家蚕微孢子虫转宿主果蝇的研究初探

[目的]研究家蚕微孢子虫对果蝇的侵染性,为系统研究家蚕微孢子虫侵染机制提供新视野,也为探索微孢子虫的生物防治效果提供参考。[方法]用家蚕微孢子添食野生型和突变型果蝇,并用Calcofluor White M2R荧光染色法进行果蝇体液内的家蚕微孢子虫形态观察。[结果]结果表明,家蚕微孢子虫在转宿主情况下能够侵染果蝇,且被感染的突变型果蝇体内家蚕微孢子虫的数量多于野生型果蝇。[结论]家蚕微孢子虫能侵染果蝇,该研究结果为研究家蚕微孢子虫侵染其他宿主提供了初步参考,为进一步了解和认识家蚕微孢子虫侵染机制奠定了基础。     

家蚕3种微孢子虫孢子表面抗原特性的研究

用０．５％Ｋ２ＣＯ３溶液提取Ｎ．ｂ、ＳＣＭ６、ＳＣＭ７３种家蚕微孢子虫孢子表面抗原，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳了三者表面抗原蛋白的差异，查明三者无共同成份存在。用Ｎ．ｂ抗体蛋白致敏炭素制成检液，对Ｎ．ｂ孢子为阳性反应，对ＳＣＭ６、ＳＣＭ７均不出现阳性凝集反应。可用以有效判别三者中的Ｎ．ｂ孢子。     

家蚕微孢子虫诊断方法研究进展

自家蚕微粒子病被发现近200a来,它给世界各养蚕国家造成巨大的经济损失,已被列为蚕种生产的唯一检疫对象。为了更好地了解并总结家蚕微孢子虫现有的诊断方法及其研究进展,该研究主要对近些年来在光学显微镜检测、电镜观察检测、免疫学检测和分子生物学检测方面的研究进行了综述,并且展望未来发展趋势,以期对家蚕微粒子病进行更快速、准确的诊断与防治。     

灰蜗牛微孢子虫感染家蚕的研究

[目的]通过控制桑园中昆虫等生物的传染环境,达到控制家蚕微粒子病爆发。[方法]将桑园蜗牛镜检发现携带微粒子孢子的磨液添食家蚕后镜检,同时将家蚕微粒子孢子添食蜗牛后镜检。[结果]灰蜗牛携带的微孢子虫能够感染家蚕;家蚕微粒子孢子可以感染蜗牛。[结论]通过综合治理灰蜗牛,至少可以辅助控制和净化桑园环境。     

蓝叶甲微孢子虫的特征及其对家蚕的病原性研究

从四川省阆中市蚕区捕捉的蓝叶甲(P(?)Baly)中分离到一种大型微孢子虫,孢子大小为4.75±0.40μm×2.85±0.25μm,孢子的超微结构及在家蚕体内的发育周期符合Nosema属的特征,对家蚕有强的食下传染,感染家蚕后的经卵传染频率很低。     

家蚕微孢子虫和MG1孢子超微结构的观察

家蚕微孢子石和ＭＣ１两种孢子超微结构差异显著。家蚕微孢子虫孢子的外壁，质膜均只见一层结构，极膜呈封闭锥体，膜的层次清晰，极丝平均１３圈，极丝与孢子中轴倾角４１°左右；ＭＧ１微孢子的外壁有３层结构，质膜分２层，极膜层次不清，极丝平均１１圈，极丝也孢子中轴倾角４５°左右，极泡有许多大的颗粒状物。     

家蚕新病原性微孢子虫（Nosema SP）的研究

1990年秋从四川省阆中蚕种场种茧育家蚕(Bombyx mori)幼虫分离出一种不同于家蚕微粒子孢子(Nosema bombycis)的新病原性微孢子虫(Nosema SP)。该微孢子虫对蚕的寄生性强,侵染蚕幼虫的绢丝腺、马氏管、肌肉、脂肪体及中肠等组织。孢子为卵圆形,大小3.8～4.1×2.4～2.6μm,极丝长126±8.35μm(113～140μm),在抱予形成期产孢体(7～9×3～4μm),以二裂形成两个孢子母细胞。极丝一般为单层绕成14～15圈(偶有16圈),倾斜角40°以上。     

家蚕微孢子虫（Nosemabombycis）孢子人工发芽的研究

研究表明，目前常用的适合于向昆虫培养细胞接种的Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子的几种人工发芽方法的发芽率存在较大差异．同一种方法在不同的发芽培养基中的发芽率也有所不同．并发现在Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子的人工发芽过程中Ｋ＋促进作用比Ｎａ＋明显，而且还证实Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子在人工发芽过程中的完全发芽时间为６０ｍｉ     

广西菜粉蝶微孢子虫对家蚕的病原性研究

对广西某菜地和桑同周围的菜粉蝶成虫的调查结果表明,菜粉蝶微粒子病自然感染率在30%以上,且上半年高于下半年;菜粉蝶微孢子虫与典型家蚕微孢子虫(Nosema bombyeis,N.b)比较研究结果表明,菜粉蝶微孢子虫呈长椭圆形,大小约4.70μm×2.30μm,与N.b存在差异,采用PCR技术鉴别也证明菜粉蝶微孢子虫与N.b不同;通过添食感染家蚕,发现菜粉蝶微孢子虫对家蚕有较强的食下感染能力,也有轻微的胚种传染能力,证明菜粉蝶微孢子虫对蚕种生产具有潜在的危害性,应重视防治.     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)对蝗虫的防治效果

用不同浓度梯度的家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)对中华稻蝗(Oxya chinensis)和云南板齿蝗( Sinstauchira yunnan)进行了转宿主添食感染试验.结果表明,家蚕微孢子虫在高浓度(107个/mL)添食的情况下对蝗虫有较强的感染力和致死率,家蚕微孢子虫对蝗虫的半致死浓度(LC50)为6.9×106个/mL.     

家蚕微粒子虫(Nosema bombycis)感染家蚕的病理学研究

Nosema bombycis感染家蚕后 ,家蚕中肠海藻糖酶活性显著下降 ,大量裂殖体的形成是其下降的重要原因 .血淋巴总糖和海藻糖等与能量代谢密切相关物质的含量也明显下降 .感染后血淋巴海藻糖酶活性略有上升 ,但对血糖总量无明显影响 .血淋巴蛋白质含量的下降要滞后于与能量代谢有关的物质 ,其中贮存蛋白量的下降明显高于 30 K蛋白     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)对三峡库区菜青虫(Pieris rapae)的感染性研究

本试验用不同浓度的家蚕微孢子虫感染三峡库区菜青虫,结果表明:家蚕微孢子虫对菜青虫感染性较强,致死率高,其致死中量(ID50)为:1.5×104个/m l。当微孢子虫浓度为1.0×107个/m l时,菜青虫死亡率高达87.8%,校正死亡率也高达86.4%,体现了家蚕微孢子虫对菜青虫的显著致病能力,由此探索了家蚕微孢子虫作为生物农药的可行性。     

壮蚕感染微孢子虫与蛾期毒率的关系

采用口腔微量注射接种法,研究了壮蚕(4～5龄)感染微孢子虫与蛾期微粒子病显微镜判别的关系.结果表明:在一定范围内,显微镜检别出微粒子病的时期随微孢子虫接种剂量的增大而提早,造成蚕蛾镜检有毒的壮蚕感染微孢子虫的下限剂量为32～64个/条,其下限感染剂量在不同发育阶段的蚕之间存在一定差异.本试验结果对于当前蚕种生产上微粒子病的防治工作有积极指导意义.     

Comparative Study on the Infectivity and Spore Surface Protein of Nosema bombycis and Its Morphological Variant Strain

A new morphological variant strain of microsporidium was produced by infecting the mulberry looper, Hemerophila atrilineata [Phthonandria atrilineata], with Nosema bombycis successively for 24 times, and named 24Nbh. Comparative studies on morphology, infectivity and spore surface protein were conducted. 24Nbh was short and wide, and had a significant difference (P＜0.01) over the Nb spores. The infectivity tests conducted on second instar silkworm larvae showed that IC50 of 24Nbh was 1.98× 104 spores mL-1 and of Nb was 1.72× 103 spores mL-1, thus indicating that the infectivity of Nb decreased 11.5 times after multiplying in mulberry looper for 24 times. The IC50 of spores from silkworm infected with 24 Nbh was 6.9 times less than Nb, showing that the infectivity of 24Nbh spores rejuvenated very fast when reinfected to silkworms, further more, the length and width of such spore was larger than 24Nbh (P＜0.01) and smaller than Nb (P＜0.05).The SDS-PAGE profiles of Nb and 24Nbh were generally the same, 4 distinct proteins of 12, 17, 30, 33 kDa were obtained with difference in quantity. When 120 μg of protein was applied for 2D-PAGE, five suspected different proteins with difference in quantity were observed. These results demonstrate that these differential proteins maybe associated with variation in infectivity of the spores.     

家蚕微粒子虫(Nosema bombycis)与其形态变异株的侵染性及孢子表面蛋白的比较研究

 用家蚕微粒子虫(Nosema bombycis，Nb)连续感染桑尺蠖（Hemerophila atrilineata）24次后，获得孢子显著变粗短（P <0.01）的形态变异株（24Nbh）。Nb与24Nbh的侵染性及表面蛋白的比较研究表明，24Nbh感染2龄起蚕(Bombyx mori)的感染中浓度（IC50）为1.98×104spores/ml，而Nb为1.72×103 spores/ml，即Nb连续感染桑尺蠖24次后对家蚕的侵染性下降了11.5倍。24Nbh回复感染家蚕一次后的孢子，对2龄起蚕的IC50与Nb对照相差6.9倍，即对家蚕的侵染性又快速恢复;与24Nbh相比，孢子长径及长短径比虽然显著回复（P <0.01），但仍小于Nb（P <0.05）。SDS-PAGE显示，Nb和24Nbh孢子表面蛋白的带型基本一致，均有4条主带（12kD、17kD、30 kD、33 kD），但在量上差异明显。2D-PAGE显示，当上样量均为120μg时，二者孢子表面蛋白都以中偏酸性蛋白（pI5～7）为主，但表面蛋白在量和种类上均存在明显差异，发现5个可疑的差异蛋白点，推测这种差异与微孢子虫的侵染性变异有关。     

经营桑园和蚕室环境内家蚕微粒子病原消长和分布的研究

通过对桑园家蚕微粒子病原消长和分布的调查,发现经营桑园内蚕微粒子病原的发生量为:收蚁前<收蚁<三龄盛食<五龄盛食,五龄期的发生量最大。在桑树上的分布量为:桑叶<枝条<树干;在桑园土层中的分布量:表层>1cm>2cm>3cm。对蚕室环境的调查分析认为:蚕室内存在着微粒子病原严重污染的情况;病原孢子的发生量在蚕室内随蚕龄增加明显上升;凡与桑叶相关的场所病原孢子的发生量明显高于其它场所;种场外原蚕饲育区室病原孢子发生量高于场部。