甘蓝型油菜籽粒RNA提取方法的探讨

用CTAB法、SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜花后40 d的籽粒RNA.用电泳法和A260/A280与A260/A280的比值比较提取RNA的质量.结果发现:用SDS法、上海华瞬植物叶RNA抽提试剂盒都没有成功提取RNA,只有CTAB法成功地提取出了完整的甘蓝型油菜籽粒RNA.用CTAB法提取的总RNA的A260/A230与A260/A280的值分别为2.06和1.94,说明采用该方法提取的RNA污染小,纯度较高,获得的RNA产量也较高.通过逆转录实验和基因片段的克隆也证明获得的RNA质量比较高,可以直接满足一般的分子实验.     

‘鲁红一号’元宝枫叶片总RNA提取方法的比较研究

‘鲁红一号’元宝枫叶片中富含大量多糖、多酚物质,严重影响了总RNA提取的产率和质量。为了找出适宜‘鲁红一号’元宝枫叶片总RNA提取的方法,本试验运用试剂盒法、TRIZOL法和改良CTAB法提取其秋季叶片总RNA。结果表明,试剂盒法提取的叶片总RNA OD260/OD280、OD260/OD230均在1.8以上,但产率一般,有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230均在1.5左右,且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230均在2.0左右,且产率最高,电泳图较清晰。说明采用改良CTAB法提取的叶片总RNA质量和产率高,可以满足分子生物学进一步研究的需求,是‘鲁红一号’元宝枫叶片总RNA提取的适宜方法。     

改良CTAB法提取高质量香蕉叶片总RNA

以巴西香蕉叶片为试验材料,采用改良CTAB法提纯香蕉叶片总RNA.结果表明,改良CTAB法提取的香蕉叶片总RNA的28S、18SrDNA条带清晰、整齐,A260/A280值大于2.0,无需任何纯化处理即可用作香蕉MuACTIN基因的扩增模板,经RT-PCR扩增获得了带型清晰的目的条带,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合RT-PCR的要求;而CTAB法提取的总RNA产量较低,且纯度不高.说明改良CTAB法能有效从富含多酚和多糖的香蕉叶片中提取高质量的总RNA.     

美洲南瓜种皮RNA提取方法的比较

为探索提取高质量RNA的方法,采用改良CTAB法、SDS法、异硫酸氰胍法和Trizol法从美洲南瓜种皮中提取总RNA.结果表明:改良CTAB法提取的RNA中28 S rRNA和18 S rRNA 2条带清晰,且28 S rRNA在亮度约为18 S rRNA的2倍,两条带之间无弥散现象;OD260/OD280值为1.996 5,OD260/OD230为2.235 7,RNA产率为161 μg/g.异硫酸氰胍法提取的总RNA纯度较高,但产量较低;SDS法和Trizol法提取的总RNA产量较低,且纯度不高.改良的CTAB法从种皮中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,是从富含次生代谢物质的种皮中提取高质量总RNA的有效方法.     

小麦总RNA的小量快速提取

以小麦幼苗的叶、茎和根组织为材料,采用CTAB法和尿素法分别提取其总RNA。结果表明,CTAB法提取的总RNA经电泳检测,28S rRNA和18S rRNA带型完整;A260/A280的比值接近2,纯度较高;将提取的总RNA反转录合成cDNA,可用于RT-PCR分析。尿素法提取叶和茎组织的总RNA质量较好,但提取根组织的效果较差。说明CTAB法较适合小麦幼苗各组织总RNA的提取。同时,两种方法提取过程中均不使用液氮,可节约试验成本。     

山药叶片总RNA提取方法的比较

[目的]提取高质量的山药叶片总RNA。[方法]以山药叶片为材料,采用异硫氰酸胍法、改良CTAB法提取山药叶片总RNA并进行比较分析,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度。[结果]改良CTAB法提取的总RNA的28S、18SrRNA条带清晰、整齐,测得A260/A280为1.72.0。[结论]改良的CTAB法适合山药叶片总RNA提取。     

改良CTAB-LiCl法提取枣总RNA体系的建立

试验以枣树田间枝条的枝皮及组培苗为材料,应用改进的CTAB法进行了总RNA的提取。针对枣组织中富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用β-巯基乙醇和PVP去除酚类,KAc及无水乙醇去除多糖,LiCl沉淀过夜的方法提取得到的RNA,条带整齐、清晰,A260/A280介于1.8～2.0之间,A260/A230均大于2.0,证明得到的RNA纯度、完整性和产率均较高,蛋白、多糖及酚类等去除较彻底。结果表明,本试验建立的改良CTAB-LiCl法适于进行枣总RNA的提取。     

滇杨叶芽总RNA提取方法比较研究

 采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。     

三色堇花瓣总RNA 3种提取方法的比较

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测.结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高.3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260nm/D280nm在1.83 ～2.03之间.以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验.     

不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。     

菠萝果实不同部位总RNA提取方法比较

以不同发育时期和不同部位的菠萝果实为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA差异明显,其中改良SDS法的效果最佳,其提取的RNA质量较好,无DNA污染,OD260/OD280和OD260/OD230接近2.0,产量达到464.3μg/g.FW以上,该方法提取的RNA能满足RT-PCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究的需要。     

鸡脂肪组织总RNA提取方法的优化和RT-PCR检测

提取完整的RNA是基因表达分析中的基础,但由于脂肪组织含有大量的油脂,所以从脂肪组织中提取高质量的RNA有一定的困难。在本研究中,报道了经过优化TRIzol试剂操作程序成功地从肉鸡脂肪中分离出了完整、高质量、纯度好的总RNA。用该方法提取的RNA显示清晰的28S、18S和5S三条带,OD260/OD280均值为1.893,浓度均值为263μg/mL。保温试验与RT-PCR扩增鸡LPL和GAPDH基因的分析结果也证明了所提取的总RNA质量较高。     

杜仲树皮总RNA提取方法的比较

[目的]从杜仲树皮中获得高质量的总RNA。为开展杜仲后续mRNA分离、杜仲抗真菌蛋白基因克隆、及杜仲树皮cDNA文库构建等研究奠定基础。[方法]以杜仲树皮为材料,分别采用改良CTAB-LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法进行总RNA提取,用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,用紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率。[结果]改良CTAB-LiCl法和RNA-pure PlantKit法提取的杜仲树皮总RNA纯度和完整性较高,A260/A280值均在1.800~2.000,28和18 SrRNA条带清晰,RNA得率较高;而RNAiso Plus法提取的杜仲树皮总RNA的纯度和完整性较低,A260/A280值为1.652,28S和18S rRNA条带存在降解和弥散现象,RNA得率低。[结论]改良CTAB-LiCl法和RNApure Plant Kit法抽提获得的杜仲树皮总RNA质量较高,能满足后续RT-PCR和RACE等试验的要求,这为成功克隆杜仲相关基因奠定了基础。关键词杜仲树皮;RNA提取;方法;比较     

适用于转录组测序的大豆根总RNA的提取方法研究

[目的]获得高质量、高产量并能满足转录组测序要求的大豆根总RNA。[方法]比较分析了Trizol法、CTAB-Li Cl法和试剂盒法的提取效果。[结果]3种方法均能从大豆根中提取出总RNA。但与Trizol法、CTAB法相比,试剂盒法提取的大豆根总RNA纯度高、完整性好,平均浓度达413.9 ng/μL,A260/A280≈2.14,A260/A230≈2.10,方法可重复性好。[结论]试剂盒法提取的RNA满足转录组测序的质量要求,可进行后续的转录组测序和其他分子生物学相关研究工作。     

一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法

多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素.我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA.这种方法可以克服产率低和质量低的问题.RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520 μg到800 μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9.提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析（serial analysis of gene expression,SAGE）库的构建.     

阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究

采用一步法、异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法和STE法3种方法,分别对阿魏侧耳总RNA的提取效果进行比较。结果表明,一步法难以提取RNA,异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在蛋白污染,这2种方法不适于富含多糖的阿魏侧耳总RNA的提取;STE法提取阿魏侧耳总RNA质量高、完整性好、成功率高,经琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S,18S,5S三条带,且28S的亮度是18S的2倍左右,OD260/OD280比值为18～20,可作为阿魏侧耳总RNA提取的首选方法。用此方法来提取阿魏侧耳液体发酵不同时期的RNA,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

改良Trizol法提取香蕉叶片总RNA

针对香蕉组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点,采用改良Trizol法,成功地从香蕉叶片中提取了总RNA.所提取的总RNA A260/A280和A260/A230值分别为1.91和2.10.电泳检测显示28 s、18 s条带完整清晰,以此RNA为模板进行RT-PCR,结果成功得到目标特异条带.试验结果表明:改良Trizol法具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点,对具有香蕉叶片类似成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鉴意义.     

半夏叶片总RNA的提取研究

[目的]为了获得高产高质的半夏RNA,为半夏分子生物学方面的研究打下基础。[方法]采用改进的CTAB法提取半夏叶片RNA。用紫外分光光度计测定所提RNA样品的OD260、OD280和OD230的值,用RNA浓度计算公式:RNA(μg/μl)=OD260×40×稀释倍数/1000,求出RNA浓度。[结果]紫外分光光度计的测定结果表明:OD260/OD280介于1.7～2.0之间。用改进的CTAB法提取的半夏叶片RNA质量较好,经变性胶电泳后,有较明显的3条带,分别是28S、18S和5S,28S、18S清晰可见,5S稍有弥散,但在亮度上28S与18S差别不大。[结论]此方法简便易行,成本较低,适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取。     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。