微卫星标记预测半番鸭生长性状的杂种优势

为探究微卫星标记与肉鸭生长性状杂种优势的相关关系,利用8个微卫星标记对M18母本、大型母本、中型母本、小型母本和番鸭进行遗传多态性检测。结果表明,8个微卫星标记座位平均有效等位基因数为2.888 1个,平均多态信息含量为0.633 1,平均基因杂合度为0.518 1;番鸭与M18母本、大型母本、中型母本、小型母本的遗传距离为0.445 2、0.362 3、0.367 1和0.322 4。根据遗传距离,采用对数曲线模型对白羽半番鸭体重杂种优势进行预测,T检验结果显示,预测结果与实测结果无显著性差异,表明本研究建立的根据微卫星标记预测白羽半番鸭部分生长阶段体重杂种优势是可行的。     

半番鸭和北京鸭MC1R基因的克隆与序列分析

羽色是半番鸭一个重要的经济性状.黑素皮质素受体1(melanocortin receptor 1,MClR)基因是控制动物黑色素合成的重要基因.根据鸡、鹌鹑、雪雁、孔雀等MC1R基因同源序列的保守区设计1对引物,以半番鸭、北京鸭总DNA为模板,PCR扩增,克隆测序.结果,获得了2个长度为900bp的基因片段,并提交GenBank,登录号分别为EU877265和EU877264.经比对,发现北京鸭与半番鸭核苷酸序列存在8个变异位点,其中位于184bp(T/A)、229bp(G/A)、364bp(A/G)、385bp(G/A)处的变异导致了氨基酸序列分别在第62位(c/s)、77位(E/K)、122位(T/A)和129位(v/i)发生突变.为进一步研究半番鸭羽色MC1R基因单核苷酸多态性(SNP)奠定了基础;通过BLAST进行相似性搜索,结果表明,鸭与黑雁MC1R基因的核苷酸序列同源性最高为98.4%,与其他家禽的同源性也保持在92.8%～98.2%之间.可见禽类的MC1R基因编码区序列具有高度的保守性;系统进化分析表明,半番鸭、北京鸭与雪雁、黑雁、皇雁亲缘关系相近,从分子角度验证了它们在动物学分类上的地位.     

番鸭胸部肌肉成分分析

对商品肉用番鸭和北京鸭的胸部肌肉成分进行了对比测定。结果表明 ,北京鸭带皮胸肌的脂肪含量为 2 73.9g/ kg,番鸭为 10 1.8g/ kg;去皮胸肌中北京鸭的脂肪含量为 6 2 .6 g/ kg,番鸭为 2 4 .2 g/ kg;去皮胸肌的蛋白质组成 ,在所测定的 9种必需氨基酸中 ,番鸭有 7种必需氨基酸的含量高于北京鸭 ,1种基本相同 ,只有苯丙氨酸的含量较低     

A/J小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及相关差异基因表达分析

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST)。利用GenBank的BLAST软件分析比较核酸和蛋白质同源性,发现共有36个基因与这些EST具有高度的同源性,它们分别参与细胞成分、免疫、信号转导、凋亡、转录等重要功能。这些差异表达基因主要有ATP/GTP结合蛋白1(Agtpbp1)、天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸盒多肽5、核蛋白p68、ATP-依赖RNA解旋酶、真核生物转录因子2亚基(Eif2s2)、Na+/K+-ATP酶转运β3多肽、溶菌酶1、溶菌酶2等基因。结论:这些差异表达基因在猪链球菌2型感染过程中可能发挥重要功能。     

差异表达基因克隆技术的新进展

综述差异表达基因克隆技术的新进展，简要介绍抑制性消减杂交法、消减杂交法、ｍＲＮＡ差异显示法、代表性差式分析法。     

抑制性消减杂交技术研究Cd~(2+)胁迫下星星草基因表达

通过对Cd2+胁迫下星星草抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)cDNA文库的分析,从正向和反向消减文库中筛选出33个特异表达的阳性克隆,26个镉胁迫诱导表达,7个为镉胁迫抑制表达。序列分析表明,有29个与数据库中有同源性,其中功能已知的25个,未知功能有4个,剩余4个为无同源序列的新基因。已知功能序列中,19个为胁迫后诱导表达,6个为胁迫后抑制表达,其中谷胱甘肽还原酶(GSR)基因、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)基因、细胞膜CP5蛋白基因和ABC家族蛋白基因等与星星草抗镉离子胁迫密切相关。     

绒山羊胚胎期和兴盛期皮肤毛囊差异表达基因研究

应用抑制性消减杂交技术成功构建了内蒙古绒山羊胚胎期和兴盛期皮肤毛囊的消减cDNA文库.从两个文库中分别随机挑取50个克隆测序分析,测序结果经Genbank同源性比对.表明在胚胎期消减cDNA文库中得到15个特异表达基因片段,包含1个未知新序列;在兴盛期消减cDNA文库中得到19个特异表达基因片段.包含2个未知新序列.     

耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建

为克隆和研究淋球菌耐药相关基因，分别从耐药性淋球菌菌株RSM292C4和WHO标准参考淋球菌株WHO-A细胞中提取DNA，用RsaⅠ酶切成400-600bp的片段。将酶切耐药菌株基因DNA片段分别与不同的接头连接，再与标准参考菌株DNA进行消减杂交及抑制性PCR检测，将所得PCR产物与克隆载体连接，构建差异DNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，获得2500个克隆。随机挑取96个制备质粒进行PCR检测，均扩增出100-600bp大小的片段。耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆耐药淋球菌特异的未知新基因奠定了基础。     

杂交粳稻亲本遗传差异及其与杂种优势的关系

以宁夏自育的3个粳型不育系、18个恢复系及其配制的54个杂交组合为材料，根据8个主要农艺性和经济性状进行成分和聚类分析，以马氏距离为指标，研究了杂交稻亲本间遗传差异状况及其与杂种优势的关系，结果表明，在210个遗传距离中，有37％以上大于10％，18个恢复系间的平均遗传距离为9．0273，3个保持系间的遗传距离为32．3185，保持系与恢复系间的遗传距离为20．6937，说明宁夏现有的杂交稻亲本间有较大的遗传差异，对亲本间遗传距离与杂种优势的相关分析表明，亲本间遗传差异与杂种优势关系不密切。     

K型杂交小麦灌浆特性的杂种优势及相关分析

１９９４～１９９６年用５个Ｋ型小麦不育系与７个恢复系进行了完全双列杂交,研究杂交小麦灌浆特性的杂种优势及最终粒重与各灌浆参数间的关系。结果表明,第１灌浆阶段,杂交种普遍表现出持续期的下优势,灌浆速率的负优势,干物质积累量不同组合则优势表现不同;第２阶段,持续期大都表现为负优势,速率和干物质积累量杂种间差异较大;优势变异最广泛的是第３阶段,无论是持续期、速率,还是干物质积累量都如此。杂交种最终粒重     

番鸭呼肠孤病毒B3株感染对雏番鸭细胞免疫功能的影响

番鸭感染番鸭呼肠孤病毒后,在感染早期(15 d内),外周血淋巴细胞转化率比对照显著下降(P<0.01),外周血T淋巴细胞ANAE阳性率比对照显著下降(P<0.01),IL-2含量也比对照组显著下降(P<0.01);但在感染后期(特别是感染后20 d)各指标均有所回升,但仍显著低于对照.由此可见,番鸭呼肠孤病毒感染早期机体细胞免疫功能受到严重影响,感染后期功能逐渐恢复.     

番鸭cDNA-AFLP体系的建立

以番鸭脑垂体为材料,用Trizol法提取总RNA,用Superscipt Ⅱ-RT合成第一链cDNA,RNase H和DNA Polymerase合成第二链cDNA,最后用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ分步酶切cDNA各2h,经T4连接酶合成双链cDNA,预扩增反应后产物稀释40倍进行选择性扩增反应.经1％琼脂糖电泳及6％变...     

番鸭泄殖腔上皮类型研究

运用组织学技术对番鸭泄殖腔上皮的类型进行了研究。结果表明,番鸭泄殖腔上皮是复层扁平上皮,上皮间无杯状细胞,粘模表面无绒毛结构。直肠黏膜上皮在直肠末端突然转变为泄殖腔的复层扁平上皮,两者之间界线明显。     

番鸭肠道相关淋巴组织的分布和组织学结构

采用组织学方法研究了番鸭肠道相关淋巴组织(GALT)的分布和组织学结构.结果表明,GALT分布在小肠、卵黄囊憩室、盲肠和直肠末端.小肠可见4处非常明显的GALT,呈环带状,3处位于空肠,一处位于回肠;盲肠近端可见大量GALT分布,盲肠远端和直肠末端可见散在GALT分布.在组织学上,番鸭的GALT与鸡和哺乳动物的相似.     

综合指数法在番鸭选育中的应用

应用综合指数选择法对白番鸭父系、母系进行继代选育.结果表明:第3世代父系10周龄公母鸭体重比母系公母鸭分别重280.18g(P<0.05)和242.91g(P<0.05).父系经2世代选择,公母鸭26周龄体重比0世代分别增加330和80g;而母系经2世代选择,公母鸭26周龄体重增加不显著(P>0.05).父系经2世代选择,其母鸭56周龄蛋重比0世代重3.41g,每只母鸭平均产蛋量增加3.86枚.母系经2世代选择,其56周龄产蛋量比0世代增加8枚,蛋重增加0.45g.可见应用综合指数选择法连续2世代选育能明显提高白番鸭的生产性能.     

抗番鸭呼肠孤病毒(MDRV)单克隆抗体的制备及应用

【目的】制备抗番鸭呼肠孤病毒（MDRV）的单克隆抗体,建立番鸭呼肠孤病毒病的间接免疫荧光（IFA）快速诊断方法。【方法】制备MDRV抗原,用之免疫Babl/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用IFA和ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,检测其生物学特性,应用制备的单克隆抗体建立MDRV IFA快速诊断方法。【结果】筛选到237-11,45-12和3-H3 3株特异性好并能稳定分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中45-12株单抗为IgM亚型,237-11和3-H3株单抗为IgG3亚型。45-12和3-H3 2株单抗具有ELISA特性,效价分别为10-4和10-5;237-11株单抗具有IFA特性,效价达10³。特异性测定结果显示,3株单抗仅与MDRV反应,而与正常细胞培养物（MDEF）、番鸭细小病毒（MPV）、鹅细小病毒(GPV)、禽呼肠孤病毒(ARV) 、鸭副黏病毒（PMV）和鸭肝炎病毒（DHV）均无交叉反应。应用抗MDRV单抗建立的IFA方法与病毒分离法（VI）的符合率为91%。【结论】筛选到2株具有ELISA特性、1株具有IFA特性且能分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了MDRV IFA快速诊断方法,为番鸭呼肠孤病毒病的快速诊断奠定了基础。     

番鸭催乳素基因的克隆与序列分析

为探明番鸭的遗传分化,以番鸭脑垂体的总RNA为模板,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增了含有催乳素(PRL)基因的DNA片段,将其克隆到pMD18-T载体上并进行了序列分析.结果表明,番鸭PRL基因由765 bp组成,编码229个氨基酸;与已报道的北京鸭、马岗鹅、皖西白鹅、莱茵鹅、家鸡、火鸡、鹌鹑等禽类PRL基因相比,PRL基因的核苷酸和氨基酸序列同源性为91.0%-99.0%和98.3%-99.1%.说明PRL基因在进化过程中相当保守.番鸭PRL基因氨基酸序列与北京鸭比较两者并没有太大差别,仅在第9(K/E)、176(V/I)、194位(K/I)各有一个突变,可以推测这两者之间就巢性的差异可能与PRL的结构关系不大;但与家鸡的氨基酸序列差异则较大.     

番鸭法氏囊相关淋巴组织的分布及组织学研究

研究了番鸭法氏囊柄部淋巴组织的分布及组织学结构。番鸭法氏囊柄部分布有多量的淋巴组织,以法氏囊柄的背侧淋巴组织分布面积最大、数量最多。其组织学结构包括淋巴相关上皮、上皮内淋巴细胞、圆顶区、淋巴滤泡以及高内皮静脉,其结构与其他粘膜相关淋巴组织相似。研究结果表明,分布于法氏囊柄部的淋巴组织是一种粘膜相关淋巴组织。     

番鸭蛋壳通透性及其对出雏效果的影响

将同批入孵番鸭种蛋分为6组:新鲜种蛋,一照时的健胚蛋、死胚蛋,三照死胚蛋,正常出雏蛋,毛蛋(啄壳时死胚蛋),分别测定各组种蛋大端、中部和小端的气孔数、厚度及蛋壳结构,并研究它们对出雏的影响.结果表明:一照、三照死胚蛋和毛蛋的气孔数(52.28、55.32和71.60个·cm-2)极显著少于一照健胚蛋(83.60个·cm-2)和正常出雏蛋(86.28个·cm-2);而在蛋壳厚度上,三照死胚蛋(0.401mm)和毛蛋(0.395mm)均极显著高于正常出雏蛋(0.363mm).采用扫描电镜观测新鲜种蛋、毛蛋和正常出雏蛋蛋壳结构.结果显示,新鲜种蛋壳由壳膜、乳锥层、柱状层、垂直晶体层和油质层构成,正常出雏蛋及毛蛋的乳锥层因胚胎发育对矿物质的吸收利用造成部分缺失;死胚蛋蛋壳厚度(0.395-0.401mm)极显著高于正常出雏蛋(0.363mm).可见蛋壳过厚、气孔较少是影响番鸭蛋孵化后期气体交换,导致死胚的重要原因.     

番鸭蛋壳性状对孵化效果的影响

对番鸭白壳蛋、青壳蛋、砂壳蛋的失重率,蛋壳的矿物成分、厚度和气孔数进行测定,并用扫描电镜观察蛋壳结构,研究它们对孵化效果的影响.结果表明:番鸭白壳蛋的孵化率(89.1%)显著高于青壳蛋(67.4%)(P0.05),极显著高于砂壳蛋(48.7%)(P0.01).青壳蛋孵化率低于白壳蛋的原因不在于壳厚(P0.05),而在于青壳蛋的蛋壳气孔数明显低于白壳蛋(P0.05).砂壳蛋蛋壳结构异常与蛋壳的磷含量显著高于白壳蛋有关.对番鸭蛋壳超微结构的扫描电镜观察发现:番鸭白壳蛋、青壳蛋、砂壳蛋不仅外观有差别,而且在超微结构上也有差别.