仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究Ⅳ.肠毒血症C型疫苗生产用菌种的确定

试验证明用单一菌株C59-2生产C型产气荚膜梭菌肠毒血症干粉灭活疫苗,其效力可以达到<规程>要求,并且简化了生产工艺,降低了生产成本,提高了生产效率.疫苗免疫的兔血清可分别中和原来3个制苗用菌株所产生的外毒素.     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断

1988年北京，河北发生一种急性死亡的新仔猪传染病，此后，疾病逐渐蔓延到国内其他地区，发生率与死亡率也日益增高，经对来自8个省市48个猪场179窝猪中死于此病的301头仔猪检查分离病原，获得207个分离菌株，经过鉴定，将其中141株鉴定为产气荚膜梭菌A型，另66株为C型，结合着流行病学情况，临床症状和病理学观察结果，肯定了此种疾病即是由产气荚膜梭菌A型和C型引起的一种仔猪肠毒血症。     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症疫苗生产用菌种的筛选

在试管中对 4 5株产气荚膜梭菌A型菌 (Cl .PerfringensA型 )进行了初步筛选 ,用于制作仔猪肠毒血症疫苗的菌株。这 4 5株全部能产生致死性、坏死性、溶血性的α 毒素 ,其中 35 %可产生肠毒素 ,4 2 .5 %能形成芽孢。C5 7- 1株虽然不产生肠毒素 ,也不形成芽孢 ,但其毒性最强 ,在 1ml培养液中含有 10 0MLD。由于猪肠毒血症是由α 毒素引起的 ,与肠毒素无关 ,所以被初步选定为制作仔猪肠毒血症疫苗进行动物体内试验时的备用菌株     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究Ⅲ.7株A型产气荚膜梭菌菌株的产毒素试验

本试验对7株A型产气荚膜梭菌菌株在不同培养基、不同培养温度和不同培养时间的产毒力进行了试验。结果表明，培养基的种类和培养时间对菌株的产毒素能力影响较大，而培养温度则影响较小。所试菌株中C57-1菌株的产毒素能力最强，是制备疫苗的最佳菌株。     

牛产气荚膜梭菌肠毒血症的诊断

宝泉岭管局新华农场某队和二九一农场某队饲养的肉牛和奶牛，临床表现突然发病，食欲减退，反刍停止；死亡牛剖检可见心脏表面刷状出血，肝脏肿大，前胃黏膜易脱落，有点状和片状出血。真胃黏膜水肿、脱落或有弥漫性出严重出血。根据流行病学调查和血，脾肿胀不明显，被膜下或边缘部有出血点，肠管外观呈暗红色，内容物呈西红柿酱样，肠黏膜实验室诊断，鉴定为由A型产气荚膜梭菌引起的肠毒血症。报告如下。     

犊牛产气荚膜梭菌引发肠毒血症的诊断与防治

1临床症状 肠毒血症多呈急性或最急性。犊牛出生后精神、食欲尚好，发病突然，多在生后2～10日龄犊牛，其特征是膨胀、脱水和排出红色粘性粪便；病程短，死亡快。     

成年奶牛产气荚膜梭菌肠毒血症的防治

奶牛产气荚膜梭菌肠毒血症是由产气荚膜梭菌在肠道中大量繁殖产生毒素而引起的奶牛毒血症,多见于犊牛,成年奶牛少见。2006年857农场发生成年奶牛产气荚膜梭菌（D型）肠毒血症,后经治疗,病情得到控制,现将治疗和预防措施介绍如下。     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究V.疫苗的制备、检验和田间试验

将试验确定的产毒力强的产气荚膜梭菌A型、C型菌种,选用复合培养基,经培养、灭活脱毒、浓缩和冷冻干燥,制备多批肠毒血症A型、C型和AC型二价干粉灭活疫苗.采用免疫攻毒或中和试验方法对研制的疫苗进行效力检验,疫苗100%合格,达到<规程>规定的标准.在13个省进行大规模田间试验的结果表明,所研制的疫苗性能良好,安全有效.母猪接种疫苗后无一例不良反应发生,并且仔猪生后健康,能够有效地预防和控制该病的发生和流行.     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原分离及疫苗研究Ⅵ.疫苗的本动物免疫效力试验及保存期试验

用实验室制备的仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症A型疫苗、C型疫苗和AC型二价疫苗各3批,分别免疫接种初产或无特异性中和抗体的经产怀孕后期妊娠母猪36头.免疫母猪所产仔猪在其采食初乳后,分别攻击致死量的产气英膜梭菌毒素.试验结果表明,3种疫苗对免疫母猪所产仔猪的保护率分别为100%、100%和96.63%.疫苗保存期试验表明,疫苗在2～8℃条件下保存3年,其效力保持不变.     

C、D型二价产气荚膜梭菌抗毒素血清的制备及保护效果评价

为治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病,研究制备了产气荚膜梭菌多价高效抗毒素血清。试验采用C、D型产气荚膜梭菌标准菌株,制备了高浓度外毒素和灭活疫苗,作为免疫原多次免疫绵羊,通过间接ELISA法监测绵羊抗体水平变化,采用小鼠中和试验检验绵羊抗毒素血清保护效果。结果表明:制备的高效价抗C、D型产气荚膜梭菌毒素血清每0.1 m L血清能中和400个C型毒素对小鼠的MLD和600个D型毒素MLD,有良好的应用前景。     

健康与腹泻仔猪源A型产气荚膜梭菌的多位点序列分型

A型产气荚膜梭菌(CpA)存在于健康仔猪肠道,同时也是仔猪肠毒血症的关键病原.为研究两者的差异,本试验在江西省4个地区采集健康和腹泻仔猪粪便样本分离得到CpA,通过16S rRNA鉴定所有CpA分离株,并通过多重PCR确定分离株的毒素分型.采用MLST多位点序列分型技术对选取的24株CpA(腹泻或健康来源CpA各12株...     

Necrotizing infectious enteritis in piglets, caused by Clostridium perfringens type C. IV. Bacteriological diagnosis

The diagnosis of necrotizing enteritis in infant piglets is based on clinical observations, patho-anatomical changes, and bacteriological and bacterio-toxicological examinations.Previous works (Høgh 1967 a, b, 1969) have dealt with the aetiology, symptomatology and pathology of the disease.The purpose of this paper is to present the results of bacteriological examinations of pigs from spontaneous outbreaks.     

Molecular structure and function of the carboxy-terminus of the alpha-toxin from Clostridium perfringens type A

In order to interpret the molecular structure and biological characteristics of Clostridium perfringens alpha-toxin (CPA), the CPA251-370 gene was cloned and the 120 amino acid carboxy terminal of CPA (CPA251-370) was obtained. The secondary and three-dimensional (3D) structures of CPA251-370 were predicted. The secondary structure of CPA251-370 consisted primarily of 35.48% β-sheets and 44.35% random coils. Compared with the CPA toxin consisting of 10 α-helices and eight β-sheets, the 3D structure of CPA251-370 only contained eight β-sheets. The circular dichroism (CD) spectrum detection showed that the CD spectrum of CPA251-370 changed slightly compared with the CD spectrum of CPA. Biological activity assays showed that CPA251-370 had lost the phospholipase C (PLC) activity and haemolytic activity of CPA. More importantly, the mice immunized with CPA251-370 were protected against a challenge with 1 MLD C. perfringens type A strain C57-1. This study laid a solid foundation for explaining the relationship between molecular structure and biological characteristics of CPA in the future. Our research also provides CPA251-370 as a candidate strains for genetic engineering subunit vaccines of C. perfringens type A.     

羊源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定与进化树分析

无菌采取内蒙古通辽市某羊场病死羊肠道内容物、肝脏和肺脏,进行细菌的分离培养。将从十二指肠内分离到的1株疑似致病菌株进行生化试验、小鼠致病性试验,再将其通过魏氏梭菌多重PCR试验、魏氏梭菌ELISA试验及16S rRNA PCR试验进行鉴定。将PCR产物进行测序并进行了16S rRNA基因的进化树分析。结果显示,经细菌生化试验、多重PCR试验、ELISA试验和16S rRNA试验均证实此分离株为A型产气荚膜梭菌;进化树分析显示该菌与序列号为HQ808749.1(美国)的A型产气荚膜梭菌遗传距离最近。结果表明,该羊病例所分离的致病菌为A型产气荚膜梭菌。     

C型产气荚膜梭菌外毒素致小鼠肠道损伤的转录组分析

旨在探索产气荚膜梭菌外毒素造成机体炎性损伤及免疫调控紊乱的毒性机制,为产气荚膜梭菌病的致病机理研究提供理论基础。将C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2培养上清腹腔注射BALB/c小鼠,采集小肠样本进行转录组测序,筛选差异表达基因,并对其进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果显示,共获得40.99 Gb有效碱基,筛选后共得到795个差异表达基因,其中,229个基因表达上调,566个基因表达下调,对随机选取的10个基因进行q-PCR验证,其相对表达量与转录表达谱一致。GO功能注释主要涉及G蛋白偶联核苷酸受体活性和G蛋白偶联嘌呤核苷酸受体活性等。KEGG通路富集分析发现,主要富集在TNF信号通路、IL-17信号通路、p53信号通路、FOXO信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路等。产气荚膜梭菌外泌毒素侵入机体,会激活TNF等炎性信号通路,进而造成肠道发生炎性损伤甚至坏死。