西藏牦牛源牛支原体对氨基糖苷类抗生素耐药靶位突变分析

掌握西藏牦牛源牛支原体对氨基糖苷类药物的敏感性及其耐药机制,为牛支原体病的临床治疗与预防提供依据。本研究通过微量稀释法对10株牦牛源牛支原体进行了氨基糖苷类药物敏感性与耐药性试验,并对敏感株进行体外高度耐药诱导,同时分别提取敏感株、临床耐药株和体外诱导高度耐药株基因组进行氨基糖苷类药物耐药基因靶位分析与药物主动外排系统研究。结果显示,敏感株和耐药株在靶位基因中未检测到相应位点的碱基突变,体外诱导高度耐药株M.bovis 3和M.bovis 7发生了A1409G基因位点突变,M.bovis 1和M.bovis 5发生了A1409G和C1192T基因位点突变,M.bovis 4和M.bovis 9发生了A1408T和C1192T基因位点突变;经药物主动外排系统检测分析,结果显示,西藏牦牛源牛支原体不存在以氨基糖苷类抗生素为底物的主动外排系统。研究结果表明,西藏牦牛源牛支原体不同分离株对氨基糖苷类药物敏感性存在较大差异,其耐药菌株的产生可能与临床长期使用单一抗生素有关。体外诱导高度耐药株对大观霉素、卡那霉素和庆大霉素产生高度耐药的原因是其耐药基因发生碱基突变,但碱基突变在牛支原体对氨基糖苷类...     

福建地区滑液囊支原体的分离、鉴定及对7日龄SPF鸡致病性

【目的】了解福建地区滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）临床感染菌株的进化关系以及致病能力。【方法】对福建地区疑似MS感染鸡群的上颚裂和气管拭子样品进行病原检测、分离和鉴定，获得MS临床分离株，并进行vlhA基因进化树分析；选取其中6株MS分离株，通过点眼滴鼻途径感染7日龄SPF鸡，观察感染后的临床症状和解剖病理变化、气管组织病理损伤、气管病原再分离以及MS抗体阳性率，比较不同菌株的致病力和水平传播能力。【结果】气管拭子的MS检出率显著高于上颚裂拭子。通过分离、鉴定共获得9株MS分离株，遗传进化关系分析表明vlhA基因存在着多样性，不同分离株具有不同的进化来源。根据vlhA基因的进化关系，选择6株MS分离株感染7日龄SPF鸡，未观察到明显的临床症状；临床解剖发现，感染HI株14 d、感染HI和SD6株21 d各有1羽鸡出现了气囊炎，而其余各鸡以及同居对照鸡均未发现有明显病理变化。气管组织病理学分析发现，不同MS分离株在感染后7、14、21 d的病理损伤能力存在显著差异；气管MS病原再分离结果显示，不同分离株在气管的定殖和复制能力存在明显差异，并且SD19和SD6...     

鸡滑液囊支原体防控措施

正近期鸡滑液囊支原体(MS)在鸡群中发病率高且呈持续增长趋势,病鸡表现关节、爪垫肿胀,跛行,发育不良,可导致淘汰率增加、增重缓慢、饲料报酬降低等,给鸡群生长生产带来严重影响,并对养殖场造成难以弥补的经济损失。1临床表现鸡毒支原体(MG)感染可引起鸡慢性呼吸道疾病,临床特征为咳嗽、流鼻液和气管啰音。鸡滑液囊支原体(MS)感染可引起滑液囊炎,其特征为关节肿大、跛行。通常多见于4～16周龄青年鸡群发     

肉鸡滑液囊支原体的分离鉴定和药敏试验

通过分离培养张家口某鸡场MS菌株,采用PCR方法扩增MS 16S RNA,并对分离培养菌株进行药敏试验.结果显示,感染MS肉鸡站立困难,跗关节和爪垫肿胀,分离培养的病原体菌落为光滑、圆形,小面积"煎蛋样".PCR产物在207 bp处出现条带.药敏试验发现该菌落对酒石酸泰乐菌素和延胡索酸泰妙菌素敏感,最小抑菌浓度分别为0.122和0.244μg/mL.因此,可确定该鸡场已感染滑液囊支原体,推荐使用酒石酸泰乐菌素或延胡索酸泰妙菌素作为首选抑菌治疗药物.     

鸡毒支原体感染

鸡毒支原体感染可引起呼吸道症状为主的慢性呼吸道病,其特征为咳嗽、流鼻液、呼吸道罗音和张口呼吸。疾病发展缓慢,病程长,成年鸡多为隐性感染,可在鸡群长期存在和蔓延。禽体内可分离出多种禽支原体,而对鸡致病性最常见的有鸡毒支原体(MG)、火鸡支原体(MM)和滑液囊支原体(MS)。     

滑液囊支原体病的分析及治疗

正鸡滑液囊支原体感染(Mycoplasma Synoviae,MS),又称滑液支原体感染、病原为滑液囊支原体,属于鸡的一种急慢性传染病,本病潜伏期11天~21天,3~20周龄,均为此病的感染期,9~12周龄的鸡则患病最多,发病率在5%~10%左右,死亡率通常在10%以内。而12周以上的则发病率低,病鸡常见症状:鸡冠萎缩、发白、跛行、离群、贫血、消廋、喜卧、羽毛粗乱、缩头闭眼、生长缓慢、步态呈轻微的八字步、排绿色     

五株鸡滑液囊支原体的分离与鉴定

从12份鸡滑液囊支原体临床病料中分离到5株支原体,经形态特性、生化特性、培养特性、分子生物学特性鉴定,5株支原体均为鸡滑液囊支原体。活菌计数结果表明,HN3株菌液的活菌数相对较高,为109CCU/m L;毒力试验结果表明,5株鸡滑液囊支原体对45日龄SPF鸡的发病率为50%~90%,HN3株毒力相对最高,为90%。     

鸡滑液囊支原体病研究进展

鸡滑液囊支原体(Mycoplasma Synoviae,MS)是一种常见的禽类疫病,呈世界性流行,给国内外养禽业造成了巨大的经济损失.因此,防控鸡滑液囊支原体病,净化种鸡群对养禽业的发展意义重大。本文通过对MS的病因、病原、流行特点、症状以及防治措施等的研究进展进行综述,以期为MS的综合防控提供参考.     

林麝肺源ST1249型铜绿假单胞菌的分离鉴定及其全基因组序列分析

【目的】对分离自林麝化脓肺脏的1株疑似铜绿假单胞菌(PA)进行鉴定,并分析其致病和耐药机制,为林麝PA感染化脓性疾病的防控奠定基础。【方法】将病原菌分离纯化后,依次进行生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验和小鼠致病性试验,并通过全基因组测序,对分离菌株进行群体进化和物种分型分析以及基因功能注释。【结果】分离自林麝化脓肺脏的1株疑似铜绿假单胞菌经鉴定与PA相符,命名为FMDP001。药敏试验显示其对阿莫西林、头孢曲松、氨曲南、多粘菌素B和林可霉素耐药;对小鼠半数致死量为9.4×10~5 CFU/mL。全基因组序列分析显示该菌基因组大小为6 955 100 bp,序列类型为ST1249,与B136-33株同源性最高,且两菌株基因组平均核苷酸一致性(ANI)值达98.93%;全基因组中共有357个序列编码FMDP001与致病性相关的基因,根据功能分为黏附、铁摄取、胞外毒性蛋白和调控系统;84个序列编码耐药基因,其中多药耐药外排泵为主要成分。【结论】从林麝化脓肺脏中分离到1株致病性较强的PA,并获得ST1249型林麝源PA的全基因组序列,序列显示该菌携带大量药物外排泵及生物膜形成相关基因,决定其具有多重耐药特性,哌拉西林等可作为该类型PA感染的临床用药。     

益阳地区鸡滑液囊支原体感染的血清学调查与分析

为了解益阳地区规模鸡场鸡滑液囊支原体的流行情况,采用酶联免疫分析试剂盒对鸡群进行检测。结果显示：不同区县鸡群滑液囊支原体血清阳性率在36.36%～57.14%,平均阳性率为43.68%;不同品种鸡群滑液囊支原体血清阳性率在35.13%～72.22%,平均阳性率为48.65%;不同用途不同日龄鸡群滑液囊支原体血清阳性率在21.43%～64.58%,说明不同区县、不同品种、不同用途和不同日龄的鸡群均存在不同程度的滑液囊支原体感染。调查结果表明,鸡场与农村居民区之间距离较近、没有选择敏感药物预防、鸡场使用时间长、自动化程度低、管理松散、生物安全措施执行不严的鸡场滑液囊支原体阳性率高,需要采取注意引种、疫苗免疫、药物预防、实行精细化管理和执行严格的生物安全措施来控制其传播。     

鸡场饮水中肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及耐药性研究

【目的】研究养殖场鸡饮水中肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）的耐药表型和耐药基因的携带情况,并分析其相关性,为有效预防该病提供参考。【方法】从养殖场鸡饮水系统中分离、鉴定肺炎克雷伯氏菌,采用药敏纸片扩散法检测分离菌株对25种常用抗菌药的耐药性,通过PCR检测菌株携带的常见耐药基因。对其中4株肺炎克雷伯氏菌进行全基因组测序,利用CARD抗性基因数据库预测耐药基因的携带情况。【结果】从养殖场鸡饮水系统中共分离到9株肺炎克雷伯氏菌,药敏试验表明这些菌株呈现出多重耐药,仅对多粘菌素敏感。PCR检测发现,9株肺炎克雷伯氏菌共携带13种常见的耐药基因,其中,β-内酰胺酶类耐药基因CMY-1、BlaSHV和BlaCTX-M,碳青霉烯类耐药基因KPC,喹诺酮类耐药基因QnrB、QnrS和QnrA,氨基糖苷类耐药基因Aph(3’)-Ia,磺胺类耐药基因Sul2等12种耐药基因与其耐药表型表现一致,而Mcr-1基因与其表型相反。全基因组扫描分析结果显示,4株肺炎克雷伯氏菌共携带了59种耐药基因,涉及31类抗生素药物,其中四环素类抗生素的耐药基因最多,其次是大环内酯类抗生素和氟喹诺...     

蛋鸡滑液囊支原体病的流行调查与防控

蛋鸡养殖一般规模较大,生长周期较长,感染鸡滑液囊支原体病后蔓延极其迅速,常在还没产生经济效益时就发生不可挽回的损失,对蛋鸡产业带来极大的损失.本文就蛋鸡滑液囊支原体病的流行病学特征、临床症状、诊断方法及防治进行全面介绍,为蛋鸡滑液囊支原体病的预防和治疗提供理论依据.     

鸡源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的分子检测

对豫北地区临床分离的102株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定、MICS值测定及氟苯尼考耐药基因floR的检测.最敏感的是头孢喹肟,敏感率为93.1%;其次为阿米卡星和氟苯尼考,敏感率分别为59.8%和54.9%;而对复方新诺明的耐药率达到100%;此外,对四环素,多西环素,氨苄西林,恩诺沙星和沙拉沙星的耐药率为78.4%~94.1%.氟苯尼考耐药基因的分子检测显示,有45.1%的菌株显示floR基因阳性.对其中4株大肠杆菌的氟苯尼考耐药基因floR进行了克隆和测序.结果表明,克隆的floR基因所推导的氨基酸序列与其它12-跨膜外输泵家族在共同的基序上是保守的,在克隆的floR序列与报道的floR序列间仅存在1~3个氨基酸替代.     

滑液支原体灭活疫苗体外诱导T淋巴细胞增殖及免疫保护研究

滑液支原体感染是由滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)引起的鸡和火鸡的一种急性或慢性传染病。为控制滑液支原体感染,本研究利用MS WVU1853株辅以Montanide ISA 206 VG佐剂制备了灭活疫苗,研究发现MS灭活疫苗在体外能够激活鸡骨髓来源的树突状细胞(dendritic cell,DCs),DCs能够摄取MS灭活疫苗抗原提呈给T淋巴细胞并刺激T细胞增殖,利用流式细胞术方法检测增殖的T淋巴细胞亚群,CD4+T细胞增殖比率高于CD8+T细胞。SPF鸡免疫高剂量(1010cfu·m L-1)MS灭活疫苗后IFN-γ表达量显著高于对照组(P0.05),CD4+T细胞主要向Th1类细胞分化并分泌IFN-γ促进CTL细胞发挥杀伤作用,证明灭活MS疫苗能够有效激发免疫鸡群的细胞免疫反应。利用MS灭活疫苗免疫7日龄SPF鸡,单次免疫可以对MS攻毒产生完全保护,另外对疫苗安全性进行检验显示疫苗安全性良好,对鸡安全有效。     

多重耐药大肠杆菌中前噬菌体的分布特征及诱导分离

[目的]通过调查前噬菌体在多重耐药大肠杆菌中的分布特征、诱导分离以及前噬菌体中耐药基因与毒力基因的流行状况,为研究前噬菌体介导耐药基因在细菌的传播提供科学依据.[方法]挑选前期保存的2018-2019年广东省分离的131株禽源多重耐药大肠杆菌进行核酸提取及全基因组测序,将二代测序的结果组装拼接成全基因组序列,上传至噬菌...     

鸡滑液囊支原体病发病情况调查及诊治

为掌握滁州市鸡滑液囊支原体病发病情况,并总结诊断和治疗方法,为后续疾病预防和治疗提供帮助,收集滁州市2017～2020年鸡滑液囊支原体病死亡数据,分析发病情况,发现近年病死率有所上升.结论:鸡滑液囊支原体病发病率呈上升趋势,病死率比较高,养殖过程需要密切观察其症状,发现病情及时采取对应的治疗措施.     

临床分离鸡毒支原体结构蛋白比较及抗原性分析

应用SDS-PAGE对分离自广东、四川和北京等地区鸡毒支原体及抗生素压力下诱导的耐药鸡毒支原体进行了结构蛋白比较分析.结果显示不同地区分离的鸡毒支原体结构蛋白存在差异,而共同之处是在75KD、55KD、29KD和26KD处都出现了高表达的蛋白条带,与诱导耐药株结果一致.用自制的2株特异性兔抗MG多克隆抗血清对鸡毒支原体临床分离株及实验室诱导的耐药鸡毒支原体进行Western-Blot分析,印迹结果显示所有临床分离鸡毒支原体在分子量大小约75KD和55KD均出现特异条带.     

鸡滑液囊支原体流行病学特征及防控措施

滑液囊支原体病是鸡的一种急性或慢性传染性疾病,主要损坏关节的滑液囊膜及腱鞘,引起渗出性滑膜炎、腱鞘滑膜炎或黏液囊炎。近两年,在河南省、山东省、河北省、辽宁省等蛋鸡养殖集中地区发病率较高,一旦发病无有效的治疗方法,给养殖业造成较大的经济损失。文章对鸡滑液囊支原体流行病学特征及防控措施进行论述。     

基于特有基因VY93_RS02885为靶标的滑液支原体qPCR检测方法建立

利用CD-HIT-EST快速聚类分析和BLASTN同源性比对共鉴定出17个滑液支原体(Mycoplasma synoviae)特有基因,并从中选取保守基因VY93_RS02885作为分子诊断的靶标基因.根据该基因核苷酸序列设计了1对引物,建立了滑液支原体的SYBR green qPCR检测方法.结果表明,该方法对不同浓度的模板和对应的CT值具有较好的线性关系,R2值为0.9988;该方法的特异性较好,BLASTN比对,检测引物对仅能匹配滑液支原体的特有基因VY93_RS02885,结果显示,该方法能特异性地检测滑液支原体,与其他常见的引起禽关节炎的细菌/支原体性病原无交叉反应;该方法的敏感性较好,100％阳性检测的靶标基因最小拷贝数为10;该方法的重复性较好,对3个不同浓度的模板进行组间和组内重复检测,变异系数≤1.1727％.此外,该方法对临床样品的检出率与传统检测方法相符.因此,本研究建立的针对滑液支原体特有基因的SYBR green qPCR检测方法具有用时短、特异性高、准确性高、敏感性高、可重复性强的优点,可为滑液支原体的快速诊断和流行病学调查提供技术手段.     

1株抗生素耐药微小脲原体hebnu3h07的全基因组测序及序列分析

目的对1株从患者标本分离出的具有耐药性的微小脲原体hebnu3h07进行全基因组测序和生物信息学分析,为深入研究微小脲原体的基因组学特征及耐药机制提供依据。方法对从临床分离的微小脲原体hebnu3h07株进行培养鉴定并进行药敏试验,采用Ion torrent高通量测序技术对其进行全基因组测序,再使用相关软件对测序数据进行基因组组装、基因预测与功能注释、共线性分析、直系同源簇(COG)聚类分析、菌株分型和介导耐药的相关基因检测分析。结果微小脲原体hebnu3h07株对数种抗生素表现出不同程度的耐药性,其完整基因组大小为723 292bp,GC含量为25.4%,与现存3株微小脲原体完整序列比对发现其基因组序列较为保守,多位点序列分型属于ST1型,对介导耐药的基因检测发现数个突变位点。结论通过对此株抗生素耐药的微小脲原体的全基因组测序和导致耐药的基因位点分析,丰富了我国微小脲原体基因组数据,为微小脲原体的耐药机制研究提供了依据。