乳杆菌FGM9菌株对小鼠毒性作用研究

评价乳杆菌FGM9菌株对昆明种小鼠的一般毒性作用。将80只小鼠随机分为8组,设两个阴性对照,分别灌胃和腹腔注射实验菌株,灌胃剂量分别为4.5×109、4.5×107和4.5×105CFU/mL,注射剂量分别为5.2×109、5.2×107和5.2×105CFU/mL,连续7 d记录小鼠的一般体征、中毒及死亡情况。结果各组小鼠均无死亡,未见任何毒性反应,健康体征均为Ⅰ级,各实验组体重变化与对照组相比无显著差异;各组小鼠未见任何异常病变,脏器系数与对照组相比亦无显著差异(P0.05),血液学指标正常。表明乳杆菌FGM9菌株对小鼠无不良影响。     

乳酸菌―芽孢菌发酵黄芪对小鼠免疫功能作用的研究简

试验旨在探讨乳酸菌―芽孢菌发酵黄芪对小鼠免疫功能的影响。将84只小鼠分成6组,每组14只,分别为生理盐水组（阴性对照组）、未发酵黄芪组（阳性对照组,黄芪生药浓度为150 mg/mL）、试验Ⅰ组（黄芪生药浓度为60 mg/mL）、试验Ⅱ组（黄芪生药浓度为90 mg/mL）、试验Ⅲ组（黄芪生药浓度为120 mg/mL）、试验Ⅳ组（黄芪生药浓度为150 mg/mL）。小鼠采用灌胃方式给药30 d,最后处死小鼠测定其体重、免疫器官（胸腺和脾脏）系数、免疫因子（IgG、IL-6、sIgA）。结果显示,给药30 d后,试验组小鼠体重明显升高;试验Ⅰ组免疫器官系数极显著高于对照组（P＜0.01）;试验Ⅲ、Ⅳ组免疫因子IgG和sIgA均极显著高于对照组（P＜0.01）。由此可知,乳酸菌―芽孢菌发酵黄芪对小鼠的免疫功能有很好的促进作用。     

坚强芽胞杆菌-CX10安全性评价

为评价分离自白蚁肠道的坚强芽胞杆菌-CX10(Bacillus firms-CX10)菌株的安全性,进行坚强芽胞杆菌-CX10菌株经口灌胃和腹腔注射的小鼠急性毒性试验,试验分为生理盐水正常组、低剂量组(1.5×10~4CFU/mL)、中剂量组(1.5×10~6CFU/mL)和高剂量组(1.5×10~8CFU/mL),分别连续灌胃和腹腔注射3 d,每天2次,7 d后处死小鼠剖检。结果表明,试验各组小鼠无中毒反应和死亡,小鼠的精神状态、食欲和行为等在一般健康等级中处于I级,剖检小鼠脏器均未见病变;低、中、高剂量组及对照组小鼠体增重、血液学指标、血生化指标以及脏器指数差异不显著(P0.05);对主要脏器进行病理组织切片观察,镜检结果显示,坚强芽胞杆菌-CX10对小鼠主要脏器均无明显致病理变化。由结果可知,白蚁源坚强芽胞杆菌-CX10菌株生物学特性良好,且对小鼠安全无毒,初步确定了菌株的安全性,对开发微生态制剂产品提供一定的参考。     

黄芪花的饲用安全性评价

为了评价黄芪花的饲用安全性,根据食品安全国家标准对黄芪花进行急性经口毒性试验、Ames致突变试验、哺乳动物红细胞微核试验、小鼠精母细胞染色体畸变试验以及90 d亚慢性毒性试验。结果表明,大鼠和小鼠在灌胃黄芪花14 d后均未出现明显中毒和死亡情况,黄芪花急性经口毒性试验中大鼠和小鼠最大耐受量LD50大于20.00 g/kg BW。采用黄芪花提取物进行3项遗传毒性试验,结果表明,黄芪花提取物未能引起受试菌株发生回复突变,对小鼠红细胞含微核细胞率无影响,对染色体异常细胞率、常染色体单价体和性染色体单价体无影响。90 d经口毒性试验显示,不同黄芪花剂量组喂养下大鼠的增重、总进食量及食物利用率无显著变化,大鼠血液指标和脏器重量均无明显毒理学变化,解剖及组织学观察也未见明显病理组织学变化,未观察到有害作用剂量为1.20 g/kg BW。研究表明,黄芪花安全性高,无致突变性及亚急性毒性,在试验剂量下安全无毒。     

硫磺负离子添加剂的急性毒性研究

为研究硫磺负离子添加剂对小鼠的急性毒性,本试验采用急性毒性试验方法,将硫磺负离子添加剂制成混悬液,分别以5、10、15 g/kg·d三种剂量给小鼠灌胃给药,并观察小鼠体重的增长情况和临床特征,以及解剖后脏器的情况。结果显示,各组小鼠均未表现出明显的临床毒性症状,与对照组相比试验组小鼠体重增长无显著差异,解剖后各脏器未见明显的毒性特征,脾脏和胸腺的脏器系数无显著差异。所以受试物对雌雄小鼠经口LD5015 g/kg·d,按急性毒性分级标准属于无毒级物质。     

益气黄芪散的亚慢性毒性试验

为了评价益气黄芪散的安全性,试验在小鼠急性试验的基础上进行了亚慢性毒性试验,将80只昆明小鼠随机分成对照组和试验Ⅰ~Ⅲ组,各试验组灌胃给予益气黄芪散14 d,于停药后第1,14天,各组随机抽取10只小鼠采血并解剖取其肾脏,采用组织病理学分析方法对肾脏组织的病理变化进行研究并测定血液生理生化指标。结果表明:试验Ⅰ~Ⅲ组小鼠的组织病理学变化及血液生理生化指标与对照组比较差异不显著。说明治疗剂量的益气黄芪散毒性很低,临床用药较为安全。     

酸马奶源酵母菌抗菌复合物灌胃剂量的筛选

为了筛选酸马奶源酵母菌抗菌复合物的最优灌胃剂量,试验采用乙酸乙酯提取法萃取酸马奶源酵母菌抗菌复合物,高效液相色谱法和增强型BCA蛋白检测试剂盒法测定其主要组分。选取昆明系小鼠150只,随机分为15组,每组10只。空白对照组和阴性对照组小鼠灌胃无菌PBS 7 d;阳性对照组小鼠灌胃环丙沙星;抗菌复合物组小鼠灌胃高(500 mg/kg)、中(250 mg/kg)、低(125 mg/kg)剂量的抗菌复合物;除空白对照组外,其他各组于第4天注射大肠杆菌(E.coli)O_8菌悬液。观察小鼠患病症状,采集各组小鼠小肠组织,H.E.染色后观察病理切片,并记录各组小鼠存活率。结果表明:在p H值为2.0和8.0条件下获得酸马奶源马克斯克鲁维酵母菌(K.marxianus)和酿酒酵母菌(S.cerevisiae)的4种抗菌复合物K2、K8、S2和S8,主要成分为有机酸和毒素蛋白。阴性对照组小鼠感染E.coli O_824 h后出现明显患病症状;36~72 h期间小鼠患病症状更加严重,死亡小鼠增多。注菌72 h后阴性对照组小鼠小肠组织损害严重;阳性对照组和K2低剂量组小鼠小肠组织较完整;K2高剂量和中剂量组小鼠小肠组织形态有所好转,但仍有少量上皮细胞脱落。K2、S2、S8低剂量和K8中剂量组小鼠存活率较高。说明低剂量125 mg/kg为酸马奶源酵母菌抗菌复合物的最优灌胃剂量。     

解淀粉芽孢杆菌固态发酵黄芪的安全性试验

为了评价解淀粉芽孢杆菌发酵黄芪的安全性,试验采用急性毒性、慢性毒性和小鼠骨髓细胞微核试验对小鼠的脏器系数、病理变化、血液生理生化指标及致突变性进行研究。结果表明:小鼠急性经口最大耐受剂量(MTD)为20 000 mg/kg,临床及病理学检查均未出现病理组织学变化;慢性毒性试验小鼠体征无异常变化,未出现死亡,在停药后第28天各组间小鼠脏器系数均差异不显著,各组间的血液生理生化指标差异不显著;小鼠骨髓细胞微核试验检测无致突变性。说明固态发酵黄芪粉安全性良好,对小鼠安全无毒,属于无毒性物质。     

1株植物内生菌解淀粉芽孢杆菌的安全性评价

试验旨在评价1株从杜仲中分离的解淀粉芽孢杆菌的安全性。试验从菌株溶血性、氨基酸脱羧和明胶液化试验、抗菌药物敏感性、腹腔注射、经口灌胃、抑菌活性等进行安全性综合评价。腹腔注射试验分为腹腔注射组(1.0×10¹⁰ CFU/0.3 mL)和生理盐水组,一次性注射,连续观察5 d。经口灌胃试验分为高剂量组(1.0×10¹⁰ CFU/0.2 mL)、中剂量组(1.0×10⁹ CFU/0.2 mL)、低剂量组(1.0×10⁸ CFU/0.2 mL)和生理盐水组,每天灌胃1次,连续灌胃28 d。结果显示,腹腔注射和经口灌胃小鼠均健康存活,未见临床变化,试验期间体重正常增加,各组小鼠血常规、血清生化指标和脏器指数差异均不显著(P>0.05),解淀粉芽孢杆菌DZ01未发生易位,氨基酸脱羧和明胶液化试验均为阴性。解淀粉芽孢杆菌DZ01对所测的8种抗菌药物均表现敏感。除粪肠球菌和铜绿假单胞菌外,解淀粉芽孢杆菌DZ01上清液对其余6株指示菌均具有抑菌活性。研究表明,解淀粉芽孢杆菌DZ01具有较好的安全性。     

乳酸链球菌素对腹泻小鼠盲肠菌群结构及脂代谢的影响北大核心CSCD

本试验旨在研究乳酸链球菌素(Nisin)对腹泻小鼠盲肠菌群结构和脂代谢的影响。选择7~9周龄无特定病原体(SPF)级50只小鼠(雌雄各占1/2),随机分成5组,分别为空白对照组、阴性对照组、环丙沙星组、氨苄青霉素组及Nisin组。除空白对照组小鼠腹腔注射等量灭菌生理盐水外,其余各组小鼠连续3 d腹腔注射致病性大肠杆菌(E.coli)O1悬液(2.50×1011CFU/mL)0.2 mL/只构建小鼠腹泻模型。连续注射3 d后,空白对照组和阴性对照组灌胃灭菌生理盐水,其他组灌胃对应物质,每天2次,每次0.3 mL,连续灌胃15 d。第15天灌胃2 h后采样,采用高通量测序技术对小鼠盲肠内容物中细菌结构测序分析,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法对小鼠血清、空肠、回肠和脑组织中金属肽酶含血小板反应蛋白1(ADAMTS1)、总胆固醇(TC)和胰岛素(INS)的含量进行检测。结果显示:与阴性对照组相比,Nisin使小鼠血清、回肠和脑组织中ADAMTS1的含量和回肠中INS的含量显著降低(P<0.05),血清、空肠和脑组织中TC的含量显著增加(P<0.05),并使小鼠各阶段的体重显著增加(P<0.05)。Nisin组小鼠盲肠菌群丰富度最高(ACE指数=2 469.54、Chao1指数=3 340.29)且多样性最高(Shannon指数=7.56),而阴性对照组则最低。Nisin组中疣微菌门(Verrucomicrobia)、蓝细菌门(Cyanobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)及厚壁菌门(Firmicutes)为优势菌门。阴性对照组中放线菌门(Actinobacteria)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、变形菌门(Proteobacteria)及拟杆菌门为优势菌门。由此得出,Nisin可提高盲肠菌群多样性,降低血清、回肠和脑组织中ADAMTS1的含量和回肠中INS的含量,增加血清、空肠和脑组织中TC的含量,从而影响腹泻小鼠盲肠菌群结构及脂代谢。     

种子液传代次数对益生菌FGM株发酵黄芪转化多糖的影响

益生菌FGM株发酵黄芪后,产物粗多糖得率显著提高。为进一步提高FGM株发酵黄芪转化多糖的稳定性,本试验将连续传代的FGM株种子液接种黄芪进行液体发酵,采用细菌平板计数法和苯酚-硫酸法分别测定发酵前、后的细菌总数和发酵后黄芪多糖的含量,并对结果进行了统计学分析。结果表明菌种在多次连续传代后会产生菌种退化现象,发酵产物中多糖含量与种子液细菌总数呈极显著相关（P=0.007）,其中第4代种子液发酵黄芪转化多糖的性能最高。     

益生菌发酵提高黄芪根、茎、叶活性成分含量的研究

黄芪药物资源的利用往往仅限于黄芪的根部,而黄芪茎、叶却被大量废弃,造成了药物资源的严重浪费。试验旨在采用益生菌发酵黄芪,研究黄芪根、茎、叶中黄酮类、皂苷类及黄芪多糖等有效成分含量的变化,以期高效利用黄芪。采用从鸡肠道分离保存的一株益生菌（FGM）,用于发酵黄芪的根、茎、叶。结果显示,经FGM发酵后,黄芪根、一年生茎、两年生茎、一年生叶、两年生叶中粗多糖含量分别提高177.46%、227.27%、207.11%、170.61%、182.28%;总黄酮含量分别提高55.67%、33.68%、30.04%、-8.17%、-6.57%;总皂苷含量分别提高68.50%、55.91%、55.71%、40.93%、46.13%。以上结果表明,利用益生菌发酵可使黄芪各部位中主要活性成分含量提高,这对高效利用黄芪、进一步开发传统中药资源有非常重要的意义。     

Study on Improving Active Ingredients of Astragalus Root,Stem and Leaf by Probiotic Fermentation

The utilization of Astragalus resource was often limited to the root, while the stem and leaf had always been discarded, causing serious waste of traditional Chinese medicine resources. This experiment was aimed to study the changes of the content of active ingredients such as Astragalus polysaccharides, flavonoids and saponins in Astragalus root, stem and leaf by probiotic fermentation. A strain of FGM probiotic isolated from chicken intestines was used in this experiment for the fermentation of Astragalus root, stem and leaf. The results showed that, after fermentation, the crude polysaccharide contents of Astragalus root, annual stem, two years stem, annual leaf, two years leaf increased by 177.46%, 227.27%, 207.11%, 170.61% and 182.28%, respectively, the total flavonoids contents increased by 55.67%, 33.68%, 30.04%, -8.17% and -6.57%, respectively, and the total saponins contents increased by 68.50%, 55.91%, 55.71%, 40.93% and 46.13%, respectively. FGM probiotic fermentation made the main component contents of Astragalus increased, which would help for the further utilization of different parts of Astragalus, and efficient utilization of traditional Chinese medicine resources.     

发酵黄芪对肉鸡生长性能、抗氧化功能的影响

试验旨在研究黄芪发酵前后对肉鸡生长性能、抗氧化功能的影响。将210只1日龄AA肉鸡随机分为7组,每组3个重复,每个重复10只。A组为对照组,饲喂基础日粮;B、C、D、E、F、G组分别在基础日粮中添加0.2%黄芪、0.5%黄芪、0.8%黄芪、0.2%发酵黄芪、0.5%发酵黄芪、0.8%发酵黄芪,添加量以质量百分比计。试验期为42 d。分别于第21、42天测定肉鸡生长指标、抗氧化指标。结果表明,在第21天,发酵黄芪组平均日采食量均显著高于黄芪组（P < 0.05）,黄芪组料重比显著低于对照组和发酵黄芪组（P < 0.05）;E组血清过氧化氢酶（CAT）含量显著高于A、B组（P < 0.05）,血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著高于与A组（P < 0.05）。在第42天,发酵黄芪组平均日增重均较高,料重比显著低于A、B组（P < 0.05）;试验组GSH-Px活性均显著高于A组（P < 0.05）,发酵黄芪组与黄芪组相比差异不显著（P > 0.05）,发酵黄芪组血清中超氧化物歧化酶（T-SOD）活性均高于黄芪组,且与B和C组差异显著（P < 0.05）。综上所述,在肉鸡日粮中添加一定量发酵黄芪能显著提高平均日增重,降低料肉比,且可通过提高血清中GSH-Px和T-SOD活性来提高其抗氧化能力;发酵黄芪的作用效果优于黄芪,最适宜添加量为0.5%。     

甘草风味发酵乳的研制

[目的]以复原乳为原料,利用甘草提取液、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌,发酵制备风味发酵乳。[方法]通过单因素试验,研究甘草液添加量、白糖添加量和发酵时间对试验产品感官品质影响。利用正交试验,设计甘草风味发酵乳的最佳工艺参数。[结果]甘草风味发酵乳的最佳发酵条件：接种量3%,甘草提取液添加量20%,白砂糖添加量6%,42℃发酵6 h。发酵乳风味良好,凝乳状态均匀,有较好的15天贮藏期稳定性,有较好感官品质,保持活菌数在6.5×108 CFU/mL以上。[结论]本文经过试验研制新口味发酵乳,拓宽发酵乳市场,满足消费者需求。     

响应面法优化益生菌FGM发酵黄芪多糖的提取工艺

为确定益生菌FGM发酵黄芪多糖的最佳提取工艺,本试验以发酵黄芪多糖含量为考察指标,采用响应面法对工艺的提取参数进行优化,并建立回归模型。结果显示,提取时间、提取温度和料液比对发酵黄芪多糖的含量影响显著,并且两两因素间存在一定的交互作用;影响发酵黄芪多糖提取含量的工艺因素按主次顺序排列为：料液比 > 提取温度 > 提取时间;乳酸菌发酵黄芪液多糖提取最佳工艺为：提取时间65 min、提取温度80℃、料液比为1：9,在此条件下,发酵黄芪多糖的含量为6.72 mg/mL。试验证明该工艺可行,可为新兽药开发提供参考。     

Optimization of Polysaccharides Extraction from Astragalus membranaceus Fermented by FGM Strain with Response Surface Method

Response surface method was used to optimize main process parameters for the polysaccharides extractions from Astragalus membranaceus fermented by probiotic FGM strain.A regression model equation was fitted.The results showed that extraction time, extraction temperature and solid-liquid ratio were significant factors on polysaccharide content fermented from Astragalus membranaceus and there was interactive effects between every two factors.Polysaccharide content was significantly affected by solid-liquid ratio,followed by extraction temperature and extraction time.The optimum conditions were found to be that the extraction time was 65 min, extraction temperature was 80℃,solid-liquid ratio was 1:9,and the polysaccharide content was 6.72 mg/mL at this condition.The results showed that the model was practical that could provide a base for exploitation new medicine.     

Effect of Fermented Traditional Chinese Medicine on Preventing and Treating Colibacillosis and Immune Regulation in Broilers

This study was aimed to evaluate the efficacy of the fermented traditional Chinese medicine on treating colibacillosis and immune regulation in chickens.240 healthy 1-day-old AA White-feathered broilers were selected to carry out the control test of Escherichia coli O78 LD₅₀ and compound Chinese medicine fermentation broth on colibacillosis.The therapeutic effect was evaluated at 28 days old,and the immune organ index,antioxidant index and intestinal flora were measured at 28 and 42 days old.The results showed that the infection time of Escherichia coli was delayed from 4 to 24 h after the treatment of fermentation liquid of traditional Chinese medicine fermented by Lactobacillus plantarum and Bacillus subtilis.The effective rates of high dose group (1.0 g/mL),medium dose group (0.5 g/mL) and antibiotic group (neomycin sulfate) were 80.0%,76.7% and 80.0%,and the cure rates were 80.0%,70.0% and 70.0%,respectively.Compared with infection and antibiotic groups,the thymus index and bursa index in high dose group at 28 days old were increased by 165.6%(P<0.05),25.4%(P>0.05) and 82.6%(P<0.05),94.3% (P<0.05),respectively.The thymus index and bursa index at 42 days old were increased by 97.4%,82.0% and 43.4%,27.5% (P<0.05),respectively.The T-AOC,TP,GSH-Px and T-SOD antioxidant indexes were significant difference (P<0.05),and significantly increased the content of lactic acid bacteria in intestine and reduced the content of Escherichia coli at 28 and 42 days old (P<0.05).In conclusion,the medium dose group of fermented traditional Chinese medicine (0.5 g/mL) had obvious antibacterial effect and provided substitute for antibiotics,the high dose group of fermented traditional Chinese medicine (1.0 g/mL) was significantly better than antibiotics for broilers.     

复方中药发酵液对肉鸡大肠杆菌病的防治效果及免疫调节作用

试验旨在研究复方中药发酵液对肉鸡大肠杆菌病的防治效果及免疫调节作用。选择健康1日龄AA白羽肉鸡240羽,分别进行大肠杆菌O78半数致死剂量和复方中药发酵液对大肠杆菌病的防治试验。在28日龄评价治疗效果,并在28、42日龄分别检测免疫器官指数、抗氧化指标和肠道菌群等指标。结果显示,经过植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌等菌株发酵后的复方中药发酵液能够将大肠杆菌的感染时间由4 h延迟至24 h,高剂量组（1.0 g/mL）、中剂量组（0.5 g/mL）、抗生素组（硫酸新霉素）有效率分别为80.0%、76.7%和80.0%,治愈率分别为80.0%、70.0%和70.0%;高剂量组与感染组和抗生素组相比,28日龄时胸腺指数分别提高了165.6%（P<0.05）、25.4%（P>0.05）,法氏囊指数分别提高了82.6%和94.3%（P<0.05）,42日龄时胸腺指数分别提高了97.4%和82.0%（P<0.05）,法氏囊指数分别提高了43.4%和27.5%（P<0.05）,28、42日龄时抗氧化指标T-AOC、TP含量及GSH-Px、T-SOD活性差异显著（P<0.05）,能够显著提高肠道内乳酸菌含量,降低大肠杆菌含量（P<0.05）。综上,中剂量组（0.5 g/mL）复方中药发酵液抗菌效果明显,能够替代抗生素,高剂量组（1.0 g/mL）复方中药发酵液对肉鸡其他指标明显优于抗生素。