"自杀性"DNA疫苗研究进展

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点.但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制."自杀性"DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗.由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点.同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效.文章针对"自杀性"DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍.     

自杀性DNA疫苗

基因疫苗与传统疫苗相比,具有许多优势:比较稳定,便于保存和运输;将抗原以天然的形式提供给免疫系统,可同时引起全面的体液免疫和细胞免疫应答;对不同亚型的病原体有交叉抵抗作用,没有减毒活疫苗毒力回复的危险性等。基因疫苗一出现,就受到普遍关注,迅速成为疫苗研究领域的一大     

双基因共表达的"自杀性"DNA疫苗载体的改造及其体外表达特性

PCR扩增西门利克森林病毒（SFV）亚基因组启动子26S序列及人工合成Linker，将其插入基于SFV复制子的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA1的多克隆位点，获得舍2个26S启动子并能同时驱动双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA2。为了验证pSCA2的表达能力，PCR扩增绿色荧光蛋白基因EGFP和红色荧光蛋白基因DsRed2，分别插入pSCA2的2个26s启动子下游，获得EGFP和DsRed2双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗pSCA2-EGFP／RFP。将pSCA2-EGFP／RFP转染BHK-21细胞，转染后24h，可同时观察到被转染细胞发绿色荧光和红色荧光，证实EGFP和DsRed2均获得表达。     

猪瘟病毒E2基因自杀性DNA疫苗的构建及动物免疫试验

从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2.用BamH Ⅰ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA1-E2.对目的基因E2的大小、插入位置、方向和读码框经PCR、酶切和序列测定进行鉴定.用纯化的阳性质粒pSCA1-E2转染PK-15细胞,转染后48 h荧光抗体法检测E2蛋白的表达;纯化的pSCA1-E2质粒分别免疫小鼠(10 μg/只)和试验猪(600μg/头),二免后分别检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数和猪血清抗猪瘟特异性抗体水平.结果表明,构建的重组质粒中E2基因的大小、插入位置、方向和读码框均正确,获得了重组表达质粒pSCA1-E2;转染后48 h可检测到转染的PK-15细胞中E2蛋白的表达.免疫小鼠产生较高水平的淋巴细胞刺激指数,免疫猪可检测到抗CSFV特异性血清抗体;表明构建的pSCA1-E2重组质粒能激发实验动物的免疫反应.     

鹅源新城疫病毒HN基因“自杀性”DNA疫苗的构建及其免疫效果的研究

为了探讨鹅源新城疫病毒"自杀性"DNA疫苗的免疫效果,将鹅源新城疫病毒HN基因片段克隆到自杀性DNA疫苗载体pSCA1中,构建了表达HN基因的自杀性DNA疫苗质粒pS-HN。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了HN基因在该细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pc-HN)分别免疫鹅,结果表明,在诱导体液、细胞免疫和攻毒保护方面,pS-HN均优于pc-HN,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。     

猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究

利用RT—PCR技术，用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因，克隆于DNA复制子载体pSCAl中，获得重组质粒pSCA／1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞，RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示，猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明，自杀性DNA疫苗pSCA／1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。     

塞姆利基森林病毒复制子DNA疫苗研究进展

甲病毒(Alphavirus)是披膜病毒科(Togavirus family)的成员,是单股、正链的RNA病毒,包括塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SIN)和委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equineencephalitis virus,VEE)等30个成员.20世纪80年代末,随着这些病毒的cDNA感染性克隆的建立,相继开展了以甲病毒复制子为基础载体的研究,利用复制子特有的RNA复制酶提高翻译模板mRNA的量来实现高水平表达的目的,以改造出相应的甲病毒载体,已被广泛地应用于基因治疗和分子生物学的研究,并在疫苗领域中受到关注.     

兽用DNA疫苗的研究进展及应用

本文主要介绍了DNA疫苗的特点、组成、免疫途径、免疫反应的机制、DNA疫苗的捕捉、细胞活素／共同刺激分子和兽用DNA疫苗的研究进展以及应用。     

DNA疫苗研究进展

核酸疫苗作为第3代新型疫苗,其制作简单、经济安全、易于贮存运输等优点已日益引起广泛重视。复制型或称“自杀性”DNA 疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗,具备高度的安全稳定性和对外源基因的高效表达。作者简述了常规DNA疫苗的发展过程和复制型DNA疫苗的研究进展。     

DNA疫苗研究进展

利用生物技术手段开发新型基因工程疫苗是目前疫苗研究的热点之一。本文介绍了DNA疫苗的简史、优缺点、安全性、优化方法等,旨在为广大科研工作者提供参考。     

DNA疫苗的研究进展

DNA疫苗是在分子生物学技术基础上发展起来的第3代新型疫苗,已体现出其竞争优势和应用潜能。同传统的疫苗相比,DNA疫苗具有免疫效果好、生产成本低、临床应用方便等优点,但同样存在安全性的担忧。文章回顾了DNA疫苗的发展简史,阐述了DNA疫苗的免疫机理,分析了DNA疫苗研究现状,并对DNA疫苗的安全性提出了自己的观点与看法,旨在为DNA疫苗研究提供参考。     

传染性喉气管炎病毒基因疫苗免疫效应

以传染性喉气管炎病毒（ILTV）WG株gB和gD基因为目的基因构建真核表达质粒pCAGG-gB和pCAGG-gD。将75只SPF鸡随机分为7组，经肌肉注射接种pCAGG-gB、pCAGG-gD、pCAGG-gB＋pCAGG-gD、pCAGG-gB＋rFPV-ILTVgB以及rFPV-ILTVgB，并设有生理盐水和空载体（pCAGG）对照组。免疫2周后以500EID50 ILTV WG株强毒进行攻击，以评价ILTV基因疫苗以及基因疫苗和重组病毒联合应用对SPF鸡的免疫保护作用。血清抗体的检测表明：在免疫后的2周，各免疫组的鸡只均产生了特异性的ILTV抗体，外周血CD4^＋T、CD8^＋T、TCRTγδ^＋T细胞明显高于对照组，并且pCAGG-gB和pCAGG-gD分别诱导了高水平的IL-18和IFN-γ的表达。ILTV强毒攻击后，非免疫鸡全部发病，并在第2天出现死亡。而各质粒免疫组均获得了一定的保护（保护率44％），两种质粒联合免疫（pCAGG-gB和pCAGG-gD）和重组病毒（rFPV-ILTVgB）与质粒（pCAGG-gB）联合免疫的免疫组的保护率（56％）高于单独免疫组，产生高水平细胞因子表达的免疫组的保护率高于对照组。重组鸡痘病毒免疫组的保护率（69％）最高。这些结果表明ILTV的DNA疫苗能够诱导鸡体产生特异性免疫应答，并能对传染性喉气管炎强毒的攻击提供一定的免疫保护。     

猪乙型脑炎疫苗研究进展

猪乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）是由乙型脑炎病毒（JEV）引起的一种经蚊虫传播的人畜共患病，且是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。猪是JEV的重要储存宿主和扩增宿主，同时也是乙型脑炎的主要传染源，可引起母猪繁殖障碍和公猪睾丸炎。人是JEV的终末宿主，特别是儿童，感染发病后，死亡率可达25%。目前，仍无有效药物治疗乙型脑炎感染，而其流行区域的扩大及其优势基因型的改变为JEV防控策略带来了新的挑战。近年来，随着基因工程和蛋白质工程的发展，以及对病毒分子结构和功能的深入研究，一些新技术新手段被应用到JEV疫苗研发中，基因工程亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、嵌合病毒减毒活疫苗、多表位疫苗、DNA疫苗等应运而生。在疫苗制备过程中，培养工艺的优化、病毒抗原的纯化、新型佐剂和耐热保护剂的应用等生产工艺的提升策略，为保障JEV疫苗的质量提供了新方向。文章简述了猪JEV疫苗的使用现状及研发进展，旨在为研制更安全、有效的猪JEV疫苗提供参考依据。     

DNA疫苗的相关研究进展

DNA疫苗又称为核酸疫苗，是20世纪90年代初发展起来的一种全新疫苗，具有能够激发机体体液和细胞免疫反应，核酸疫苗因高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点，被作为一种新型的疫苗而得到广泛的研究和应用，是近年来研究的一个热点。抗原编码基因的选择、质粒的构建、各种佐剂的应用以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变DNA疫苗的免疫效果与反应类型。DNA疫苗不仅有预防疾病的作用，同时还具有治疗疾病的作用。在不久的将来，DNA疫苗有望成为人类防治疾病的重要手段。     

DNA疫苗的相关研究进展

DNA疫苗又称为核酸疫苗,是20世纪90年代初发展起来的一种全新疫苗,具有能够激发机体体液和细胞免疫反应,核酸疫苗因高效、持久、广谱、简便、廉价、无致病性等特点,被作为一种新型的疫苗而得到广泛的研究和应用,是近年来研究的一个热点.抗原编码基因的选择、质粒的构建、各种佐剂的应用以及疫苗接种方法和途径等因素可以提高和改变DNA疫苗的免疫效果与反应类型.DNA疫苗不仅有预防疾病的作用,同时还具有治疗疾病的作用.在不久的将来,DNA疫苗有望成为人类防治疾病的重要手段.     

DNA疫苗在鱼类中的应用研究进展

DNA疫苗是继减毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗和重组多肽疫苗之后的又一新型疫苗,比其它疫苗高效、安全且易于大量生产。本文主要对鱼用DNA疫苗的构建、作用机制、使用方法、使用效果及安全问题等方面研究近况作一综述,以促进我国对鱼用DNA疫苗进一步的研究和应用,从而加速我国水产养殖业的发展,并为深入研究和掌握鱼类的免疫防御机制提供一些依据。     

DNA疫苗在动物医学中的应用研究进展

DNA疫苗是继减毒疫苗，灭活疫苗，亚单位疫苗和重组多肽疫苗之后的又一新型疫苗，比其它疫苗高效。安全且易于大量生产。本文对DNA疫苗在牛，猪和鸡一些病毒病上的使用效果及其安全问题等方面的研究近况作一综述。