家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

自Whittingham(1977)首次成功的报道冷冻-解冻的小鼠卵母细胞活仔以来,国内外诸多学者对家畜及人的卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前,已有小鼠、家兔、牛等动物以及人的卵母细胞冷冻成功,并得到了后代。在国内,山羊、绵羊、猪等家畜的卵母细胞冷冻保存也已有报道。随着胚胎工程技术的不断发展,卵母细胞的冷冻保存越来越受到重视,这将推动卵母细胞的冷冻保存取得更大进展。1抗冻保护剂在卵母细胞和胚胎的冷冻保存时,需使用抗冻保护剂,它可以改变细胞在冷冻过程中的物理化学环境,减轻或避免冷冻、解冻过程中的冷冻损伤。抗冻保护剂主要为一…     

牛卵母细胞冷冻保存的研究进展

1977年,Whittingham 首次用-196℃保存的小鼠成熟卵母细胞培育出后代。目前,小鼠成熟卵母细胞的冷冻保存方法已趋于完善。1986年,Chen 第一次报道冷冻人成熟卵母细胞成功,获双胎妊娠。家畜的卵母细胞冷冻保存研究起步较晚,但随着卵母细胞体外成熟、体外受精、细胞核移植、基因转移等,以卵母细胞为材料的生物技术的迅猛发展,人们对超低温冷冻保存家畜卵母细胞的兴趣大增,渴望象建立“精子库”和“胚胎库”那样,建立起“卵子库”,以充分利用屠宰母畜尤其是     

卵母细胞冷冻保存研究进展

1977年Whittingham首次成功报道冷冻一解冻小鼠MⅡ期卵母细胞产仔,自此许多学者对多种动物及人卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前小鼠、家兔、牛、马、山羊、绵羊及猪等动物卵母细胞的冷冻保存均有报道,而世界上已经有100多个冷冻卵母细胞的婴儿出生。卵母细胞的冷冻保存可为体外受精、核移植、转基因动物的研制提供更方便的材料来源;[第一段]     

小鼠卵母细胞冷冻保存技术研究进展

卵母细胞的冷冻保存是动物繁殖技术领域生殖细胞冷冻的研究热点。在此介绍了小鼠卵母细胞冷冻保存的研究进展，阐述了小鼠卵母细胞冷冻保存的原理，探讨了冷冻保护剂的作用机理。最后，对小鼠卵母细胞的冷冻保存方法及其原理进行了概括。     

胚胎冷冻保存研究进展(综述)

自从 Polgy、Wmith 和 Porkes 首次发现冷冻保存精子的方法后,就引起了繁殖工作者冷冻保存哺乳动物卵子和胚胎的兴趣。1972年 Whittmghan 首次报道鼠胚胎冷冻成功,在-196℃保存小鼠胚胎移入受体有29%产仔。不久,Wilmut 也报道了鼠胚胎冷冻成功。1973年 Wilnnut 和 Rosuson 第一次报道冷冻牛胚胎得到一头犊牛。从此,冷冻保存哺乳动物胚胎的研究才不断开展。开始,对实验室动物研究较多,后来转到了家畜方面,迄今已用冷冻保     

哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻研究进展

哺乳动物GV期卵母细胞的玻璃化冷冻保存技术为家畜胚胎生物技术提供了卵子库,有利于濒危动物和珍稀野生动物遗传资源的长期保存,是维持物种多样性乃至人类生殖力保存的重要途径。至今,玻璃化冷冻技术已成功用于多种哺乳动物GV期卵母细胞的冷冻保存。与此同时,玻璃化冷冻会对GV期卵母细胞产生的细胞学损伤及表观遗传的影响,成为制约其应用潜力的关键瓶颈。本文综述了近年来哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展,并对冷冻损伤及对策进行了系统分析,为哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻的后续研究提供参考。     

超低温冷冻引发卵母细胞氧化应激及抗氧化剂的应用

卵母细胞超低温冷冻保存在人工辅助生殖和畜牧业上已有广泛应用。然而，超低温冷冻保存造成卵母细胞活性氧大量累积，引发一系列氧化应激，最终导致卵母细胞体内外发育潜力下降。卵母细胞内源的抗氧化酶无法彻底对抗氧化应激，因此在冷冻过程中常添加外源抗氧化剂来减少氧化损伤。文章着重分析了冷冻诱导卵母细胞产生的各种氧化应激、抗氧化剂对抗氧化损伤的效果及其作用机制，为提高卵母细胞冷冻保存效率提供参考。     

猪卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

卵母细胞冷冻保存对于畜牧业生产和人类辅助生殖具有重要意义。随着玻璃化冷冻技术日趋成熟，其现已广泛应用于牛、羊等大家畜的卵母细胞冷冻保存。然而，猪卵母细胞的冷冻保存至今仍处于试验研究阶段，由于猪卵母细胞脂质含量高，对低温敏感，在玻璃化冷冻保存过程中极易受到冷冻保护剂毒性以及渗透胁迫、氧化应激等损伤，造成细胞骨架以及亚细胞器受损，最终导致细胞发育能力降低甚至死亡。近年来，人们在提高猪卵母细胞冷冻保存效率的研究中取得了突破性进展。本文简要介绍了卵母细胞冷冻保存的常见方法及作用机理，总结了猪卵母细胞在玻璃化冷冻过程中造成的细胞损伤类型及影响，概述了人们针对不同类型的冷冻损伤提出的解决方法和取得的成就，并对其应用前景进行展望，为今后提高猪卵母细胞的玻璃化冷冻效率提供新思路。     

哺乳动物卵母细胞低温存活的影响因素

哺乳动物卵母细胞的有效冷冻保存,会大大提高众多繁殖技术的实用性。那些最初用于哺乳动物卵裂期胚胎的平衡和非平衡冷冻保存方法,已经用于卵母细胞,但受精率和发育率显著低于没有冷冻的卵母细胞。在家畜上还未曾有过从冷冻卵母细胞发育到幼畜的研究报导。细胞骨架元素、减数分裂纺锤体和其它卵皮质组分,对遇冷和防冻剂的敏感性,不利于卵母细胞冷冻保存。降温过程中其它物理因素也会影响卵母细胞的存活。那些影响卵母细胞渗透反应和冷冻生物学反应的生物物理参数的估计将日益重要,有助于创造新的冷冻方法。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存概况及其常用方法

哺乳动物卵母细胞和胚胎的超低温冷冻保存技术,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等生物技术不可缺少的部[1].Rall和Fahy于1985年首次报道了用玻璃化方法来冷冻保存小鼠胚胎,这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤,提高了冷冻效率[2].     

卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究进展

随着许多哺乳动物卵母细胞冷冻的成功,哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻保存技术取得了不断发展。作者列举比较了开口式拉长细管法、电镜铜网法、固体表面法和尼龙环法等多种卵母细胞的玻璃化冷冻保存方法,并对影响卵母细胞玻璃化冷冻保存的细胞骨架等因素进行了阐述。讨论后提出自己的建议。     

冷冻保存对猪卵母细胞超微结构及发育潜力的影响

随着辅助生殖技术的发展,配子与胚胎的超低温冷冻保存已成为动物种质资源保存的新热点,有可能在相当程度上替代活畜保种。但由于猪卵母细胞中含有大量脂滴,对低温敏感,耐受性差,给猪卵母细胞的冷冻保存带来很大的困难。目前还没有关于猪卵母细胞冷冻-解冻后经体外受精,然后移植产仔的成功报道,其原因可能是冷冻破坏了细胞骨架的结构。因此本文主要分析了冷冻保存对猪卵母细胞细胞骨架及其冻融后发育潜力的影响。     

羊卵母细胞冷冻保存研究进展

近年来,绵羊、山羊胚胎工程技术的快速发展致使对卵母细胞的需求量越来越大。此外,作为家畜种质资源保护体系的组成部分,卵母细胞也是保存优秀雌性家畜遗传资源的重要方式之一。然而,作为胚胎生物技术的重要环节,由于其自身特殊的结构功能特点,卵母细胞对低温和冷冻极其敏感,其冷冻保存研究水平远低于胚胎。因此,如何提高冷冻保存卵母细胞质量是低温生物学和胚胎生物技术研究领域的热点和难点。针对目前绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存的最新研究进展和存在问题进行综述,同时针对如何进一步提高绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存质量提出建议,以期为之后的研究工作提供理论指导。     

影响猪卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的因素

对卵母细胞进行冷冻保存,可以使卵源不再受到时间和空间限制,并能为体外受精、核移植和转基因等胚胎工程技术的研究提供充足的原材料.猪卵母细胞中富含脂滴,且对低温十分敏感,因此,猪卵母细胞冷冻保存的研究进展相对较慢.玻璃化冷冻是有效的卵母细胞冷冻方法之一.综述了卵母细胞发育阶段、冷冻栽体和冷冻保护剂等因素对猪卵母细胞玻璃化冷冻保存效果的影响.     

玻璃化冷冻对哺乳动物卵母细胞Ca2+的影响机制

卵母细胞冷冻保存是胚胎生物技术(如体外受精、胞浆内单精子注射、体细胞克隆)的重要组成部分,对优良种畜和濒危动物种质资源保存,加速家畜品种改良进程都具有重要意义。与常规冷冻法相比,玻璃化冷冻具有操作简单、降温速率快、耗时短、冷冻效率高等优点,被越来越广泛地应用于家畜卵母细胞的冷冻保存。然而,与新鲜卵母细胞相比,玻璃化冷冻卵母细胞的受精率及发育能力仍不理想,这严重影响了玻璃化冷冻卵母细胞的应用潜力。玻璃化冷冻会引起卵母细胞Ca²⁺浓度升高及钙振荡模式异常,导致其透明带硬化、受精信号紊乱等问题。综合前人研究进展,作者分析了玻璃化冷冻对胞内Ca²⁺浓度、钙振荡模式的影响和作用机制,并指出胞外Ca²⁺内流和胞内钙库Ca²⁺释放是导致冷冻卵母细胞胞内Ca²⁺浓度升高的主要原因,1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)Ⅰ型受体分布异常和线粒体损伤可能是导致冷冻卵母细胞钙振荡模式异常的重要原因,以期为正向调控冷冻卵母细胞Ca²⁺浓度及钙振荡模式提供技术参考,从而进一步提高玻璃化冷冻卵母细胞的受精和后续的发育能力。     

影响牛卵母细胞冷冻效果的因素

卵母细胞冷冻保存对于遗传改良和种质资源长期保存具有重要作用。然而，牛卵母细胞对冷冻很敏感，虽然过去几年在冷冻保存中取得了一定进展，但牛卵母细胞冷冻技术还不完善，本文主要对影响牛卵母细胞冷冻效果的因素进行了综述。     

玻璃化冷冻对哺乳动物卵母细胞Ca~(2+)的影响机制

卵母细胞冷冻保存是胚胎生物技术(如体外受精、胞浆内单精子注射、体细胞克隆)的重要组成部分,对优良种畜和濒危动物种质资源保存,加速家畜品种改良进程都具有重要意义。与常规冷冻法相比,玻璃化冷冻具有操作简单、降温速率快、耗时短、冷冻效率高等优点,被越来越广泛地应用于家畜卵母细胞的冷冻保存。然而,与新鲜卵母细胞相比,玻璃化冷冻卵母细胞的受精率及发育能力仍不理想,这严重影响了玻璃化冷冻卵母细胞的应用潜力。玻璃化冷冻会引起卵母细胞Ca~(2+)浓度升高及钙振荡模式异常,导致其透明带硬化、受精信号紊乱等问题。综合前人研究进展,作者分析了玻璃化冷冻对胞内Ca~(2+)浓度、钙振荡模式的影响和作用机制,并指出胞外Ca~(2+)内流和胞内钙库Ca~(2+)释放是导致冷冻卵母细胞胞内Ca~(2+)浓度升高的主要原因,1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)Ⅰ型受体分布异常和线粒体损伤可能是导致冷冻卵母细胞钙振荡模式异常的重要原因,以期为正向调控冷冻卵母细胞Ca~(2+)浓度及钙振荡模式提供技术参考,从而进一步提高玻璃化冷冻卵母细胞的受精和后续的发育能力。     

小鼠卵母细胞冷冻技术研究

采用PBS作为冷冻基础液,分别用甘油和二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护液,在程序化冷冻保存和玻璃化冷冻保存条件下,研究小鼠生发泡期(GV期)卵母细胞的抗冻能力。结果表明,2种冷冻方法对小鼠GV期卵母细胞解冻后形态正常率和存活率无显著影响(P>0.05)。冷冻保护剂种类对小鼠GV期卵母细胞解冻后形态正常率无显著影响(P>0.05);但对存活率有显著影响,玻璃化冷冻采用二甲基亚砜作为冷冻保护液效果极显著优于甘油(P<0.01)。以冷冻效果较好的二甲基亚砜作为冷冻保护液,采用玻璃化冷冻不同发育阶段(GV期和MⅡ期)的小鼠卵母细胞,解冻后形态正常率无显著差异(P>0.05),但存活率GV期要显著优于MⅡ期卵母细胞(P<0.05)。     

昆明小鼠成熟卵母细胞冷冻保存方案的优化与改进

5-6周龄雌性昆明小鼠的成熟卵母细胞,在不同前处理液(10% EG或10% EG 10% DMSO)中平衡5 min,然后在冷冻溶液(EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40)中平衡30 s后进行开放式拉长麦管法(OPS,open pulled straw)和固体表面冷冻法(SSV,solid-surface vitrification)玻璃化冷冻保存研究.试验结果表明:玻璃化冷冻中,多种抗冻保护剂组合使用的效果优于使用单一抗冻保护剂,而且EDFS冷冻液冷冻保存小鼠卵母细胞的效果好于EFS,尤其是EDFS30;SSV法冷冻保存小鼠成熟卵母细胞效果优于OPS法.     

猪卵母细胞玻璃化冷冻保存技术的研究进展

卵母细胞冷冻保存技术在动物种质资源保存、濒危动物保护等方面具有独特的作用,猪卵母细胞的冷冻保存仍是一项世界性难题,尚处于摸索阶段。现就猪卵母细胞冷冻保存的现状、冷冻原理与方法及冷冻损伤等问题进行综述。