是不同的,以改进的CTAB法提取的样液中大片段的DNA分子较多,所以在其底部分布较多,而用SDS法提取的样液中小片段的DNA分子较多,故在其上部分布较多;电泳时不同的加样量获得的DNA带也有较大差异,试验选出CTAB法提取样液的适宜的加样量为5μL（7.485μg）,SDS法提取样液的适宜的加样量为4μL（5.988μg）;枣品种间DNA的含量明显不同,木枣四倍体的DNA含量（3.074μg/μL）相当于组培木枣二倍体（1.497μg/μL）的2倍,也明显地高于京枣二倍体（2.182μg/μL）。这些结果为枣树遗传种质资源的研究奠定了一定的科学与技术基础。     

黄瓜白粉菌基因组DNA 提取方法比较

以黄瓜白粉病菌为试验材料,比较分析了改良CTAB法、SDS法和真菌试剂盒法对黄瓜白粉病菌基因组DNA提取的效果。结果表明,CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA在纯度(R=A260 nm /A 280 nm)和产量上均优于SDS法和真菌试剂盒法,且杂质少。CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA产率为204.3 μg/g,而SDS法和真菌试剂盒法分别为147.7、117.7 μg/g,且方法产率之间差异极显著。采用CTAB法提取的DNA纯度较高,为1.969 6;SDS法和真菌试剂盒法提取的DND纯度较低,分别为1.832 2和1.507 9。     

甘蔗基因组DNA简单和快速提取方法

目前国内外关于提取DNA的方法很多(Honeycutt et al．，1992；顾红雅和瞿礼嘉，1998)，但因研究的对象和目的不同而有所差异。甘蔗含有大量的酚和多糖等有机物质，由于这些物质的干扰，按照常规提取植物组织总DNA的方法提取甘蔗基因组DNA，常常因产量小和纯度低而不能满足实验要求。本实验在前人研究的基础上(Honeycutt et al．，1992；顾红雅和瞿礼嘉，1998)，对所用药品及技术进行改进，摸索出一套快速、简便且可获得高质量基因组DNA的改良方法。用此方法提取的DNA进行酶切、RAPD和Southem杂交分析，都取得了良好的效果。     

不同保存方法和提取方法对扁桃基因组DNA质量的影响

以扁桃（Amygdalus conmmuis L.）幼叶为试材,通过7种保存方法并采用改良2×CTAB法、3×CTAB法和SDS法对其DNA进行提取,用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA完整性,分光光度计测其产量和纯度,以探讨不同保存方法和不同提取方法对扁桃DNA提取质量的影响。结果表明,扁桃新鲜幼叶、压干幼叶后在-75℃保存、45℃烘干幼叶后在-75℃保存以及硅胶干燥幼叶后在-75℃保存三个月均可以用三种提取方法可获得完整的DNA,纯度和产量均高,其保存和提取方法简便易行且获得高质量DNA。扁桃鲜叶直接放在-20℃保存比-75℃保存更易获得DNA,而压干后的扁桃叶片-20℃保存三个月并采用SDS法提取,获得高产量、高纯度的DNA,不影响提取效果。SDS法和改良3×CTAB法均可获得扁桃DNA,但SDS法优于3×CTAB法,其操作简单、耗时少;改良2×CTAB法提取扁桃成功率较低,不稳定,产量比其它两种方法低。     

从棉花组织中提取棉花曲叶病毒基因组DNA之方法

本研究比较了５种方法从棉花叶中提取棉花曲叶病毒基因组ＤＮＡ的提取效果。对不同的ＣＬＣｕＶ分离物的ＰＣＲ扩增表明，通常用于双生病毒基因组ＤＮＡ提取的ＮａＯＨ法和ＣＴＡＢ提取的ＤＮＡ无法用于ＰＣＲ检测，但ＣＴＡＢ法提取的ＤＮＡ可用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交。有３种方法可有效地提取ＣＬＣｕＶ ＤＮＡ，供ＰＣＲ扩增使用，这３种方法的共同点是去除了棉花组织中的干扰物质。     

苹果基因组DNA的快速提取

提出了一种适用于苹果（Malus pumila Mill)RAPD分析的基因组DNA的快速提取方法。用本法提取的DNA质量高，简便，快速，经济，每天可提取200个DNA样品，每个DNA样品可供50－100次PCR反应，用10个碱基随机引物进行PCR扩增，95％以上的样品都才扩增出3－10条清晰的泳带。     

实蝇DNA提取方法的比较

在实蝇的口岸检疫鉴定工作中，主要以成虫的外部形态特征作为分类依据，而口岸截获的往往是幼虫或卵，通常的做法是对其进行室内饲养待获得成虫后再进行鉴定。这样的检疫周期太长，并且不利于对世界或某一区域实蝇种群结构的了解。分子生物学技术可以弥补传统方法的不足，能快速、准确和灵敏地检测出实蝇种类，揭示其种群间的亲缘关系并提早制定相应的防治方法。本实验比较了5种实蝇基因组DNA提取方法，并进一步用RAPD技术快速鉴定其种类。     

棉花根际促生菌基因组DNA的提取及其鉴定

植物根际微生物基因组的提取往往因为细胞壁不能完全裂解以及内含物的成分和含量受到影响,获得完整的基因组DNA一直是土壤微生物分子生物学研究的关键。本文以新疆盐碱地棉花根际促生菌为材料,比较了SDS法、CTAB法以及高盐结合的CTAB法提取棉花根际促生菌基因组DNA的效率,结果显示,SDS法和CTAB法在细胞裂解后,由于过多的多糖类物质混于上清液中使其过于粘稠而无法分层,没能得到DNA样品。高盐结合的CTAB法则有效弥补了上述方法的不足,能够获得A260/A280为1.82、A260/A230为2.43的高质量基因组DNA。同时实验还以细菌16SrDNA为内标进行PCR扩增,结果证明所获得的棉花根际促生菌基因组DNA可直接用于PCR等分子生物学进一步研究。     

土壤-植物系统中硒的浸提形态研究进展

硒是环境中重要的生命元素,对人和动植物体的健康有重大的影响。本文结合国内外的最新研究进展,对土壤-植物系统中硒的浸提形态做了较为详细的综述。首先,重点介绍了目前研究较多的土壤硒的浸提形态,然后介绍了植物中硒的浸提形态,最后展望了硒在浸提技术上的发展趋势,以便为今后的研究提供参考。     

Extraction of DNA from soil

There is an increased interest in the extraction of nucleic acids from various environmental samples, since molecular techniques allow less biased access to a greater portion of uncultivable microorganisms. Two strategies have been developed to improve DNA recovery in terms of yield, purity and unbiased representation of the microbial diversity. The first approach consists of the direct extraction of nucleic acids from soil through in situ cell lysis followed by DNA purification. The alternative approach is based on the separation of bacteria from the soil particles followed by cell lysis and then DNA purification. Several published methods describe the recovery of highly purified nucleic acids that are well-suited for molecular purposes even though a new challenge concerns the recovery of large bacterial DNAs essential for functional investigation of gene clusters and biosynthetic pathways. This review presents an overview of the available methods to achieve this challenging objective.     

花椒精油的萃取及生物活性成分应用研究进展

花椒精油是从花椒果壳、叶等部位所提取的植物精油,其独特的香气和麻味以及多种生物活性物质除了传统的调味用途外,还具有灭菌、杀虫、保鲜、药理等多种作用。为了给畜牧健康养殖、安全保鲜及花椒精油的进一步开发利用提供更多思路和支撑。通过查阅相关文献,归纳总结了花椒精油的主要成分、提取方式、微胶囊制备工艺以及生物活性抗菌、保鲜、药理等研究现状。花椒精油优秀的广谱抗菌效应和保鲜作用结合花椒精油微胶囊制备工艺可以更好地保留其生物活性,不仅可广泛地应用于食品调味、果蔬保鲜等方面,在我国畜牧业向全面无抗养殖发展的背景下,作为优良的植物来源保鲜剂和替代抗生素添加剂,在畜牧业杀虫灭菌、健康养殖、肉产品货架期保鲜等环节也有着广阔的应用前景。     

LiCl沉淀法提取富含荚膜的细菌基因组DNA

结合提取基因组DNA的CTAB法(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵)和用于提取海藻基因组DNA的LiCl法,设计了针对产生较多荚膜多糖细菌的DNA提取方法—LiCl沉淀法。通过电泳、分光光度计及16SrRNA基因扩增检测,证明LiCl沉淀法可以有效地提取产荚膜细菌基因组DNA,其片断大小约为23kb,不需进一步纯化即可用于后续分子生物学实验。     

Optimizing the indirect extraction of prokaryotic DNA from soils

The objective of this work was to develop protocols to selectively extract prokaryotic DNA from soils, representative of the whole community, amenable to high-throughput whole genome shotgun sequencing. Prokaryotic cells were extracted from soils by blending, followed by gradient centrifugation. Detergent (sodium deoxycholate) was required for complete dispersion of soil aggregates and detachment of prokaryotic cells from a broad range of soil types. Repeated extractions of a given soil sample were critical to maximize cell yield. Furthermore, cells obtained through repeated extractions captured unique prokaryotic assemblages that would otherwise have been missed in single-pass extractions. DNA was isolated from extracted cells using one of the following treatments: i) lysozyme-SDS-proteinase K (enzymatic) digestion; ii) potassium ethyl xanthogenate digestion; or iii) enzymatic digestion of cells embedded in agarose plugs. In addition, these methods were compared to a commercial bead-beating extraction kit (MoBio UltraClean). Of the indirect DNA extraction methods, plug digestion generated the largest yields (up to 70% of yields obtained by direct DNA extraction) of high-molecular weight DNA (>400 kb). Thus, plug digestion is amenable to large-insert metagenomic library construction and analysis. Comparisons of banding patterns generated by RAPD-PCR and DGGE indicated that sequence composition and inferred community composition of a given extract varied greatly with DNA isolation method. While overall diversity did not change significantly with the cell lysis method, analysis of 16S rRNA gene clone libraries revealed that each extraction procedure produced unique distributions of prokaryotic phyla within the sample population.     

高等植物DNA条形码最新研究进展及其应用

植物DNA条形码的筛选工作主要集中于叶绿体基因上,包括位于编码区的mat K、rbc L、UPA、rpo B、rpo C1、acc D、ndh J和YCF5等以及间隔区的trn H-psb A、trn L-trn F、atp F-atp H、trn D-trn Y和psb K-psb I等,其中mat K、rbc L和trn H-psb A研究最为成熟,可作为核心条形码序列。由于每个基因进化速率不同以及植物种间杂交较为频繁等诸多原因,不同类群植物的最适条形码序列有很大差别。本文综述了DNA条形码的最新研究进展以及条形码技术在物种鉴定、分类学问题修订、新种隐种的发现、植物药材真伪鉴定、食品质量控制和安全、出入境植物检验检疫等方面的应用,提出了cp DNA条形码在应用中的不足之处以及解决措施等,并对DNA条形码未来的发展进行了展望,以期为高等植物的应用提供强有力的分子依据。     

亚麻叶中活性物质提取工艺优化研究

为筛选制定出亚麻叶中五种活性物质的最佳提取工艺,以亚麻叶中提取的荭草素、绿原酸、异荭草素、牡荆素、异牡荆素5种成分的含量作为指标,通过单因素试验研究含醇量、提取时间、固液比、提取次数、提取温度对5种成分提取效果的影响;并利用L9(34)正交试验法方法,优选最佳的提取工艺。确定的最佳提取工艺为乙醇溶液浓度75%、料液比1 ∶ 15(g/mL)、提取次数2次、提取时间1.5 h、温度80 ℃。该提取工艺是一种适合于亚麻叶中有效成分提取的有效方法,可为亚麻叶研究和开发利用提供参考。     

碱性土壤基因组DNA的分离纯化和基因文库的构建

直接从广西南宁市凤凰纸业排污沟碱性土壤样品中抽提和分离纯化混合基因组DNA，所获得DNA的产量为每克土壤样品10～30pg。采用限制性内切酶EcoR1酶处理后，构建了以pGEM-3Zf( )为载体的DNA部分文库。文库的容量为23650个转化子。外源片段DNA平均大小为3．2kb。建库效率为每克环境样品获得6000个左右的含1～15kb外源随机插入片段的克隆。通过DNA序列测定和同源性比较，对从文库随机词取的16个转化子序列进行分析，发现13个外源插入片段包含序列尚未确定的DNA片段。