鹌鹑源火鸡隐孢子虫生物学特性研究

利用鹌鹑源火鸡隐孢子虫（Cryptosporidium meleagridis）分别感染雏鸡、雏鸭、雏鸵鸟和小白鼠研究其致病性.结果能成功感染雏鸡、雏鸭和小白鼠,但不能感染雏鸵鸟.2个感染组雏鸡主要在感染后第3天引起雏鸡强烈的腹泻症状,但非免疫抑制组比免疫抑制组症状稍轻,此外,免疫抑制组的鸡出现了多个排卵囊高峰;感染相同剂量的2个试验组雏鸭的排卵囊显露期均较雏鸡短,非免疫抑制组雏鸭的排卵囊规律呈一过性,2组雏鸭均未出现明显的临床症状;免疫抑制组小白鼠出现多个排卵囊高峰,显露期持续24 d,正常组小白鼠的排卵囊规律呈一过性.根据肠黏膜涂片,抗酸染色观察发现主要虫体寄生于雏鸭的回肠;通过病理组织学切片和电镜观察发现虫体主要寄生于雏鸡的回肠和小白鼠的十二指肠,但均主要引起肠绒毛的大量脱落,黏膜上皮细胞肿胀,炎性细胞浸润.试验证明鸭为鹌鹑源C.meleagridis的新宿主,但敏感性较低;鹌鹑源C.meleagridis不感染非洲雏鸵鸟.发现鹌鹑源C.meleagridis在鹌鹑、鸡和鸭体内寄生部位与小鼠体内寄生部位有明显差异.     

鹌鹑源火鸡隐孢子虫在小白鼠和雏鸡体内内生发育阶段的超微结构比较

用鹌鹑源火鸡隐孢子虫（Cryptos poridium meleagridis）卵囊分别感染昆明系小白鼠和固始雏鸡，用透射电镜和扫描电镜观察比较了C．meleagridis在两种试验动物体内的内生发育虫体超微结构和致病性的差异。利用扫描电镜观察发现，鹌鹑源火鸡隐孢子虫（C.meleagridis）在小白鼠和雏鸡体内的寄生部位有较大差异，在小白鼠体内寄生于十二指肠，但在雏鸡体内主要寄生于回肠；C．meleagridis深嵌于小白鼠肠微绒毛丛内，微绒毛较为完整；但在雏鸡回肠，C．meleagridis似黏附在肠黏膜表面，微绒毛脱落明显，对雏鸡致病性明显比对小白鼠的致病性强。利用透射电镜在两种试验动物的样品中均观察到不同发育阶段的滋养体、裂殖体和大配子体以及正在孢子化的卵囊。滋养体和裂殖体在发育过程中可明显见到粗面内质网结构，裂殖生殖中期阶段粗面内质网尤其发达；小白鼠体内的C．meleagridis虫体与肠黏膜接触处形成一凹陷，寄生部位较深，而在雏鸡体内无此现象。此外，利用透射和扫描电镜均观察到虫体寄生部位周围微绒毛密度高而且也比其它部位长。形成这些差异的原因有待于进一步探讨。     

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫的研究

应用巢式聚合酶链反应（Nested PCR）-限制片段长度多态性 （restriction fragment length polymorphism, RFLP）方法对微小隐孢子虫（C．parvum）、安氏隐孢子虫（C．andersoni）和火鸡隐孢子虫（C．meleagrides）的鉴别进行了研究。结果显示C．parvum BOCC2、C．andesoni BOCC2和C．meleagrides CHCC1扩增产物片段大小分别为830bp、828bp和828bp，扩增产物分别经VspI酶切后形成3种不同的RFLP图谱，根据RFLP图谱可鉴别C．parvum、C．andersoni和C．meleagrides。本研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。     

河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行病学调查

为进一步掌握河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行状况,于2006年9月至2007年8月对河南省鹌鹑养殖量较大的5个地市47个鹌鹑养殖场（户）进行了调查。共采集1818份粪样,经饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检查,隐孢子虫感染率为13．15％（239／1818）。根据形态学特征,将分离到的2种隐孢子虫鉴定为贝氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫。调查结果表明,河南省不同品种鹌鹑之间隐孢子虫的感染率差异不显著,但鹌鹑隐孢子虫的感染率具有一定的地区、季节及年龄差异。     

不同禽源贝氏隐孢子虫分离株对鹌鹑致病性的比较研究

本研究旨在观察不同禽源贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)对鹌鹑的致病性差异。采用光镜、扫描电镜等技术研究了鸡源、鸭源、鹌鹑源、白文鸟源、鸵鸟源贝氏隐孢子虫分离株对10日龄鹌鹑的致病性。结果表明,感染鹌鹑均出现腹泻和呼吸道症状,排卵囊持续期11~18 d,虫体寄生于喉头、气管、法氏囊和泄殖腔。其中鸭源C.baileyi感染组鹌鹑发病率和死亡率分别为82.5%、25%,鸡源C.baileyi(郑州株)感染组发病率和死亡率分别为77.5%、12.5%,鹌鹑源C.baileyi感染组发病率、死亡率分别为37.5%和17.5%。本研究结果提示,不同禽源C.baileyi对鹌鹑有一定致病性,其致病性强弱存在差异。     

贝氏隐孢子虫内生发育虫体的扫描电镜观察

贝氏隐孢子虫内生发育各阶段虫体寄生于气管和法氏囊的微绒毛丛中 ,鸭对贝氏隐孢子虫的易感性低于鸡和丝毛乌骨鸡。滋养体呈球形 ,平均直径 1 3μm ;typeⅠ裂殖体 ,平均直径 2 4μm～ 3 0 μm ,内含 8个裂殖子 ,呈逆时针旋涡状或呈桔瓣状排列 ;typeⅡ裂殖体内含 4个裂殖子 ,两种类型裂殖体的裂殖子之间填充着颗粒状残体并包围着一个大的球形残体。成熟裂殖子逸出的方式分为 4种类型。裂殖子大小为 3 0× 0 6 μm ,呈香蕉形。大配子体呈球形直径 3 3μm～ 4 2 μm ,小配子体直径为 3μm～ 3 6 μm。小配子呈子弹状 ,大小为 1 2 μm× 0 3μm ,并观察到成熟小配子的释放方式。带虫空泡可分为无球形残体和有球形残体两类 ,根据观察结果推测带虫空泡基部的梳状结构不具备营养器官的功能 ,营养器官应为带虫空泡的底部     

用CPN60基因序列研究隐孢子虫种系发育关系

本试验以编码线粒体功能性蛋白Chaperonin 60(CPN60)的核基因作为研究对象,对隐孢子虫分离株CPN60基因进行扩增测序,用Clustal X1.81对扩增序列与GenBank相关参考序列进行比对,然后用PAUP4.0程序中邻接法(Neighbor-joining,NJ)、最大简约法(Parsimony,MP)构建基因树,同时用TREEPUZZLE程序Version4.1构建最大似然树(Maximum likelihood,ML),以确定不同隐孢子虫虫株之间的进化关系,并以18S rRNA和HSP70基因构建的进化树作参照,评价CPN60是否更适合作为隐孢子虫基因分型和进化关系的分子标记。结果显示:基于CPN60构建的进化树将隐孢子虫分为两大类:C.baileyi和C.meleagridis处于一个分枝,C.hominis、C.suis、C.parvum牛基因型和C.parvum鼠基因型处于另一个分枝上。不同隐孢子虫之间的同源性介于96%~100%,能有效区分隐孢子虫不同基因型。因此,CPN60基因序列也可作为隐孢子虫分离株种系发育的遗传标记。     

禽隐孢子虫病

隐孢子虫病是一种人畜共患的原虫性疾病。自1907年美国著名寄生虫学家Tyzzer在小鼠胃上皮细胞中发现鼠隐孢子虫(Cryptospoffdium muffs)以来，几乎在世界范围内所有脊椎动物均发现有隐孢予虫感染，但其致病性在很长一段时间内未被完全认识。虽然1955年就发现它可能是引起火鸡腹泻和死亡的病原，但并未引起人们重视。直到1976年发现隐孢子虫可导致免疫缺陷病人，     

一例禽隐孢子虫病的诊治

正禽隐孢子虫病是由隐孢子虫科隐孢子虫属的贝氏隐孢子虫、火鸡隐孢子虫寄生于家禽的呼吸系统、消化道、法氏囊和泄殖腔内所引起的一种原虫病。隐孢子虫病呈全球性分布,能使鸡、鸭、鹅等多种家禽致病,是仪次于球虫病的高发性原虫病。近年来,由于禽场的饲养管理水平不断提高,典型的禽隐孢子虫病病例在规模化禽场已很少     

鸭对体吸虫生活史的研究

本文报道鸭对体吸虫在第一中间宿主（赤豆螺）第二中间宿主（鱼类）及终末宿主（鸭）体内的发育过程,经人工感染实验,有８种鱼类及３种蛙类的蝌蚪可充当此虫种的第二中间宿主,在水温１７℃～２３℃,鸭对体吸虫完成一个生活世代的发育至少需１１０ｄ,其中赤豆螺体内需６０ｄ,鱼体内３０ｄ,鸭体内２０ｄ。     

分子生物学技术在隐孢子虫研究中的应用

隐孢子虫是顶复门原虫，主要寄生于人或动物的消化道上皮并引起腹泻，是寄生虫学、环境微生物学研究热点之一。分子生物学技术给隐孢子虫研究注入了强大动力，本文就其在隐孢子虫检测、分子流行病学调查、分类学以及药物设计等研究领域的应用作一综述。     

鹌鹑肌肉肌苷酸含量和鹑肉保鲜时间的研究

用纸层析法测定鹌鹑肌肉提取液中的肌苷酸含量,实验结果表明:1.鹌鹑性别不同的肌苷酸含量(平均值):雌鹑为5.557μM/g(肉);雄鹑为5.274μM/g(肉),差异不显著(p>0.05)。2.两组不同日龄鹌鹑胸肌肌苷酸含量(平均值):35日龄为5.739μM/g,70日龄为4.941μM/g,差异极显著(p<0.01)。3.鹌鹑不同部位肌苷酸含量,胸肌明显高于腿肌,腿肌的肌苷酸含量平均值仅为胸肌的60.51％,差异极显著(p<0.01)。4.不同条件保存鹑肉时,随着时间的延长,肌肉中的肌苷酸均降解,降解速度,低温(0℃)较室温缓慢。5.测定肌肉中肌苷酸的含量可作为衡量鹌鹑肌肉鲜度的一项有用的指标。     

水源中隐孢子虫种类和基因型鉴定技术研究进展

目前,隐孢子虫有效种有20个。隐孢子虫的分子流行病学研究表明,隐孢子虫具有宿主特异性。目前,感染人的隐孢子虫种和基因型有C．horninis、C.parvum、C．meleagridis、C.felis、C.canis、C.nuris、C．suis genotype和C．cervine genotype等。水源性隐孢子虫暴发,具有重要的公共卫生意义。分子鉴定技术已广泛应用于检测水中隐孢子虫,水中检测到的隐孢子虫有9个。通过分析其分子组成特性表明,成年牛可能是水污染的主要根源,除了居民用水和农业污染外,鹿、麝鼠、田鼠、鸟和其它野生动物可能也与水污染有关。隐孢子虫分子基因型鉴定工具可能为水源保护性研究提供一个更有力的溯源追踪工具。     

合肥市犬隐孢子虫感染情况初步调查

目的了解合肥市犬隐孢子虫的感染情况。方法在合肥市随机采集不同年龄、性别与饲养条件的犬粪样69份,采用金胺-酚改良抗酸染色法检测粪样隐孢子虫感染情况,并根据卵囊大小和形态,进行虫种鉴定。结果犬隐孢子虫感染率为28.99%。对68个隐孢子虫卵囊进行观察和测量,椭圆形卵囊大小平均为6.20μm×4.34μm,卵囊形状指数平均为1.44,初步鉴定为鼠隐孢子虫（Cryptosporidium muris）;近圆形卵囊,大小平均为4.69μm×4.58μm,卵囊形状指数平均为1.125,初步鉴定为微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）。结论犬隐孢子虫的感染率存在年龄差异,年龄越小,感染率越高;饲养管理条件差的犬隐孢子虫感染率高;而隐孢子虫感染率与性别没有关系。     

园养东北虎等猫科动物隐孢子虫感染情况的调查

为掌握东北虎等多种猫科动物隐孢子虫的感染状况,本试验采集216份东北虎等多种猫科动物粪样,离心水洗除去重铬酸钾后,应用Sheather’s蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法进行检查。Sheather’s蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法镜检结果显示,东北虎等多种猫科动物隐孢子虫的平均阳性率分别1．39％（3／216）和5．09％（11／216）。可见,目前园养东北虎等养猫科动物隐孢子虫感染率仍维持在较低水平。     

野生动物隐孢子虫的种类和基因型

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是一种全球性的人兽共患原虫病,具有广泛的宿主范围,可以感染鸟类、哺乳类、鱼类、爬行类、两栖类以及人在内的240多种动物。野生动物隐孢子虫做为人隐孢子虫病感染的重要传播来源,对其进行生物学研究具有重要的公共卫生意义。本文分别叙述了野生动物隐孢子虫的种类及基因型,为进一步研究野生动物的隐孢子虫病提供了有效的参考。     

鹌鹑对新城疫病毒的易感性试验

用从新城疫病死鹌鹑中分离的新城疫病毒(NDV)株(QNDV-1)和鸡新城疫毒株(F_(48)E_8),对5日龄、10日龄、25日龄、35日龄和70日龄等不同日龄鹌鹑进行了感染试验,并用15日龄鹌鹑做了呼吸道、肌肉注射、皮下注射、脑内注射、静脉注射和消化道等不同途径的感染试验。结果表明:供试不同日龄鹌鹑均可被感染发病,并出现和自然病例同样的症状或死亡,随着日龄增长,死亡率有降低趋势,70日龄鹌鹑(成年产卵)出现同自然病例同样的产卵量下降和产出异常卵现象;不同途径均可使鹌鹑感染发病或死亡,其中以脑内注射和静脉注射所表现的发病或死亡最为急剧;从病死鹌鹑中可重新收回到新城疫病毒,发病耐过鹌鹑可产生特异性抗体。     

奶牛隐孢子虫Nested PCR—RFLP方法的建立及初步应用

为快速检测并准确鉴别奶牛隐孢子虫种,以隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域为基础,设计内、外引物,并根据软件分析确定相应的内切酶EcoT141,采用Nested PCR-RFLP方法进行虫种种型鉴别分析。在Nested PCR两次PCR反应中,以微小隐孢子虫（Cryptos poridium parvum,C．p）和安氏隐孢子虫（Cryptosporidium andersoni,C．an）卵囊提取的DNA为模板,均能扩增出长约800bp和500bp的明亮条带,且特异性强,其他虫种不能扩增出条带,该方法最低可检测到5个卵囊／g粪便;对于由内引物扩增出的500bp的条带,C.an的PCR产物能被内切酶EcoT141酶切,酶切后的片段分别为416bp和92bp,C.p的PCR产物不能被此酶酶切。用所建立的Nested PCR-RFLP法对上海奶牛389头和进口奶牛200头的共计589份粪样进行检测,Nested PCR的结果表明上海奶牛和进口奶牛的隐孢子虫阳性率分别为19．02％和3．5％,RFLP的结果表明上海奶牛感染的主要是Cp和C．an,进口奶牛感染的主要是C．p。研究结果表明,本研究建立的检测奶牛粪便中的隐孢子虫的NestedPCR-RFLP法,可用于奶牛隐孢子虫流行病学调查并有效鉴别奶牛隐孢子虫种。