离子交换层析复性重组人γ-干扰素折叠二聚体的形成

SP Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用尿素梯度法进行重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性实验.结果表明,尿素梯度离子交换层析法能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,复性后的重组人γ-干扰素的纯度达95%,蛋白收率达54%,比活为7.5×105IU·mg-1.以Superdex 75凝胶作为体积排阻层析介质,对离子交换层析复性的样品进行分析,表明离子交换层析复性的样品中没有重组人γ-干扰素聚集体存在.荧光光谱分析表明重折叠的重组人γ-干扰素的构象接近于其天然二聚体构象.     

硫酸铵浓度对疏水作用层析纯化重组乙肝表面抗原的影响

以表面抗原活性收率和纯度为考察指标,转化乙肝病毒preS2-S基因重组酵母株,经甘油培养基充分增殖,转移到甲醇培养基中诱导表达.破碎细胞收集细胞原液,离心15000 r·min-1除去细胞碎片,超滤浓缩.结果表明,硫酸铵0.12、0.16 mol·L-1时盐浓度低,HBsAg未结合到疏水介质上;硫酸铵0.24 mol·L-1时疏水性强, HBsAg不宜从介质上洗脱.表明0.20 mol·L-1硫酸铵更适合重组HBsAg纯化.     

重组白细胞介素-2高效纯化方法建立

依次通过离子交换法、凝胶过滤法纯化重组白细胞介素-2(IL-2)粗品,利用SDS-PAGE电泳和hIL-2 Elisa kit检测纯化后重组IL-2的纯度和浓度。结果表明,纯化后的重组IL-2纯度和浓度高。本纯化方法简单、稳定、纯化效果好,可为重组IL-2的生产工艺提供技术支持和依据。     

重组细胞色素P450 BM-3酶的表达条件及初步纯化研究

对重组细胞色素P450 BM-3基因工程菌的培养条件进行了单因素优化,确定了较佳的P450BM-3培养和表达条件:接种量1%,装液量100 mL/500 mL,发酵培养基加入0.1 mg·L-1FeCl3,OD578达到1.0左右时升温至42℃诱导,诱导时间为5 h.考察了DEAE-Sepharose FF与Resource Q 2种阴离子介质对分离纯化P450 BM-3的影响.结果表明,Resource Q纯化效果优于DEAE-Sepharose FF,通过AKTA explorer100对Resource Q分离条件进行了优化,0.3 mol·L-1、0.5 mol·L-1的两步NaCl阶跃洗脱,P450 BM-3纯度较高,活性收率为30.1%,纯化倍数为2.12.     

重组猪干扰素α的纯化工艺研究

[目的]研究重组猪干扰素α的纯化工艺,为进一步研究该蛋白的分子结构及rPoIFN-α标准品的制备奠定基础。[方法]将含重组菌E.coliBL21诱导表达后得到的粗制rPoIFN-α,分别用2种方案进行纯化。方案1,依次用GST亲和层析法、DEAE阴离子交换法及分子筛法层析三步法进行纯化;方案2,依次用GST亲和层析和分子筛法层析两步法进行纯化。纯化结果用SDS-PAGE及Western-blot进行纯度检测及鉴定。[结果]诱导表达后的表达产物经SDS-PAGE检测,发现在45Kd分子量处有目的条带,Western-blot检测有特异性条带。通过两步法纯化后的rPoIFN-α纯度达96%,蛋白得率为42.8%,三步纯化纯度为98.8%。[结论]两步法得到的蛋白纯度非常接近三步法,但与三步法相比工艺更为简单方便。     

黑曲霉D226乳糖酶分离纯化研究

为从黑曲霉D2-26发酵液中得到单一的乳糖酶组分,以便研究其酶学性质。试验通过采用过滤、超滤、硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25脱盐、DEAE-纤维素-32离子强度梯度层析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-纤维素-32 pH梯度层析等方法从发酵液中分离纯化乳糖酶,纯化酶液经PAGE电泳鉴定得到单一蛋白条带。为此建立了一套简单易行的黑曲霉D2-26乳糖酶分离纯化方法。     

枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺研究

［目的］优化枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺。［方法］采用系列预处理、初步层析和精细纯化试验。［结果］优化的分离纯化工艺为：发酵液经离心、三氯乙酸处理、超滤浓缩脱盐,再上阴离子交换柱,或用乙醇处理后贮存,为离子交换备用。初步层析介质用阴离子交换QSepharoseF.F.,缓冲体系为TrisHCl（pH值8.0）,体系电导率为6.0mS/cm,上样量为240.0ATU/ml介质,产品纯度为70.2％,回收率达90.0％。用SephacrylSi100凝胶过滤柱精细纯化水蛭素,在一定流速范围内,流速对纯化效果影响不大,上样量可为10.0ml,得到的纯品纯度可达95.1％,得率为93.0％,SDSPAGE电泳为单一条带。［结论］可为进一步工业化分离纯化水蛭素研究提供借鉴。     

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.     

离子交换树脂法纯化水溶性红曲红色素的研究

以弱碱性阴离子交换树脂D301吸附水溶性红曲色素溶液,95%乙醇洗脱,然后进行HPLC分析,结果表明,红曲色素含有8种黄色素组份,其最大吸收峰均在380 nm附近;弱碱性阴离子交换树脂D301可实现红色素与黄色素组份的有效分离.     

枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺研究（摘要）

[目的]优化枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺。[方法]通过系列预处理和初步层析和精细纯化试验。发酵液固液分离和预处理：大批的发酵液采用连续流离心,取上清液,滴加50%三氯乙酸,当pH值达到2.2～2.5时停止滴加,静置1 h,离心,取上清液,用饱和NaOH调pH值回中性。然后利用SYNDER-UF202型超滤装置进行超滤浓缩脱盐,先用孔径为0.1μm的滤膜芯进行微滤除大固粒,再用截留分子量为1 000 Da的超滤膜芯进行超滤浓缩,加蒸馏水重复超滤浓缩脱盐。然后在等电点pH 4.0左右进行6倍体积的乙醇沉淀浓缩。离子交换初步层析：最佳pH值8.0,以Tris-HCl缓冲体系为佳;强阴离子交换选用Q Sepharose F.F.介质;系统电导率6 ms/cm,水蛭素的最大上样量以每毫升介质240 ATU为佳,流速1 ml/min;优化工艺在强阴离子交换HiPrep 16/10Q上放大。Sephacryl S-100凝胶过滤柱纯化水蛭素：在一定流速范围内,流速对纯化效果影响不大,上样量可在10ml左右。[结果]优化的分离纯化路线为：大量发酵液→离心→三氯乙酸处理（91%回收率）→再离心→超滤浓缩脱盐（80%回收率）→乙醇沉淀浓缩（82%回收率）→强阴离子交换（90%回收率）→硫酸氨沉淀浓缩（90%回收率）→Sepharcyl S-100凝胶过滤（回收率93%）→纯品（总回收率=91%×80%×82%×90%×90%×93%=45%,纯度95.1%）。[结论]可为进一步工业化分离纯化水蛭素研究提供借鉴。     

利用离子交换层析方法分离与纯化口蹄疫病毒抗原

[目的]利用离子交换层析方法分离与纯化口蹄疫病毒抗原。[方法]利用阴离子交换树脂制备高纯度的FMDV抗原,通过对样品及缓冲液pH、流速、缓冲液的盐浓度、样品上样体积等条件的摸索,确定最佳的FMDV抗原洗脱条件。[结果]当缓冲液pH为8.0、流速1.2 m L/min、盐浓度450 mmol/L、上样体积1.5 m L时,FMDV抗原的纯化效果最佳。[结论]该研究结果可为离子交换层析在FMDV抗原的分离与纯化提供依据。     

三步层析法分离毕赤酵母工程菌中表达的新疆家蚕抗菌肽

通过离子交换层析、疏水作用层析和分子排阻层析等三步层析的方法,分离纯化了毕赤酵母工程菌所表达的新疆家蚕抗菌肽.结果表明,三步层析后,SDS电泳显示单一条带,分子量约为7.0 kDa;所纯化的新疆家蚕抗菌肽具有较强的抗菌活性.该纯化工艺的建立,为新疆家蚕抗菌肽在饲料添加剂、农用抗生素等方面的广泛应用奠定基础.     

离子色谱法测定鱿鱼中的三聚磷酸盐含量

建立了一种简单、快速的用离子色谱法测定海产品中的三聚磷酸盐的方法。以碳酸钠和碳酸氢钠溶液为淋洗液,利用阴离子色谱系统等度洗脱,通过对色谱分析条件的优化,选择13 min内出峰的三聚磷酸盐进行定量分析。结果表明:迁移时间和峰面积的最大相对标准偏差(RSD)分别为1.42%和2.56%。标准曲线的线性相关系数R2=0.999 7,检出限为3.0μg.mL-1(S/N=3)。以建立的方法测定鱿鱼中的三聚磷酸盐,结果显示,三聚磷酸盐的平均回收率为98.4%。     

离子色谱法测定水产品中亚硫酸盐的含量

采用阴离子色谱-抑制电导检测器测定虾仁等水产品中的亚硫酸盐（二氧化硫）的残留量,样品在碱性条件下经甲醛提取,超滤杯纯化,以KOH溶液为淋洗系统,抑制电流125mA时检测。线性范围为0．1—40mg／kg,相关系数为0．9986,平均回收率范围为80％～98％。该方法检出限（SIN=3）为0．1mg／kg,定量限为4．5mg／kg。本方法快捷、简单、准确,适用于出121水产品中亚硫酸盐的测定。     

离子色谱法测定农村饮水中痕量溴酸盐的研究

建立了一种简便的用离子色谱测定水中痕量溴酸盐的方法。通过银电极电解方法,除去水样中干扰溴酸根测定的氯离子,并应用微波浓缩水样后,在一定的色谱条件下测定水样中溴酸根离子的含量,检出限可达5μg.L-1。     

离子色谱法测定剑麻叶中氯离子的研究

提出离子色谱法测定剑麻叶中氯离子的方法:剑麻叶样品在超声波振荡条件下用水进行浸提,经炭黑小柱对提取的水溶液进行净化之后,采用离子色谱测定。经大批样品的实验测定结果证明,本方法平均回收率在95%～106%,RSD小于0.45%。该方法具有简单、重复性好、灵敏度高、准确性好等较多优点,适用于剑麻样品分析。     

卷须链霉菌木聚糖酶B的纯化

为了进一步研究链霉菌木聚糖酶的酶学性质，探讨了卷须链霉菌一种木聚糖酶的纯化方法。粗酶液经硫酸铵饱和度为20％～50％的分级沉淀和Q-sephrose FF离子交换柱层析2步纯化，得到一种电泳纯的木聚糖酶。定名为XynB；酶蛋白纯化倍数达到10．0倍，酶活力回收率达到24．0％。SDS-PAGE结果表明，该木聚糖酶的分子质量为22．0ku，属于低分子质量的木聚糖酶。     

水稻白叶枯病菌hrf2基因表达的His-Harpin_(Xooc)蛋白的纯化及分析

利用已构建的工程菌表达His-HarpinXooc蛋白,分析His-HarpinXooc蛋白的纯化条件、产量、等电点和生物活性等。结果表明:1)在使用HisTrap HP Kit进行纯化时,咪唑浓度对于蛋白纯度影响最大,其中150mM咪唑最适合于洗脱His-HarpinXooc蛋白,缓冲液、洗脱次数等对纯化的影响不大;2)每升菌液可获得高纯度的HisHarpinXooc蛋白为20mg,其等电点约为4.7;3)纯化所得His-HarpinXooc蛋白与不含His标签的HarpinXooc生物活性一致,具有Harpin蛋白诱导烟草产生过敏反应的典型特征。此为His-HarpinXooc蛋白的应用奠定基础。     

离子交换技术在多糖分离纯化中的应用

近年来多糖在药物化学和药理学方面引起了国内外许多学者极大的兴趣。介绍了多糖在医疗保健上的应用现状,并就IET在多糖分离纯化中的应用进行了综述。