番茄环斑病毒的提纯

通过对番茄环斑病毒繁殖寄主、抽提缓冲液、澄清剂、浓缩方法和悬浮缓冲液等比较试验,初步筛选出得率高,并能保持病毒完整的提纯程序,即:用番杏为繁殖寄主,用0.05M 磷酸钾缓冲液(pH 7.5,内含0.02M 巯基乙醇)抽提,加1%Tritonx-100澄清,经8%聚乙二醇沉淀,接着差速离心(28000转/分,4小时)浓缩病毒,最后用0.01 MPB(pH 7.5内含0.002MEDTA)悬浮,低速离心,上清液为部分提纯的病毒制剂。此提纯制剂具有侵染性;病毒粒体完整,为等轴对称,直径约28μm;且具有典型的核蛋白吸收曲线。     

应用A-蛋白诱捕修饰和羊抗兔血清诱捕双修饰法研究马铃薯X病毒

A-蛋白和羊抗兔血清应用于免疫电镜,检测马铃薯X病毒(PVX)粗汁液,灵敏度比诱捕修饰法高;而且加羊抗兔血清后,病毒粒体比诱捕修饰法明显加粗,在电镜放大2500倍时,就能清晰地观察到。用诱捕双修饰法检测PVX,证实在寄主植物的叶、茎和根中均存在,以叶内含量最高。接种在普通烟上第三天,接种叶就能检测到PVX,接种15天后,寄主体内病毒能达到较高浓度,而且高浓度一直可保持2个月以上;PVX在不同寄主中的含量不同,以普通烟中病毒浓度最高,心叶烟、番茄和黄花烟中次之;昆诺阿藜、千日红和大椒中含毒量极抵。用诱捕双修饰法检测马铃薯薯块休眠芽中的病毒获得成功。     

大麦黄花叶病毒(BaYMV)的提纯

 本文提出了一个改进了的大麦黄花叶病毒提纯方法。病大麦叶片在高浓度(0.5M)磷酸钾缓冲液pH7.0(内含0.1% ME,0.01M EDTA)中匀浆,经1/4体积四氯化碳澄清后,病汁液用6% PEG,3% NaCl和1% TritonX-100混合物沉淀,高浓度(0.5M)同种缓冲液(含0.5M尿素,0.1% ME和0.01M EDTA)悬浮,接着进行20%蔗糖垫(含0.3% Triton X-100)超迷离心去除寄主细胞成分,10-40%蔗糖密度梯度离心进一步纯化。所获得的BaYMv提纯制剂A260/A280,A260/A240比值分别为1.20和1.04,纯病毒产量约为5.5-8.0mg/kg病叶。提纯病毒制剂在电镜下看不到有寄主杂质存在。     

松毛虫赤眼蜂携带质型多角体病毒防治马尾松毛虫

在湖南两个林场试验的结果显示,用携带松毛虫质型多角体病毒的赤眼蜂防治松毛虫比未携带病毒寄生蜂的防治效果要高。两者的防治效果分别为９４．１％～９７．３％和７４．６％～８１．２％。赤眼蜂对寄主卵的发育程度有明显的选择性,寄主卵发育超过３０小时的很少受赤眼蜂寄生。用携带病毒赤眼蜂传播病毒可以增加松毛虫的死亡率。用赤眼蜂传播病毒的方法比在林间喷洒病毒可节省大量的病毒剂。     

用超声波法使烟草花叶病毒侵染烟草细胞的研究

 本文首次采用超声波法把烟草花叶病毒(TMV)粒子导入带壁烟草细胞,建立病毒-细胞高效侵染体系。将烟草细胞置于含TMV粒子的缓冲液中,用声强为0.5 W/cm²的脉冲超声波处理5 min,培养48 h后使用荧光免疫法检测烟草细胞转染率为59.7%。经酶联免疫吸附测定(ELISA)检测,TMV粒子在烟草细胞体内增殖48 h后达到高峰。电镜观察细胞体内有大量的TMV粒子。用枯斑寄主法测定表明TMV子代有较高的致病力。     

对“葡萄保加利亚潜隐病毒”毒株的检验技术研究

为了研究葡萄病毒的检验技术,进行了匈引“葡萄保加利亚潜隐病毒”毒株的寄主范围、提纯和 dsRNA 的研究。人工接种28种或品种的植物,可以局部侵染14种或品种的植物,其中番杏是新报道的寄主。病毒繁殖在昆诺阿藜上,用磷酸缓冲液抽提,PEG 6000沉淀,超离心得粗提纯液为免疫抗原,提纯得率为45mg/1000g病叶,经琼脂糖凝胶电泳,检测昆诺阿藜病叶中有2条 dsRNA 的带谱。     

根结线虫对寄主核酸含量影响的研究

根结线虫(Meloidogyne)侵染寄主对寄主体内核酸含量有影响,通过先提取核酸再用紫外光吸收测定核酸的含量结果表明,在植株体内根结中的核酸含量(包含RNA、DNA)比同株健部根及健株健根均高,用不同寄主和不同种线虫作材料,结果也证明根结内的核酸含量较健株及同株健部高。病株除根结外,不同部位核酸含量却反过来比健株的对应部位     

根结线虫对寄主核酸含量影响的研究

 根结线虫(Meloidogyne)侵染寄主对寄主体内核酸含量有影响,通过先提取核酸再用紫外光吸收测定核酸的含量结果表明,在植株体内根结中的核酸含量(包含RNA、DNA)比同株健部根及健株健根均高,用不同寄主和不同种线虫作材料,结果也证明根结内的核酸含量较健株及同株健部高。     

侵染花椰菜的芜菁花叶病毒及RT-PCR扩增外壳蛋白基因研究

 从杭州市郊区及本校附近菜园地表现严重花叶症状的花椰菜上分离到一种线状病毒,接种6科31种鉴别寄主,能侵染5科22种植物。病组织超薄切片可见风轮状内含体和片层聚集状内含体。感病的芥菜叶片,用0.5mol/L磷酸钾缓冲液(pH7.5)匀浆后汁液加4% PEG-8000沉淀3h,5%~40%甘油梯度离心纯化病毒,可获得较高的产量。提纯的病毒均为一弯曲的线状颗粒,长度740nm左右。病毒提纯液于264nm处有一吸收峰,为典型的核蛋白紫外吸收。TuMV-H分离株抗血清包被的铜网能大量吸附病毒颗粒。用特异的PCR引物扩增其外壳蛋白基因,可得-0.9Kb的片段。     

深度测序技术分析番茄斑萎病毒病害寄主及介体中病毒种类

 正番茄斑萎病毒属病毒(orthotospoviruses)是严重危害云南蔬菜等重要农业经济作物的病毒病原之一。采用血清学检测、小RNA深度测序以及RT-PCR验证相结合的方法,从云南省昆明市晋宁区的主要作物寄主(番茄、辣椒、油麦菜)、重要中间寄主(鬼针草)和传毒介体(蓟马)中鉴定到TSWV、TZSV、PCSV和INSV 4种病毒,其中TSWV为该地区的主要优势病毒,而PCSV则是首次报道侵染鬼针草。通过对云南番茄斑萎病毒病害重病区作物寄主、中间寄主及蓟马三者进行病毒种类分析研究,明确TSWV为引起云南省昆明市晋宁区作物的主要病毒,TZSV、PCSV和INSV零星发生于不同寄主中。     

甜菜夜蛾不同品系对甜菜夜蛾核多角体病毒的敏感性

利用寄主昆虫增殖病毒时，影响病毒产量的因素很多，其中寄主昆虫的敏感性是重要因素之一。尽管国内外在不同寄主对同种病毒敏感性方面进行了较多研究，但在相同寄主不同品系对同种病毒敏感性上的研究，尚未见报道。鉴于此，本文开展了甜菜夜蛾不同品系对甜菜夜蛾核多角体病毒（Spodoptera exigua Nucleopolyhedmvirus，SeNPV）敏感性的研究，以期筛选到高敏感性寄主昆虫，从而实现在甜菜夜蛾幼虫末龄高效增殖甜菜夜蛾核多角体病毒，达到有效提高甜菜夜蛾病毒杀虫剂生产效率的目的。现报道如下。     

斑点法检测柑桔黄龙病、香蕉束顶病

斑点法检测柑桔黄龙病、香蕉束顶病用改进的斑点法检测柑桔黄龙病类细菌、香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ），均获满意结果。检测健康柑桔、香蕉粗汁液获阴性结果，在硝基纤维转移膜上不形成有色物质；阳性反应则形成深浅不等的褐色斑点。在缓冲液ＴＢＳ中加入２％ＴｒｉｔｏｎＸ...     

寄主呼吸代谢过程与烟草花叶病毒增殖的关系

根据迄今为止的资料,植物病毒不含有任何酶系统,它是利用寄主细胞内的原料、能量,甚至酶系统来繁殖的,这就会引起寄主代谢控制的失调,造成病态。因此,寄主的新陈代谢和病毒的侵染增殖之间存在着极其密切的关系。了解这一关系不但为阐明病毒增殖的机制,及其对寄主的致病作用所必需,同时还可能为毒病的治疗研究提供依据。目前所以缺乏治疗毒病的有效药剂,其重要原因之一就是由于病毒和寄主间的关系太密切了。对病毒有效的药物,往往对寄主产生很大的药害,因此,寻求二者在代谢上的差异     

Ds-RNA检测技术在植物病毒及其有关病原研究中的应用前景

在植物病毒及其有关病原的研究中,检测方法的建立是以病原及其寄主的性质和相互作用为基础的。这包括症状,寄主范围,病原在寄主体内性质,介体,病原传播途径和传播特点,病原形态、病原体及外壳蛋白和基因组核酸的理化性质等。近年来,病毒及病毒类病原亚基因组RNA在病毒研究中的作用,也日益受到研究者的重视,如卫星病毒、卫星RNA     

大肠杆菌K88,K99及987P菌毛抗原生产条件的研究

用自动发酵罐培养Ｋ８８、Ｋ９９及９８７Ｐ菌毛抗原，菌液经不同提取剂提取，用琼脂双扩散法和抗甘露糖血球凝集反应来检测抗原效价，根据试验结果，确定了大肠杆菌Ｋ８８，Ｋ９９及９８７Ｐ菌毛抗原连续培养的条件，建立了菌毛抗原的提取和检测方法，从而选定了最佳收获菌液的时间和提取缓冲液，为工业化生产疫苗提供了一定快速简便的有效途径。     

蚜虫内共生菌基因组DNA提取方法的比较和优化

为探究蚜虫共生菌基因组DNA的提取方案,以桃蚜为试验材料,比较了目前较为常用的4种蚜虫基因组DNA提取方法,从DNA纯度、完整性、PCR扩增效率及稳定性等方面进行了比较和评价,并通过调整蛋白酶K用量和水浴温度及时间对STE法进行了优化。结果表明,4种方法提取的蚜虫共生菌基因组DNA均可用于共生菌的PCR扩增检测;CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较高,条带较完整,稳定性相对较高,不易降解,而STE法和PCR缓冲液法操作简便,适于快速提取单头蚜虫共生菌的基因组DNA,但纯度相对较低;可根据试验条件和要求进行选择。STE法优化条件为:用30 μL STE缓冲液将蚜虫匀浆,加入1.5 μL 20 mg/mL蛋白酶K,于56 ℃水浴1.5 h;再加入0.1 μL 10 mg/L RNA酶,于37 ℃培养1 h,95 ℃下处理5 min,5 000 r/min离心3 min,将提取到的DNA于-20 ℃保存或直接用于PCR扩增。优化后的STE法可作为提取蚜虫共生菌基因组DNA经济而快捷有效的方法。     

五味子提取物抑菌效果研究

采用菌丝生长速率法测定了五味子(Shisandra chinensis(Turcz.)Baill)丙酮提取液的抑菌活性,并比较了索式提取法和微波萃取法的抑菌效果差异。研究结果表明,浸提法中随着五味子浓度的增加抑菌活性增强,微波提取法中功率400 W,料液比5:70,反应时间5 min时五味子丙酮提取液抑菌效果最好,抑菌率可达70%。     

真菌病毒的研究进展

真菌病毒是一类感染真菌和卵菌并在其中复制的病毒,普遍存在于各大类群的真菌和卵菌中。本文从真菌病毒的定义、分类、传播、检测技术、起源与进化、对寄主真菌(卵菌)的影响、与寄主真菌(卵菌)的分子互作及其在植物病害生物防治上的应用等方面对真菌病毒的研究概况进行了综述。旨在在全面了解真菌病毒研究进展的基础上,为真菌病毒的利用和将来深入研究提供参考。     

甜菜丛根病症状类型的研究

对甜菜丛根病4种类型的标样进行了病毒提纯,利用电子显微镜检查提纯的病毒形态,用光学显微镜检查病根中有无多粘菌(Polymyxa beta)和线虫,结合用鉴别寄主进行生物测定。结果认为坏死黄脉型,黄化型和黄色焦枯型由甜菜坏死黄脉病毒引起,病毒粒体杆状,直径18nm,有80,110,260和400nm 4种长度;黑色焦枯型病根中提纯出一种直径30nm的球状病毒,初步鉴定为番茄黑环病毒的一个株系。     

用酵母双杂交筛选与南瓜蚜传黄化病毒MP互作的寄主因子

植物病毒编码的移动蛋白(movement protein,MP)介导病毒在寄主体内的移动,研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染过程中的分子机制。将南瓜蚜传黄化病毒Cucurbit aphid-borne yellows virus(CABYV)MP基因定向克隆到含有DNA结合功能域(DNA-binding domain,BD)载体上,并构建与激活功能域(activation domain,AD)融合表达的西瓜茎叶cDNA文库,然后用MP为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明,诱饵质粒插入的MP基因可读框和氨基酸序列均正确,对酵母菌株AH109和Y187没有自主激活能力;文库滴度为2.94×106CFU/mL,且大多数插入片段在700bp以上,质量符合筛选要求;经过筛选和共转化回转验证,有48个候选阳性克隆与MP在酵母中互作。测序得到这些克隆的cDNA序列,BLAST分析结果表明,这些克隆共编码12种蛋白。