杜仲愈伤组织诱导与继代培养研究

[目的]对杜仲进行愈伤组织诱导及继代培养,建立愈伤组织的培养系统。[方法]以杜仲子叶、幼叶、下胚轴为外植体,接种于不同培养基中诱导和继代。[结果]不同外植体愈伤组织的诱导率高低顺序为：下胚轴〉子叶〉幼叶。子叶和幼叶在MS＋NAA 1.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳;胚轴在MS＋NAA 3.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳。[结论]杜仲的子叶、幼叶和胚轴可采用多条途径实现愈伤组织的诱导和继代增殖培养,为进一步筛选高产细胞系打下基础。     

紫苏愈伤组织诱导及继代培养条件优化

对紫苏愈伤组织诱导培养基、外植体、激素、光照条件以及基因型进行筛选,对愈伤组织继代培养中接种量和培养时间对增长量的影响进行探讨。结果表明,MS+6 BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L诱导紫苏下胚轴愈伤组织效果最好,而MS+6 BA 2.0 mg/L+2,4 D 1.0 mg/L诱导子叶愈伤组织效果最好,光照条件为12 h/d时有利于愈伤组织的诱导。供试10个不同基因型紫苏中,ZB 1愈伤诱导率最高。接种密度1.2 g/皿（直径10 cm 培养皿）,培养时间24 d紫苏愈伤组织继代培养增长量高,愈伤品质好。     

杜仲愈伤组织诱导的研究

采用杜仲优树的幼叶、嫩茎及种子无菌苗的下胚轴、子叶、真叶、根为外植体,以B5和MS为基本培养基,添加1.0mg/LNAA和0.3mg/LBA,进行了不同外植体种类、外植体大小、试验接种方式、外植体采样时间、光照条件、培养基pH值共6种因素对杜仲愈伤组织诱导的影响试验。结果表明,在杜仲愈伤组织诱导中,田间材料幼叶取样时间以3月中旬为好,幼茎的取材时间以4月中旬以前最佳;无菌苗以下胚轴、子叶、真叶诱导效果较好;诱导愈伤组织的培养基pH值以6.3较适宜;培养室的光照条件以12h光照、12h暗培养较有利于愈伤组织诱导;茎段的大小和接种方式以0.7cm长度横放方式诱导效果较好。     

籼稻YTB成熟胚愈伤组织继代培养条件试验

为确定籼稻YTB成熟胚愈伤组织继代培养的最佳条件,对籼稻愈伤组织进行不同继代培养条件优化组合试验,研究不同因素对籼稻愈伤组织继代培养的影响。结果表明:NB培养基是较适合籼稻愈伤组织继代生长的培养基;籼稻YTB成熟胚愈伤组织不适合二次继代;铁盐浓度对籼稻愈伤组织的继代培养有明显影响;水解酪蛋白、脯氨酸、谷氨酰胺及硫代硫酸钠等能改善籼稻愈伤组织的质量,降低褐化率;抗坏血酸(VC)对籼稻胚愈伤组织的继代生长及抗褐化无明显影响;形态学观察和细胞学观察的一致性证明了外源腐胺PUT(30 mg/L)在籼稻愈伤组织继代培养中可以使愈伤组织保持良好的胚性,从而提高后续遗传转化的转化率。     

杜仲愈伤组织诱导及增殖培养技术研究

杜仲是我国名贵的中药材和最有开发前景的胶源植物。通过筛选外植体、优化培养基,建立杜仲愈伤组织诱导和增殖的培养体系,利用统计学方法进行分析。结果显示:以子叶、幼叶、下胚轴为外植体均能够诱导出愈伤组织,但较佳的外植体为下胚轴,诱导率达到79.33%;以下胚轴为外植体的愈伤组织诱导基本培养基是B5,较优的激素配比为NAA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L;愈伤组织增殖培养的较优激素配比为6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L。建立了杜仲愈伤组织的培养方法,为通过杜仲细胞培养获得代谢产物提供了技术支持。     

四季桂愈伤组织诱导与继代培养

为提高四季桂的愈伤组织诱导率，以四季桂为材料，对影响四季桂愈伤组织形成和继代培养的几个主要因素进行了研究．结果表明：采用四季桂花梗作外植体，在MS BAl．5mg/L 2，4—D0．1mg/L培养基上，暗处理7d，愈伤组织质量高且诱导串可达85．71％．用2，4—D诱导四季桂愈伤组织效果较NAA显著．继代培养以0．1mg/L NAA为生长素时，褐变致显著低于2，4—D，当2ip质量浓度为1．5mg/L时褐变致最低，为15．0％．     

硅对杜仲愈伤组织诱导及增殖培养的影响

以杜仲幼茎为外植体,进行杜仲愈伤组织诱导、增殖试验.在已经筛选出的最适再分化培养基中,添加不同浓度的硅进行分化培养试验,以确定诱导、增殖培养基中的最佳硅浓度.结果表明:适度增加硅浓度,可明显提高杜仲愈伤组织的诱导和增殖,并能改善愈伤组织的生长状态,增加愈伤组织增殖生长量;硅的最佳添加浓度为80 mg/L.     

苍耳愈伤组织诱导及继代培养研究

以苍耳叶片、叶柄及茎段为外植体,在MS附加不同种类和浓度激素配比的培养基上,对苍耳愈伤组织进行诱导培养,并对生长迅速、性状好的愈伤组织进行了研究.结果表明:不同激素配比和不同培养方式对愈伤组织诱导率、生长量和性状有明显的影响.在光照培养下,当MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5~1 mg/L时愈伤组织诱导率高且生长好.     

甘蔗愈伤组织继代培养中的蔗糖效应

以甘蔗幼嫩叶鞘为外植体，经多种培养基诱导出愈伤组织，选择产愈率较高的三种培养基继代，对增殖效果较好的培养基再次进行不同蔗糖浓度梯度的增愈试验。结果表明，低蔗糖浓度（１．５％）有利于愈伤组织的生长发育，组织块质量好．产愈量和产胚量高；高浓度则不利于愈伤组织增殖。     

长期继代培养柑桔愈伤组织原生质体植株再生

长期继代培养柑桔愈伤组织原生质体植株再生①林定波沈德绪（１浙江农业大学园艺系，杭州３１００２９）ＰｌａｎｔＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＦｒｏｍＰｒｏｔｏｐｌａｓｔｏｆＣｉｔｒｕｓＣａｌｕｓＳｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄＦｏｒＬｏｎｇ┐ＴｉｍｅＬｉｎＤｉｎｇｂｏＳ...     

孜然芹子叶愈伤组织诱导及继代培养研究

探讨孜然芹种子表面消毒的适宜方法,以孜然芹无菌苗子叶为外植体,研究最适宜愈伤组织诱导及继代培养的激素种类及浓度.结果表明:孜然芹种子经70;酒精10 s+0.1;升汞50 s,20 d萌发率可达97.70;,污染率11.11;;子叶切段在光照时间16 h/d,MS+2,4-D 2 mg/L的愈伤组织诱导启动培养基中,30 d愈伤诱导率达100;, 继代培养在MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.2 mg/L培养基中光照16 h/d培养20 d,愈伤组织增殖率达67;,愈伤组织在同种继代培养基中暗培养20 d,增殖率达80;.     

西洋参花药愈伤组织诱导培养条件的优化

为了提高西洋参花药培养的愈伤组织诱导率,试验以吉林省集安西洋参花蕾为材料,初步研究不同浓度2,4-D、6-BA和蔗糖对花药愈伤组织诱导的影响,优化西洋参花药愈伤组织诱导培养条件。结果表明:在MS基本培养基附加2,4-D 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+蔗糖60g/L+琼脂5.5g/L+水解乳蛋白0.5g/L的条件下,西洋参花药愈伤组织的诱导率可达37.53%。2,4-D对西洋参花药愈伤组织的诱导必不可少;2,4-D和6-BA的合理搭配能提高西洋参花药愈伤组织的诱导率;60g/L的蔗糖能有效促进西洋参花药愈伤组织的诱导。     

百蕊草愈伤组织离体培养条件的优化

以百蕊草的幼嫩茎及叶片为外植体,探讨百蕊草外植体的最佳消毒时间、离体培养的培养基适宜配方、p H值以及培养温度。结果表明,最佳消毒时间为酒精消毒11 s后升汞消毒8 min;愈伤组织诱导增殖的最佳培养基为MS+1 mg·L-1 6-BA+0.15mg·L-1NAA+0.1 mg·L-12,4-D;最适p H值为5.8~6.0;最佳培养温度为22~26℃。     

乙酸对杜仲愈伤组织胶含量的影响

对培养基中影响杜仲愈伤组织胶合成的前体物质乙酸浓度进行了研究。结果表明,以S4代杜仲愈伤组织为原料,随着培养基中乙酸浓度的增加,杜仲愈伤组织中胶含量不断提高,但过高浓度的乙酸会抑制愈伤组织的生长;最适乙酸添加浓度为1.0~1.5 mm o l/L,此时,不会影响愈伤组织的生长,且其平均增长率为1 977.97%,其平均含胶量达原植株的81.20%,从而提高了杜仲愈伤组织的含胶量。     

南方红豆杉愈伤组织诱导和继代培养体系的建立

以南方红豆杉为材料,建立了其愈伤组织诱导与保持的技术体系,主要为:(1)南方红豆杉侧芽是诱导愈伤组织的最佳外植体;(2)南方红豆杉愈伤组织诱导的最佳培养基为:B5+2.0 mg.L-12,4-D+1.0 mg.L-1NAA+0.2 mg.L-1IAA;(3)南方红豆杉愈伤组织增殖的培养基为:B5+4.0 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-1GA+500 mg.L-1AC+2000 mg.L-1LH.并在培养基中同时添加AC、LH和GA33种抗褐物质,取得较好的抗褐化效果.     

长期继代培养过程中楸树愈伤组织的分化能力

以长期继代培养的楸树愈伤组织和新诱导的楸树愈伤组织为试验材料,利用石蜡切片比较分析它们的组织形态特征,并测定过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和淀粉酶的活性,以及可溶性蛋白与可溶性糖的含量,以探究楸树愈伤组织长期继代培养后分化再生困难的形成原因。组织形态学观察分析发现,继代培养7 a的白色颗粒状愈伤组织细胞中淀粉粒含量丰富,分布均匀,仍为胚性愈伤组织;新诱导的浅绿色愈伤组织存在明显的细胞分化中心,有均匀分布的淀粉粒,为早期胚性愈伤组织;新诱导的黄白色致密愈伤组织为非胚性向胚性转化的愈伤组织,新诱导黄白色疏松愈伤组织为非胚性愈伤组织。生理生化指标测定分析发现,继代培养7 a的楸树胚性愈伤组织中可溶性糖和可溶性蛋白的含量均显著高于新诱导出的3种愈伤组织,但其同工酶活性却较低,表明在长期继代培养的过程中,楸树愈伤组织的生理生化代谢活性降低。由此推测生理生化代谢活性的下降可能是造成楸树胚性愈伤组织长期继代培养后分化再生困难的重要因素。     

毛建草茎段愈伤组织的诱导及继代培养试验

以毛建草茎段为外植体,研究激素6-BA,NAA不同配比对愈伤组织诱导的影响,同时对影响其芽分化及生根的因素进行探讨。结果表明,最适宜诱导毛建草茎段愈伤组织形成的培养基配方是MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L;增殖培养易生根但难以分化出芽。     

杜仲愈伤组织的诱导及植株再生的研究

在附加不同浓度ＮＡＡ,６—ＢＡ的ＭＳ培养基上对杜仲的下胚轴和子叶进行愈伤组织的诱导并获得两类不同的愈伤组织,一类是白色的结构松散的非胚性愈伤组织,虽然能继代培养,但在附加较高浓度的６─ＢＡ的ＭＳ培养基上都不能再生植株;另一类是黄绿色的结构紧密的有颗粒状突起的胚性愈伤组织．在附加适量的６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能较容易再生小植株。实验表明,杜仲的下胚轴和子叶在附加１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ和１．０ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能１００％诱导成胚性愈伤组织;胚性愈伤组织在附加０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和２．５ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上培养,植株再生频率高达９２％;小植株转移到附加１．５ｍｇ／Ｌ的ＩＢＡ的１／２ＭＳ培养基上,１５ｄ左右长出较粗的根。