基于ITS序列分析鉴定灵芝属菌种

针对11个本所保藏灵芝属菌株及9个灵芝属野生菌株的ITS序列,应用特异引物进行PCR扩增,对其产物进行测序,并从GenBank上下载2条赤芝(Ganoderma luncidum)、1条黑紫灵芝(Ganoderma japonicum)和1条无柄紫灵芝(Ganoderma mastoporum)的ITS序列,以猴头菇(Hericium erinaceum)为外类群,用NJ(Neighbor-Joining)法构建系统发育树,结果表明,20个灵芝属菌株聚为4个簇,其中赤芝组和树舌亚属的菌株各自聚为1组,其组内同源性均达99.7%以上,紫灵芝组的菌株分成2组:无柄紫灵芝和黑紫灵芝。系统发育分析也表明仅根据形态学特征难以将灵芝属菌株进行有效的分类,利用分子生物学的技术手段对灵芝菌株进行分类是一种更有效的方法,ITS序列分析在近缘种的分类鉴定上很有价值。     

灵芝属9个野生菌株的分子鉴定与系统发育关系分析

对江西省9个野生灵芝属菌株以及全国多地收集的31个栽培灵芝菌株进行ITS序列测序和分析，结果 9个野生菌株有灵芝、紫芝、南方灵芝、有柄灵芝、树灵芝等。构建系统发育树，分析9个野生灵芝属菌株与31个栽培灵芝菌株间的系统发育关系，为9个野生灵芝属菌株研究开发提供参考。     

三株坦桑尼亚野生灵芝菌株人工栽培子实体活性成分含量分析

以国内灵芝(Ganoderma)栽培菌株粤GL-YW( G.lucidum)和粤GL-YWZ(G.sinense)为对照,对3株采自坦桑尼亚的野生灵芝(Ganoderma)菌株的人工栽培子实体进行多糖和三萜含量测定.结果表明,3个野生菌株子实体中多糖和三萜含量均显著高于对照菌株,值得进一步开发和推广.     

16个灵芝菌株基于ITS及ISSR标记的遗传多样性分析

应用ITS、ISSR分子标记技术对收集保存的16个灵芝菌株进行遗传多样性分析。基于ITS序列，将2个“白灵芝”鉴定为乳白栓孔菌（Leiotrametes lactinea），并非白肉灵芝（Ganoderma leucocontextum），其他菌株均为灵芝属。基于ISSR分子标记技术对样品进行聚类分析，结果表明，相似水平在0.64时，16株供试菌株可以聚为三组。第一组中的1号与9号的遗传相似系数在0.95以上，11号与12号菌株的遗传相似系数达到1.00，可能属于同物异名。研究结果将为纠正灵芝种源同物异名、同名异物的问题以及进一步开发利用奠定基础。     

基于ITS序列分析探讨我国栽培凤尾菇的分类地位

针对我国栽培凤尾菇(Pleurotus sajor-caju)及其近缘种共10个菌株的ITS序列,应用特异引物进行PCR扩增,对其产物进行测序,并从GenBank上下载侧耳属(Pleurotus)3个种7条ITS序列、韧伞属(Lentinus)的4条ITS序列和香菇属(Lentinula)的3条ITS序列,以冬虫夏草(Cordyceps sinensis)和蛹虫草(Cordyceps militaris)为外类群,用NJ(Neighbor-joining)法构建系统发育树,结果表明:凤尾菇在侧耳属分支上与侧耳属内种的相似性达98.5%以上,韧伞属和香菇属的属内相似性也均为98%以上,而侧耳属和韧伞属、香菇属的属间相似性仅约80%,故凤尾菇应归于侧耳属;在进一步研究中,将该凤尾菇与其近缘种的ITS1-5.8S-ITS2序列作碱基完全比对,结果发现它与肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)的碱基完全一致,而与其它近缘种均存在较大碱基差异,因此,目前我国广泛栽培的凤尾菇与肺形侧耳可能是同物异名种,建议订正其名称,将其拉丁名统一为P. pulmonarius.本研究首次将ITS序列分析和碱基比对结合对凤尾菇的分类地位及拉丁名进行研究,结果表明ITS序列分析在近缘种的分类鉴定上很有价值.     

基于ITS和ISSR标记的灵芝遗传多样性和群体结构分析

以来自不同地理区域的48个灵芝种质资源为试材,采用ITS和ISSR分子标记的方法,研究了灵芝遗传多样性,以期利用遗传信息数据较理想地显示出不同灵芝菌株的遗传多样性。结果表明：通过进行ITS序列扩增测序,将48个灵芝菌株分为赤芝(35个)、无柄灵芝(11个)、四川灵芝(1个)、古巴栓孔菌(1个)。5条ISSR引物共扩增得到53条条带,多态性条带比率为96.23%,Nei′s基因多样性为0.27,Shannon′s信息指数为0.43。ISSR标记遗传相似系数约为0.70,将48个灵芝菌株分为3组,其中第1组为11个无柄灵芝,第2组为菌株29“盆景1”,其他菌株为第3组,说明2种标记结合分析能够更加准确分析不同菌株间的亲缘关系。菌株16和17同为赤芝,且ISSR分子标记遗传相似系数达0.98,推测可能为同一品种,为生产中出现的同物异名现象。该研究选取的用于PCR扩增的ISSR引物,多态性较好、稳定性较高,能有效鉴别出无柄灵芝与其他灵芝,并揭示种质的遗传多样性和群体遗传结构,可为灵芝种质资源保护及优质种质材料选育提供参考依据,以期更好地推动灵芝产业健康发展。     

灵芝属3个种菌丝生长的最适碳源、氮源及温度比较

通过试验研究5种碳源、氮源和温度对灵芝属(Ganoderma)3个种菌株的菌丝生长速度和长势的影响,其结果表明:试验范围内,灵芝(G.lingzhi)P1、肥城树舌灵芝(G.applanatum)和紫芝(G.sinense)的最适碳源分别为蔗糖、葡萄糖和麦芽糖;3个不同种菌株的最适氮源均为酵母膏;灵芝P1菌丝最适生长温度为25℃,肥城树舌灵芝和紫芝菌丝适宜生长温度范围为25℃~30℃。     

野生树舌灵芝菌株的分子鉴定

采集泰安市及其周边地区野生树舌灵芝,将其组织分离并纯化,得到10个菌株的纯培养,利用真菌总DNA提取试剂盒提取其基因组总DNA,通过PCR扩增获得其rDNA ITS区域序列,将获得的序列进行同源性比对和构建系统进化树。结果表明,10个分离物与GenBank中的3个树舌灵芝分离物(DQ424996、DQ425009、JN008873)聚为一簇,ITS核苷酸一致率为99.46%～100%,从分子水平上证明10个分离物为树舌灵芝(Ganoderma applanatum)。     

中国栽培灵芝种“赤芝”的拉丁学名探究

灵芝是中国历史上最著名的保健、药用真菌。灵芝的药用价值最早记载于2 000多年前的《神农本草经》,其中记载的＂赤芝＂就是现在广泛栽培当作保健食品的灵芝。经研究比较赤芝与所有相近种的形态以及核糖体内转录间隔区（ITS）核酸序列,证实赤芝既不是Ganoderma lucidum（亮盖灵芝）,也不同于过去发表的所有灵芝种类,因此在2012年被作为新种Ganoderma lingzhi发表。中国南北各地栽培的赤芝证实是相同种类。产于北美的G.curtisii（柯蒂斯灵芝）其亲缘性最接近赤芝。在中国,亲缘性和形态上与赤芝接近的有生长于华南的G.multipileum（重伞灵芝）、G.flexipes（弯柄灵芝）及G.tropicum（热带灵芝）等。     

十一株棕色蘑菇栽培性状及亲缘关系分析

考察了11株棕色蘑菇(Agaricus bisporus)菌株的形态特征和栽培性状,并利用酯酶同工酶方法和ITS序列分析技术分析了其亲缘关系.结果表明,供试的11株棕色蘑菇菌株在形态特征和栽培性状上都表现出一定的差异性.同工酶和ITS序列分析都能对供试菌株进行初步鉴别,表明供试11株棕色蘑菇菌株亲缘关系较近.     

野生硫磺菌分离株ITS序列分析

采用组织分离的方法从野生硫磺菌(Laetiporus sulphureus)子实体上分离得到菌株ts,以其基因组为模板扩增获得该菌株的ITS序列,序列分析结果表明:该菌株与GenBank中Laetiporus sulphureus var.sulphureus的3个日本分离株聚为一簇,ITS核苷酸一致率为98.31%～99.25%,而与其它22个来自不同国家的硫磺菌属菌株的ITS核苷酸一致率为91.93%～98.12%,依此结果,ts菌株应为L.sulphureus var.sulphureus。     

基于ITS系列分析鉴定野生灵芝属菌种

以从福建漳州采集到的5个野生大型真菌为试验材料,分离纯化菌丝体,提取基因组DNA并且扩增其r DNA的ITS序列,基于ITS序列和子实体形态特征对菌株的分类地位进行初步研究。经鉴定,白芝2号为雅致栓孔菌(Trametes elegans),西灵1为假芝(Amauroderma rugosum),西灵5和长泰灵芝为韦伯灵芝(Ganoderma weberianum),白灵芝与Nemania bipapillata较接近。该研究为西灵5、白芝2号、西灵1等野生菌株的开发利用提供了重要依据。     

19个药用茯苓菌株的ITS序列分析

以19个来源不同的茯苓栽培菌株为材料,采用MEGA4软件对ITS序列进行NJ法聚类分析,构建系统发育树。结果显示,19个药用茯苓菌株ITS长度为1 608 bp～1 611 bp,G/C含量在55.7%～59%之间,遗传距离范围为0～0.0636,遗传差异不大,17个茯苓菌株组成1个大群,茯苓9号和茯苓5.545菌株各自单独聚为一个群。     

40个灵芝属菌株菌丝特征、子实体产量与农艺性状评价

以40个灵芝属菌株（包括9个江西野生菌株和31个国内栽培菌株）为试验材料，对其菌丝特征、子实体产量及农艺性状进行了评价。结果表明，不同菌株的菌丝特征存在一定差异，其中菌株G23、G06、G17、G15的菌丝平均生长速率较快，长势较好。不同菌株子实体产量、生物学效率，以及菌盖大小、形状、菌柄长度、直径等农艺性状差异较大。野生菌株G01、G06和G09具有较大的驯化潜力，可进一步开发利用，栽培菌株G33、G32、G11、G12、G30综合表现优异，适宜在江西省示范推广。     

长白山野生白耙齿菌菌株ITS序列鉴定及其人工驯化栽培试验

试验以长白山野生白耙齿菌菌株为试验材料,进行ITS序列鉴定及人工驯化栽培试验。利用通用引物ITS1和ITS4进行ITS序列鉴定,同时利用农作物下脚料对白耙齿菌进行人工驯化栽培。原种培养料设置6个处理,栽培种培养料设置8个处理,通过ITS序列分析结果得出该菌株ITS序列与NCBI中登录号为JX290578.1、FJ462768.1、EU301643.1等9个白耙齿菌菌株相似性达100%,验证了其为白耙齿菌(Irpex lacteus);最佳原种培养料配方为木屑41.5%、豆秸41.5%、麦麸10%、黄豆粉5%、石膏1%、白糖1%,菌丝生长速度最快,为7.571 mm·d-1,且菌丝浓密,洁白,粗壮;最佳栽培种培养料配方为木屑54%、玉米芯29%、麦麸10%、黄豆粉5%、石膏1%、白糖1%,菌丝生长速度及长势显著高于其他处理。     

不同灵芝菌株液体菌种培养及栽培应用比较

通过对韩国灵芝、美芝、G4、G18等灵芝菌株的液体菌种的生理特性、外观性状、栽培特性和子实体商品性状比较,结果表明G4灵芝菌株生长速度较快,污染率低,子实体商品性状好,是适宜做液体菌种的灵芝菌株。     

1株野生灵芝的分离鉴定及生物学特性分析

为开发南京紫金山野生生物资源,对采自紫金山的一株野生菌株ZJ-1进行了分离鉴定。采用形态学观察和ITS序列分析相结合的方法鉴定该野生菌株为灵芝（Ganoderma lucidum）,并对菌株ZJ-1开展了菌丝培养特性研究及驯化栽培试验。结果表明其最适生长温度为28℃～32℃,适宜pH为4.0～5.0,最适碳源为可溶性淀粉,最适氮源为酵母粉;通过人工栽培成功获得了灵芝菌株ZJ-1的子实体。利用扫描电镜发现灵芝菌管内有着规则的网状结构,其上布满卵形孢子。研究结果将为菌株ZJ-1的开发利用提供数据参考。     

一株野生紫丁香蘑的分离鉴定及其菌种扩繁技术初探

以云南昆明的1个野生香蘑属真菌的子实体为试验样品,进行组织分离得到纯培养菌株Z1,根据形态特征和ITS序列分析,对其进行分类鉴定;然后分别用液体菌种和固体菌种制备Z1的栽培种,分析比较两种制种方式流程及制种周期。综合形态特征和ITS序列分析,将菌株Z1鉴定为紫丁香蘑(Lepista nuda)。用固体菌种制备紫丁香蘑栽培种平均需88 d;而用液体菌种制备紫丁香蘑栽培种仅需66 d,比用固体菌种制栽培种周期平均缩短22 d。用液体菌种制紫丁香蘑的栽培种,生产效率高,值得推广。     

西藏林芝地区黑木耳优良菌株的筛选与鉴定

本试验共在西藏林芝地区的20个不同地点采集到20株优良野生黑木耳菌株,然后结合当地的气候特点,通过常规筛选程序进行菌种筛选,以期得到适合当地栽培出耳的优良黑木耳菌株。结果表明,20株试验菌株中X6菌株的母种、原种及栽培种中菌丝的生长速度、抗污染能力和长势等均优于其他试验菌株与对照菌株,然后通过栽培试验和商品性能分析,确定X6为优良菌株。最后通过rDNA的ITS序列对筛选所得菌株进分子生物学鉴定,ITS基因序列比对表明,X6菌株为木耳属黑木耳种。     

灵芝菌株的DNA指纹分析

CTAB法提取灵芝菌丝体总DNA,再以核糖体DNA转录间隔区（ITSⅡ、IGR IPCR RFLP）结合随机引物扩增多态性（RAPD）标记分析30个灵芝菌株间的亲缘关系.结果表明,ITSⅡ、IGR I-PCR RFLP产生了47条带,其中42条显示出多态性,通过聚类分析将30个菌株分成七大类,包括紫芝、黑灵芝、树舌灵芝、薄树灵芝四大类,以及另外三个无法确定具体归属的类群,但没能将赤芝与松杉灵芝区分开.RAPD从247个随机引物中筛选出8个随机引物,共检测到69个多态性位点并全部显示出多态性,通过聚类分析将供试的30个灵芝菌株全部区分开.