CR1aa-卵丘细胞共培养牛体外受精卵的卵裂率及囊胚率

牛卵母细胞用5％CS的TCM－199培养液体外成熟培养（IVM）22h；以BO液＋咖啡因作精子获能处理1.5h；BO液＋BSA的培养液体外受精（IVF）5h；受精卵（含卵丘细胞）用5％CS的CR1aa培养液在5％CO2、955空气、38.5℃、饱和湿度的培养环境中体外培养（IVC）7－8d，结果受精卵裂率为72.4%（56.3%－81.0%），囊胚率23.7%(12.5%-40.9%）。     

白牦牛卵母细胞体外成熟的研究

研究了不同激素配比、性周期阶段对白牦牛卵母细胞体外成熟的影响，同时研究了不同培养基对早期胚胎体外发育的影响。结果表明：M199＋0．2mmol／L丙酮酸钠＋10％NBs＋5．0mg／L LH＋0．5mg／LFSH＋1＞g／ml 17β-E2是白牦牛卵母细胞体外成熟较为理想的培养系统（成熟率79．4％、卵裂率42．5％）。采集白牦牛卵母细胞时卵巢所处性周期阶段（卵泡期、黄体期）影响卵母细胞的体外成熟（成熟率分别为77．6％、69．5％，卵裂率分别为45．7％、35．6％）。输卵管上皮细胞和颗粒细胞是理想的共培养细胞，能有效克服白牦牛早期胚胎发育阻滞（桑囊胚发育率分别为10．6％、7．7％）。     

FBS和不同培养液对牛孤雌胚体外发育的影响

研究培养液中血清的添加时间和添加浓度及不同培养体系对牛孤雌胚胎体外发育潜力的影响。结果表明：牛成熟卵母细胞孤雌激活后的第3天添加10％的FBS对孤雌胚的体外发育效果；良好。4种培养体系在孤雌激活后的第3天添加10％的FBS，平均囊胚率分别可达46．25％（SOFaar）、43．58％（CRlaa）、40．25％（KSOMaa）、17．98％（TCM199）；TCM199组的囊胚率显著低于其他3组（P〈0.05），SOFaa优于CRlaa和KSOMaa组，但差异不显著（P〉0．05）。     

1996年第1～4期总目录

综述与专论专养雄蚕的研究进展—……··,…·李木旺等（3—1）发挥专业优势服务蚕桑生产………周文军（3—4）桑树的钾素营养—…………………·王波（4—l）从养蚕型式的变革看养蚕发展方向………………’”””””’”””“””…··’·’………·”……·金磷H（4—4）实验与研究家蚕亲本遗传距离与杂种优势和待殊配合力的关系—”““”’”””“”””””””““”””………华卫建等门一1）桑粉虱空间分布型及抽样技术研究………………”””’”””””””””””’·’………………朱黎明等（l—4）微粒子病的蚕座传染…     

昆明小鼠卵母细胞体外成熟培养条件优化

对不同的培养液（M199、mDPBS、TYH）和培养液添加物对小鼠C级卵母细胞体外发育和成熟的影响进行了研究。结果表明,mDPBS培养液的培养效果（GVBD：19．8％,PBI：12．3％）好于（P〈0．05）M199培养液（GVBD：13．3％,PBI：8．9％）和TYH培养液（GVBD：12．3％,PBI：7．4％）;mDPBS中添加丙酮酸钠和FCS（GVBD：100％,PBI：86．3％）明显优于（P〈0.01）单纯添加丙酮酸钠（GVBD：42．9％,PBI：23．8％）,也明显优于（P〈0．01）添加丙酮酸钠＋BSA（GVBD：63．2％,PBI：53．8％）;就A、B和C级3种卵母细胞相比,C级卵母细胞的成熟发育最佳,GVBD的发生率为100．0％,PBI的排出率为86．2％。     

不同细胞因子对山羊卵母细胞体外成熟与早期胚胎发育的影响

研究在培养液中添加不同浓度的GDNF、LIF、SCF及其不同组合对山羊卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响。结果表明：SCF、LIF、GDNF对山羊卵母细胞体外成熟有显著影响（62．0％、75．5％、63．7％vs53．0％,P〈0．05）,不同浓度间无显著影响（P〉0．05）,添加LIF、GDNF对卵裂率有显著影响（48．1％、43．3％vs26．2％,P〈0．05）,SCF对卵裂率无显著影响（37．6％vs26．2％P〉0．05）,不同细胞因子都能显著提高囊胚率（21．6％、27．3％、26．2％vs6．3％,P〈0．05）。10IU·mL^-1的LIF、15Iu·mL^-1的GDNF和15IU·mL^-1的SCF对山羊胚胎体外生产最好;GDNF＋LIF＋SCF组和GDNF＋LIF组卵母细胞成熟率显著高于LIF＋SCF,GDNF＋SCF,GDNF和LIF组（83．3％、80．3％vs72．8％、65．4％、63．3％、77．9％,P〈0．05）,GDNF＋SCF和LIF＋SCF添加组间对卵母细胞体外成熟无差异（72．8％vs65．4％,P〉0．05）,早期胚胎发育上GDNF＋LIF＋SCF组优于GDNF＋LIF、LIF＋SCF和GDNF＋SCF组,且均能显著提高卵裂率（50．2％、48．9％、47．9％、43．7％vs21．4％,P〈0．05）和囊胚率（31．3％、27．6％、25．5％、24．3％vs13．6％,P〈0．05）。可见GDNF、LIF和SCF能提高卵母细胞的成熟率,早期胚胎的卵裂率和囊胚率,LIF和GDNF对卵母细胞体外成熟有协同作用。     

犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％,３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％）,但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著;（２）在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）;（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为１６．０％（４／２５）,０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。     

细胞松驰素B（CB）对水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的影响

研究主要探讨冷冻前细胞松弛素B（CB）预处理水牛MⅡ期卵母细胞对其冷冻效果的影响。以水牛MⅡ期的卵母细胞为材料，通过玻璃毛细管（GMP）和玻璃化冷冻液EDS33（16．5％EG＋16．5％DMSO＋Sucrose）对水牛MⅡ期的卵母细胞进行两步法玻璃化冷冻保存，即卵母细胞首先放入预平衡液（7．5％EG＋7．5％DMSO＋Sucrose）中平衡3min，然后再移入玻璃化冷冻液中30s后装管直接投入液氮。冷冻前卵母细胞随机分为2组，一组用7．5μg／mLCB预处理30min，另一组未用CB预处理作对照组。然后都冷冻保存。解冻是在蔗糖浓度逐渐降低的解冻液中进行的。解冻后存活的卵母细胞进行孤雌激活，以分裂率和囊胚发育率作为评定卵母细胞冷冻效果的指标。结果发现，GMP组和GMP＋CB组卵母细胞解冻后的存活率（88．89％、94．20％）和培养后发育到囊胚的比率（8．82％、14．55％）差异均不显著（P〉0．05），但GMP组和GMP＋CB组存活卵母细胞激活后的分裂率差异显著（32．69％、55．56％，P〈0．05），所以细胞松弛素B预处理可以提高GMP冷冻卵母细胞的发育能力。．     

间情期犬间母细胞体外受精的影响因素

试验对间情期犬卵母细胞体外受精的影响因素进行了系统研究。结果表明①以TALP液作为犬精子获能液，精子回收率(64±10.5)%、顶体反应率(41.5±4.1)%高于TCM199+20%FCS液。②用TCM199+20%FCS作为受精液，卵母细胞单精受精率(18.6%)、原核形成率(10.4%)，高于TALP受精液，而退化率低于TALP受精液(4.9%比19.7%，P＜0.01)。③犬精子与卵母细胞在受精液中共同孵育12h，单精受精率(23.5%)、原核形成率(12.7%)高于共同孵育8、16、20h，而多精受精率(15.7%)、退化率(3.9%)低于共同孵育16、20h。④犬精子为2×106个/mL时，单精受精率(26.0%)、原核形成率(14.6%)，高于0.5×106、1×106、3×106、5×106个/mL组。卵母细胞多精受精率和退化率随精子含量增加而增加。⑤肝素为29mg/L时,卵母细胞单精受精率(24.4%)、原核形成率(12.2%)高于0、10、20、40、50mg/L组。而犬精子获能2h后，顶体反应率和卵母细胞多精受精率随肝素质量浓度增加而增加。     

透明质酸酶对牛卵母细胞孤雌激活的研究

在37－39℃50mL/L CO2条件下，用含80mL/L发情牛血清及50mL/L犊牛血清的M199成熟培养液培养牛的A、B级卵丘－卵母细胞复合体（COCs)，18－22h后以无血清的TCM199培养液洗涤3次，用透明质酸酶消化吹打脱去卵丘细胞，以无血清的M199培养液洗涤3次，移回成熟培养液中培养。结果：卵细胞于成熟后第3d开始出现卵裂，第5d卵裂率达到37％，第9d囊胚率达5％－9％。表明透明质酸酶可以促使成熟的牛孤雌卵母细胞激活并发育至囊胚。     

应用体外培养技术产生的嵌合体牛出生

据日本畜产研究杂志报道,日本山口大学铃木达行等研究人员,利用体外受精及体外培养技术,获得了两头嵌合体牛。其具体方法是,从屠宰场取回褐色和牛和荷兰黑白花奶牛的卵巢,用注射器从卵泡中吸取卵母细胞;用TCM—199(含5％血清和0.01mg/m1FSH)培养21小时(5％CO_2,95％O_2,38.5℃)后,再用利木赞牛和黑色和牛精液进     

用屠宰场绵羊卵巢和附睾进行胚胎体外生产的研究

研究了从屠宰场得到的绵羊卵巢可采集的Ａ级卵母细胞数在不同月份的变化规律及运用屠宰场母羊的卵母细胞、公羊的附睾精子生产早期胚胎的可行性。结果表明在我国新疆地区，９、１０两个月份每个卵巢得到的平均Ａ级卵母细胞数显著高于其它月份（Ｐ＜０．０５），是进行绵羊体外受精研究的理想季节。卵巢卵母细胞经成熟培养后与附睾精子体外受精３０ｈ后，入孵卵母细胞在Ｍ１９９＋ＦＣＳ和Ｍ１９９＋ＦＣＳ＋ＣＣｓ培养液中的卵裂率分别为２２．４％和４４．５％；继续培养４～７ｄ，卵裂胚发育为１６－细胞以上的比例分别为６３．２％和８３．９％，差异极显著（Ｐ＜０．０１）。     

柑桔类果树

MX）3424～6月份柑桔、批把、杨梅园管理要点l石学根（渐江省科学院柑桔研究所黄岩318020）,龚洁强…／／浙江柑桔．lqD,16（）．．44～巧（下转对页）NX）3437～9月柑桔、批把、杨梅园管理要点l龚洁强（浙江省台州市黄岩区林业特产局318（Pf）,石学根…／浙江柑桔．－19D,16（2．－41－429！N）344闽北柑桔园绿肥覆盖效果调查／胡忠全,刘玉环（福建省南平市农科所建阳354200）｛浙江柑桔．1999,161）．18—199川U好抓好病虫防治,提高柑桔品质／陈道茂（浙江省科学院柑桔研究所黄岩318（：if）,蔡国君··＊浙江柑桔、－19eq,1…     

不同型牛血清对家兔原核胚序贯培养体外发育的影响

采用不同型血清分别添加到TCM199和mTCM199培养液、RPMI1640和mRPMI1640培养液中，对兔原核期受精卵进行了体外序贯培养，并对各组间不同时期发育率进行了分析比较。结果显示：体外培养至第72h时，3个体外序贯培养体系间8-细胞胚率、桑椹胚率差异不显著（P〉0．05），当体外培养至囊胚时，100mL／L NBS＋TCM199（mTCM199）培养体系、100mL／L NBS＋RPMI1640（mRPMI1640）培养体系的囊胚率均显著低于100mL／L FBS＋RPMI1640（mRPMI1640）培养体系的囊胚率（三组的囊胚率依次是27．3％、35．9%、97．2%，P〈0．01）。但前两组之间差异不显著。结果表明，不同型血清对兔早期胚胎体外正常发育具有很大影响，序贯培养中添加国产NBS的培养液的培养效果明显低于添加进口FBS的培养液的培养效果。     

小鼠卵母细胞氯化锶激活条件

以昆明小鼠为试验对象，研究了氯化锶（SrCl2)浓度，激尖处理时间以及卵龄对卵母细胞SrCl2孤雌活化的影响。hCG注射后18h的小鼠卵母细胞在1.6,5.0,10,20mmol/L SrCl2的激活液中处理10min，各组间的激活率（原核期卵母细胞的比例）无显著性差异（P＞0．05）。10，20mmol/L SrCl2组发育至2－，4－细胞期比率（59．26％，20．37％，63．79％，20．69％）同于1．6，5．0mmol/L 组（20．63％，9．26％，47．06％，7．84）（P＜05）。只有20mmol/L组的少数激活卵母细胞（3．45％）发育至桑椹胚阶段。10，20mmol/L SrCl2组处理20，40，60min，2组间的活化率无显著性差异。处理40min,20mmol/L组的桑椹胚和囊胚发育率（64．44％，22．22％）均显著高于10mmol/L组（30．36％，11．61％），处理60min,10mmol/L组的桑椹胚和囊胚发育率（84．68％，46．77％）均显著高于20mmol/L组（67．46％，28．57％），10mmol/L SrCl2处理，20，40，60，180，360min，其活化率和2－细胞的发育率无显著性差异。60，180min处理组的囊胚发育率（49．58％，47．59％）差异不显著，但2者均显著高于20，40，360min组（4．50％，12．24％和35．53％），后3者组间差异显著。随卵龄的增加，活化率显著增加。hCG注射后16h卵母细胞的活化率（77．78％）显著高于14h的卵母细胞（29．63％），而hCG注射后18h卵母细胞的活化率（49．19％）又显著高于16h的卵母细胞，hCG注射后18，20h卵母细胞的活化率差异不显著（94．19％，85．90％）。hCG注射后14，16，18h卵母细胞激活后的囊胚发育率（6．71％，27．78％，47．67％），各组间差异显著。但hCG注射后20h卵母细胞激活后的囊胚发育率（39．74％）显著低于18h的卵母细胞。     

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞，并可通过体外受精获得试管山羊     

吉林畜牧兽医1991年总目录

·实验研究· 吉林麦饭石饲喂肥育猪的试验…胡仲明等(1 .1) 马鹿茸茸重与茸尺关系的研究…李春义等(3 .1) 高钙日校对‘sZn在蛋鸡体内沉积的影响···”·…… ‘”‘’‘”“’‘’·””…’···········,··…韩靖康等(4 .1) SD在犬体内代谢动力学的研究”····‘·······……‘一 ’.’‘’‘’.”“‘””’‘’,‘··.······.’……程远国等(4 .3) 鸡鸭蛋壳生物学特性的对比研究”····~~·······一 ”””””’‘”’‘”’·’‘’·····,······一葛辽海等(4.6) 空间条件对康氏…     

TCM199对陇东绒山羊细管精液的冷冻效果

目的研究陇东绒山羊细管精液冷冻时,通过在葡萄糖一柠檬酸盐稀释液中添加TCM199,观察其对陇东绒山羊细管冷冻精冷冻效果的影响。方法选用4个试验组和对照组进行对比试验,试验组是在稀释液基础上分别添加TCM199标准液,含量为0．5％、1％、3％、5％（V／V）。结果表明：添加19／6的TCM199标准液的试验组（B）效果较好,其冷冻解冻后精子活力高于对照组和其它试验组,但差异不显著（P〉0．05）,质膜完整率试验组和对照组相比差异不显著（P〉0．05）,在精子穿卵活力试验中（SPA）,试验组和对照组相比差异不显著（P〉0．05）。但在细管解冻后不同时间段活力测定试验中,解冻后5h、8h、12h,试验组（B）和对照组活力差异显著（P〈0．05）,且随着时间延长呈下降趋势。因此制作陇东绒山羊精液细管冷冻时,添加1％TCM199标准液具有比较好的效果。     

秋水仙碱处理成龄桑诱导四倍体研究

近年来，关于应用秋水仙碱诱导桑树四倍体的报道较多，所处理材料多为实生苗、嫁接苗或幼龄桑[1～3]。笔者应用秋水仙碱对成龄桑进行诱变处理，有的品种在桑树老条，3年累计4x发生率达75％。而且成龄桑产生的4x芽条，翌年即可开花结果，提早与二倍体杂交培育三倍体，现报道如下。1材料与方法1.1品种及树龄处理桑品种有选792、8033、中山19号、8210、8036等。树龄5～8年。1．2诱导剂的配制种类对4种试剂进行试验：I0．2％秋水仙碱；II0.4％秋水仙碱；III2×10-66－BA（6-苄基嘌呤）＋0．4％秋水仙碱；IV3％DMSO（二甲亚矾）＋O·4％秋…     

一九九四年上海畜牧兽医通讯总目次

第一期因调查（21）使用牛型提纯结核菌素检疫奶牛结核·各地信息·商品介绍·病（23）鸡传染性鼻炎的诊治（24）超剂量盐霉素粉狗年到犬业俏—………………………………。……（2）使鸡中毒（24）用唆乙醇治疗肉仔鸡痛风病（24一更正—…··’·’……·”…………………··,……………·个）起鸭肉毒梭茵毒素中毒病的诊疗（25）”维迪康”治疗“新型养猪模式颁过部级鳖定—…………………·（9）宠物病毒性腹泻病疗效好（2）肥皂水治疗长毛兔毛（业科技》杂志征订启事—……………………·（16）球病（25）幼鸭食变质西瓜皮中毒（28）哺…