线粒体靶向抗氧化剂MitoQ在猪卵母细胞冷冻保存中的应用

在猪卵母细胞解冻后的孵育液中添加线粒体靶向抗氧化剂MitoQ,通过检测线粒体膜电位、早期凋亡、脂质氧化、活性氧、胚胎发育水平以及相关基因表达水平等,研究MitoQ在猪卵母细胞冷冻保存中的作用。结果表明:猪卵母细胞冷冻后使用MitoQ处理,其线粒体膜电位(0. 66±0. 06)与对照组(0. 47±0. 05)相比显著升高,早期凋亡比率(43. 00%±3. 51%)与对照组(55. 33%±1. 45%)相比显著下降;冷冻后MitoQ处理猪卵母细胞,其活性氧水平(3. 03±0. 61)与脂质氧化水平(20. 54±0. 91)与对照组(13. 13±1. 52和26. 78±0. 54)相比显著下降;冷冻后MitoQ处理猪卵母细胞的存活率(60. 33%±1. 86%)、卵裂率(28. 82%±1. 38%)和囊胚率(4. 50%±0. 48%)与对照组组(47. 67%±1. 67%、22. 07%±1. 07%和2. 20%±0. 51%)相比显著升高;在基因表达方面,与对照组相比,冷冻后MitoQ处理组其Bcl-2、Cu Zn SOD和Mfn2相对表达量显著提升,DNM1、Bax和TNF-α相对表达量则显著下降。综上,在冻后孵育液中添加MitoQ能够提高线粒体功能,降低细胞氧化应激水平,抑制细胞凋亡和改善相关基因表达水平,从而提高冷冻后猪卵母细胞的体外发育能力。     

凋亡抑制剂Z-VAD-FMK在猪卵母细胞冷冻保存中的应用

在猪MII期猪卵母细胞冷冻解冻后的孵育液中添加凋亡抑制剂Z-VAD-FMK,通过检测线粒体膜电位、早期凋亡、胚胎发育和相关基因表达等研究Z-VAD-FMK对冷冻后卵母细胞的影响。结果表明:(1)冷冻后线粒体膜电位(0.91)与新鲜卵母细胞(1.33)相比显著降低,添加Z-VAD-FMK显著提高了线粒体膜电位(1.19);(2)冷冻后卵母细胞的早期凋亡率(57.65%)与新鲜卵母细胞(8.37%)相比显著升高,存活率(61.45%)、孤雌激活卵裂率(13.18%)和囊胚率(3.10%)与新鲜卵母细胞(98.97%、89.41%和41.40%)相比显著下降,冻后孵育液中添加Z-VAD-FMK处理能显著降低其早期凋亡率(32.82%),并显著提高其存活、孤雌激活卵裂和囊胚的发育能力(73.21%、39.83%和10.79%);(3)冷冻后死亡受体途径和线粒体途径中促凋亡基因表达显著增加,抗凋亡基因表达显著降低,加入Z-VAD-FMK后促凋亡基因表达显著下降,抗凋亡基因表达显著增加。总之,在冻后孵育液中添加凋亡抑制剂Z-VAD-FMK能提高卵母细胞膜电位水平,降低细胞凋亡和相关基因表达,从而达到提高冻后猪卯母细胞体外发育能力的目的。     

白藜芦醇处理对猪孤雌激活囊胚抗冻能力的影响

为研究白藜芦醇(Resveratrol,RES)处理对猪孤雌激活囊胚抗冻能力的影响,利用2μmol/L RES在卵母细胞体外成熟、玻璃化冷冻与解冻和随后的胚胎培养过程中进行全程添加,观察其对猪孤雌激活囊胚冻后线粒体膜电位、TUNEL凋亡水平、多种Caspase活性、凋亡相关功能基因mRNA表达水平和体外发育能力的影响。结果显示:体外成熟和胚胎培养过程中添加RES能显著提高卵母细胞孤雌激活后的卵裂率和囊胚率(95.18%vs.85.79%,51.85%vs.41.46%,P0.05)。RES全程添加后其孤雌激活囊胚的抗冻能力显著提高,表现为囊胚腔恢复率和囊胚细胞数增高(35.09%vs.31.25%,37.95 vs.31.8l,P0.05),线粒体膜电位升高(0.92 vs.0.46,P0.05),囊胚细胞凋亡比例下降(8.24%vs.10.13%,P0.05),Pan-caspase、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的荧光强度值和Caspase-8,Caspase-9,TNF-α基因表达水平下降,Bcl-2和SOD-1表达水平升高(P0.05)。与冷冻囊胚相比,新鲜囊胚的线粒体膜电位水平、Bcl-2和SOD-1基因表达量更高;细胞凋亡比例、Pan~caspase、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3荧光强度值以及Caspase-8、Caspase-9、TNF-α基因表达水平则更低(P0.05)。因此,RES全程添加可通过改善冻后猪孤雌激活囊胚的线粒体功能,降低囊胚细胞凋亡水平,从而提高其抗冻能力。     

MitoQ对犬骨髓间充质干细胞线粒体功能及抗氧化能力的影响

研究线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone(MitoQ)对犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的线粒体功能与抗氧化基因表达的作用,为进一步提高犬BMSCs的临床应用效率提供理论依据。以犬BMSCs为材料,添加MitoQ预处理48 h,采用荧光定量PCR、荧光探针等方法评估BMSCs线粒体功能以及抗氧化基因的表达水平。结果显示,随着传代次数的增加,BMSCs线粒体融合明显增强,线粒体分裂明显减弱;线粒体膜电位与ATP含量均显著下降;抗氧化基因的表达显著下调。添加MitoQ预处理后,BMSCs线粒体融合基因Mfn2的表达略有上调,且线粒体分裂基因Drp1和线粒体生物合成相关基因PGC-1α的表达显著上调;线粒体膜电位与ATP生成显著增加;抗氧化基因SOD1、SOD2、CAT和GSH-Px的表达显著上调。结果表明,MitoQ可改善犬BMSCs线粒体功能,增强BMSCs抗氧化能力。     

品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响

[目的]明确品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响及其互作关系,为解决鸡精液冷冻保存不稳定的困境及加快新品种培育进程提供技术支持.[方法]采集黑丝羽乌骨鸡(简称乌鸡)和黄土二鸡(简称黄鸡)2个品种的公鸡精液,分别添加0、25、50和100μmol/L白藜芦醇,以二甲基乙酰胺(DMA)为抗冻剂制备细管冻精,在液氮面上1 cm处(高冷冻速率)或3 cm处(低冷冻速率)冷冻,通过冻后精子活力、脂质过氧化水平和线粒体膜电位水平评价鸡精液冻后品质.[结果]黄鸡精液冻后精子活力显著高于乌鸡(P<0.05,下同),但线粒体膜电位水平差异不显著(P>0.05,下同);高冷冻速率下的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于低冷冻速率,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平差异不显著;不同白藜芦醇添加量下,鸡精液冻后精子活力和脂质过氧化水平差异不显著,但线粒体膜电位水平差异显著.双因素组合时,品种×冷冻速率、品种×白藜芦醇和冷冻速率×白藜芦醇间均存在交互作用,其中,乌鸡×高冷冻速率组合的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于黄鸡×高冷冻速率组合,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平无显著差异.三因素组合时,鸡精液冻后脂质过氧化水平最低的组合是乌鸡×低冷冻速率×50μmol/L白藜芦醇,线粒体膜电位水平最高的组合是乌鸡×低冷冻速率×0μmol/L白藜芦醇.[结论]鸡精液冷冻保存时其品种、冷冻速率和白藜芦醇间存在二元互作效应或三元互作效应.因此,只有充分考虑鸡品种、冷冻速率和抗氧化剂间的互作效应,才能切实提高鸡冷冻精液的品质.     

N-乙酰半胱氨酸对玻璃化冻存小鼠GV期卵母细胞成熟和后续胚胎发育能力影响

冷冻保存后的GV期卵母细胞内大量积累ROS,影响胚胎发育。NAC作为一种抗氧化剂,可缓解氧应激造成的损伤。但NAC对冷冻GV期卵母细胞是否存在维持作用尚待研究。为探究NAC在冷冻、解冻后小鼠GV期卵母细胞发育中作用,检测冷冻保存后小鼠GV期卵母细胞在添加不同浓度NAC成熟培养液后成熟情况,观察其卵裂率与囊胚率、线粒体分布、ROS水平和受精后胚胎发育等。结果表明,添加1.5 mmol·L~(-1)NAC,冷冻保存后,小鼠GV期卵母细胞,线粒体排布均匀,卵母细胞比例显著提高,ROS水平降低。NAC可改善小鼠GV期卵母细胞经冷冻保存后复苏和体外成熟水平,提高其发育能力。     

小檗碱对玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量及胚胎发育的影响

【目的】探讨小檗碱对玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量及体外受精胚胎发育效果的影响。【方法】体外成熟液和胚胎培养液中添加小檗碱为Ber组,未添加小檗碱为对照组,MII期卵母细胞进行冷冻液处理为冷冻液处理对照组和冷冻液处理+Ber组;采用开放式拉长塑料细管法对卵母细胞玻璃化冷冻与解冻,试验各组别为GV期冷冻组、GV期冷冻+Ber组、MII期冷冻组、MII期冷冻+Ber组。观察卵母细胞体外成熟效果及其体外受精胚胎体外发育效果;观察卵母细胞冷冻化学损伤存活率及其体外受精胚胎发育率;采用尼罗红染色法观察卵母细胞中脂滴含量,观察卵母细胞玻璃化冷冻解冻后存活率及其体外受精胚胎发育率;利用差异染色法和TUNEL法计数囊胚内细胞团和细胞总数以及细胞凋亡数。【结果】Ber组能够极显著促进猪卵母细胞体外成熟,显著降低猪卵母细胞玻璃化冷冻的化学损伤,促进猪卵母细胞冷冻解冻后的细胞存活率,而猪MII期卵母细胞相对于GV期卵母细胞具有很好的冷冻解冻后的存活率;小檗碱能降低猪卵母细胞玻璃化冷冻后的脂滴含量,MⅡ期卵母细胞冷冻前后脂滴含量均低于GV期冷冻前后;小檗碱能够促进猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后的体外成熟,且有利于猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后早期胚胎的发育,相对于冷冻MII期卵母细胞,冷冻GV期卵母细胞具有更好的体外发育效果;小檗碱能够提高猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后体外发育囊胚内细胞团数与细胞总数,降低其细胞凋亡,有利于提高猪卵母细胞玻璃化冷冻解冻后体外受精胚胎发育至囊胚的质量。而GV期相对MII期则冷冻效果更佳。【结论】小檗碱能够通过降低玻璃化冷冻猪卵母细胞脂滴含量,从而提高其冷冻解冻后体外成熟率和体外受精胚胎发育质量;GV期玻璃化冷冻卵母细胞相对于MII期,在冷冻解冻后其体外受精胚胎发育质量有更好提高。相关机制还有待今后进一步研究。     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素(proanthocyanidin, PC)对山羊精子的冷冻保护作用,以20%卵黄为对照(EY组),分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60μg·mL~(-1)的PC(分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组),冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明,当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40μg·mL~(-1)(SL3组)时,解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%,显著高于其他PC添加组和EY组(P0.05)。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶(SOD)(224.87 U·mL~(-1))和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量(129.6 U·L~(-1))最高,总caspase凋亡率(54.33%)和TUNEL凋亡率(41.36%)最低,与EY和SL0组差异显著(P0.05)。当PC的添加浓度提高至60μg·mL~(-1)(SL4组)时,解冻后精子质量显著下降,表现为对精子毒性作用。综上,在山羊精液冷冻中,大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40μg·mL~(-1)可降低精子氧化损伤和细胞凋亡,提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果,提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景。     

绵羊体外受精囊胚玻璃化冷冻保存的研究

以常规的慢速冷冻法为对照,研究了玻璃化冷冻法保存绵羊体外受精囊胚的效果.对于绵羊体外受精囊胚,两种冷冻方法间的囊胚存活率没有明显差异,但玻璃化冷冻组的囊胚孵化率显著高于慢速冷冻法组(分别为76.8%和41.0%,P＜0.05).将冷冻解冻后的绵羊囊胚移植后,玻璃化冷冻组的怀孕率和产羔率明显高于慢速冷冻法的.同时比较了绵羊体外受精囊胚细胞取样后,经不同时间培养后的玻璃化冷冻保存效果.囊胚取样后培养2 h或5 h,胚胎冷冻解冻后的存活率和孵化囊胚率显著高于对照组(分别为75.0%、50.0%,78.8%、69.7%和41.2%、26.5%,P＜0.05).培养10h后,胚胎冷冻解冻后的存活率和孵化囊胚率有所降低.结果表明,应用玻璃化冷冻法可以较好的冷冻保存绵羊体外受精囊胚及切割取样后的囊胚,绵羊体外受精囊胚切割取样后,经过2～5h时的恢复培养可以提高其抗冻能力.     

绵羊成熟卵母细胞GMP玻璃化冷冻影响发育因素的研究

利用GMP法(毛细玻璃管法)冷冻成熟的绵羊卵母细胞,旨在探讨冷冻和解冻处理方法对绵羊成熟卵母细胞发育潜力的影响.对比在玻璃化冷冻液中添加0.3 mol/L蔗糖;卵母细胞冷冻前用7.5 μg/ml CB预处理;卵母细胞去掉颗粒细胞冷冻;以及四步法解冻和三步法解冻对卵母细胞形态完整率、孤雌激活胚发育率的影响.结果显示:玻璃化冷冻液中添加蔗糖孤雌激活卵裂率达到56.70%,极显著高于对照25.40%(P<0.01),桑葚胚率(16.49%)比对照(4.76%)有明显提高(P<0.05);冷冻前用CB进行预处理,解冻后形态正常率为78.78%,明显高于对照61.11%(P<0.05),孤雌激活卵裂率(39.39%)也高于对照组(21.11%);去掉颗粒细胞裸卵与保留颗粒细胞成熟卵母细胞解冻后形态正常率、孤雌激活卵裂率及桑葚胚率、囊胚率之间无显著性差异(P>0.05);四步法解冻和三步法解冻后卵母细胞形态恢复及孤雌激活后的发育率,两组之间差异不显著(P>0.05).在玻璃化冷冻液中添加蔗糖及卵母细胞冷冻前用CB预处理有利于卵母细胞冷冻解冻后形态恢复及孤雌激活后的胚胎发育.     

奶牛体外生产胚胎玻璃化冷冻技术研究

利用乙二醇(EG)及二甲基亚砜(DMSO)作为主要冷冻保护剂,对牛体外生产囊胚进行了冷冻保存试验,探讨了不同冷冻剂组合、平衡时间、蔗糖浓度、冷冻方法对牛胚玻璃化冷冻的影响,结果显示:牛胚置于30%DMSO、15%DMSO 15%EG和30%EG等3种不同冷冻保护剂,其解冻后发育率分别为75.3%、81.8%及71.4%(P＞0.05),差异不显著;含有10%EG与10%DMSO冷冻保护剂平衡30 s、45 s及60 s,其解冻后发育率分别为54.5%、75%和44.4%,45 s显著较30 s及60 s者高(P＜0.05);以15%DMSO 15%EG冷冻保护剂中添加0.25、0.5及1.0 M的蔗糖浓度,其解冻后牛胚后续发育率分别为50%、75.0%及33.3%,蔗糖添加浓度为0.5 M者效果显著较佳(P＜0.05);利用GMP、MDS及Cryoloop3种不同冷冻方式进行冷冻,其解冻后发育率分别为66.7%、71.1%及80.0%,三者间并无显著差异(P＞0.05).     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。     

不同冷冻保护剂对小鼠原核期胚胎玻璃化冷冻的影响

研究不同冷冻保护剂对小鼠原核期胚胎玻璃化冷冻的影响。结果表明,15%乙二醇(EG)+15%1,2-丙二醇(PROH)+蔗糖与15%EG+15%二甲基亚砜(DMSO)+蔗糖相比,解冻后成活率分别为84.83%和95.83%,无显著差异(P0.05);卵裂率(60%、70%)显著低于对照组(92.5%)(P0.05),冷冻组间差异不显著(P0.05);PROH组囊胚率(33.84%)显著低于DMSO组与对照组(56.35%、76.90%)(P0.05);DMSO组囊胚细胞数与PROH、对照组差异显著(P0.05)。试验证明,在乙二醇中添加PROH的冷冻效果不及添加DMSO组,玻璃化冷冻影响原核期胚胎的后期发育。     

冷冻保护剂种类和胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎移植受胎率的影响

对冷冻保护剂种类和胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎受胎率的影响进行了研究。结果表明:分别以乙二醇、甘油为冷冻保护剂冷冻保存绵羊囊胚,解冻后移植受胎率差异不显著,表明冷冻保护剂种类对绵羊冷冻胚胎移植受胎率未有明显影响;以乙二醇为冷冻保护剂,冷冻绵羊不同发育阶段的胚胎,囊胚、扩张囊胚解冻后移植受胎率均明显高于桑椹胚的,囊胚和扩张囊胚之间差异不显著,表明胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎移植受胎率有显著影响。     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响#br#

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL^-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L^-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL^-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL^-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景     

谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响

研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。     

谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响

研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。     

小鼠桑椹胚OPS管内解冻和直接移植

本实验对昆明白系小鼠的桑椹胚实施OPS法玻璃化冷冻,研究不同管内解冻程序对胚胎体内外发育的影响,旨在为小家畜胚胎冷冻、解冻和移植提供技术参数。采用OPS冷冻两步法(10%(体积分数)EG 10%(体积分数)DMSO溶液中平衡30 s,移入EDFS30平衡25 s)保存小鼠桑椹胚。一步法解冻是将OPS直接插到盛有0.5mol/L蔗糖的离心管中分别平衡1、2、3、4、5和6 min,解冻后经体外培养结果表明,平衡2~4 min组囊胚发育率(93.58%~97.22%)与对照组(100%)无显著差异(P>0 05);实施两步法解冻时将OPS先后插入0.5和0.25mol/L蔗糖中,体外培养结果显示,先后平衡3和2 min组囊胚发育率(100%)最佳,同对照组无显著差异(P>0.05)。将以上方法管内解冻最佳组的胚胎用OPS管作移植导管,直接移植到受体子宫角中,其妊娠产仔率(38.57%)和管外解冻组(42.86%)及新鲜对照组(51.19%)均无显著性差异(P>0.05)。证明OPS玻璃化冷冻的小鼠桑椹胚可以进行管内解冻和直接移植,为小家畜胚胎移植提供了模型。     

添加V_(B_(12))、V_E、V_C对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05)和精子顶体完整率(P0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P0.01)和顶体完整率(P0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。     

不同冷冻方法对牛体外胚胎ATP含量与ROS水平的影响

【目的】探讨冷冻保存对牛体外生产胚胎能量代谢、有氧代谢造成的影响。【方法】采用常规法或玻璃化法（open pulled straw,OPS法）冷冻保存牛体外受精（in vitro fertilization,IVF）囊胚和体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）囊胚,利用ATP Bioluminescence Assay Kit HS II 和 GENMED ROS Assay Kit检测了冷冻-解冻后囊胚ATP含量和ROS水平。【结果】（1）IVF和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后存活率（（93.25±5.17）%和（77.56±3.52）%）均显著高于常规冷冻法（（81.25±4.98）%和（49.41±2.24）%）（P＜0.05）;（2）IVF囊胚和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后ATP含量（（0.63±0.05）和（0.33±0.02）pmol）均显著高于常规冷冻法（（0.45±0.03）和（0.22±0.01）pmol）（P＜0.05）;但是均显著低于相应的IVF或SCNT新鲜囊胚（（0.76±0.04）和（0.40±0.02）pmol）（P＜0.05）;（3）玻璃化冷冻IVF囊胚、SCNT囊胚ROS水平（（74.34±4.24）和（43.21±3.35）cps）高于新鲜IVF囊胚（（48.52±2.65）cps）、SCNT囊胚（（27.36±2.23）cps）（P＜0.05）,常规冷冻组则与此相反（（35.61±4.32）和（16.56±2.52）cps）（P＜0.05）。【结论】玻璃化冷冻较适用于牛IVF、SCNT囊胚冷冻保存;玻璃化冷冻和常规冷冻均显著影响牛IVF囊胚、SCNT囊胚中ATP含量和ROS水平。