参考鸡IL—2的制备及理论特性研究

采用健康鸡脾脏Ｔ淋巴细胞体外诱生粗制参考鸡白细胞介素２（ＩＬ－２），并进行５０％和８０％饱和度硫酸铵盐析，以去除大部分致分裂原伴刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和小牛血清蛋白。继用Ｓｃｐｈａｄｅｘ Ｇ１００凝胶过滤柱色谱，可得到两个ＩＬ－２活性峰。第１活性峰组分分子量（ＭＷ）２６．９ＫＤ、等电点（ＰＩ）５．８５，为二聚体形式存在的高活性ＩＬ－２。第２活性峰组分ＭＷ１２．１ＫＤ，ＰＩ６．２５，为单体形式存在的     

鸡IL—1βcDNA片段的克隆及序列分析

本文以鸡外周血单个核细胞总ＲＮＡ为模板,据已报道的８种哺乳动物ＩＬ－１β核酸序列保守区设计合成１对引物,反转录合成ｃＤＮＡ链,经ＰＣＲ扩增,回收扩增后ＤＮＡ片段,用ｋｌｅｏｎｏｗ酶处理,与Ｐ＾ｕｃ１９／ＳｍａＩ连接构成重组质粒,转化宿主菌大肠杆菌ＪＭ１０９,筛选出含有插入片段的重组质粒,用ＰＣＲ及酶切分析鉴定,结果表明获得了带有鸡了ＩＬ－１β片段的ｃＤＮＡ克隆,再经序列分析测定,得知此片段长为２７     

雏鸡经马立克氏病疫苗免疫后IL－2及IL－2R的变化

雏鸡经马立克氏病（ＭＤ）三价疫苗免疫后，脾脏和胸腺Ｔ淋巴细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）诱导活性比未免疫健康对照雏鸡和火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗免疫雏鸡显著升高（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），白细胞介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）诱导表达显著增加（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０１Ｐ＜０．０１）；雏鸡经ＨＶＴ疫苗免疫后，脾脏Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２Ｒ诱导表达比未免疫健康对照雏鸡显著增加（Ｐ＜０．０５），脾脏和胸腺Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２诱导活性和胸腺丁淋巴细胞ＩＬ－２Ｒ诱导表达虽见升高和增加，但无统计学显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

鸡IL-1βcDNA片段的克隆及序列分析

本文以鸡外周血单个核细胞总 Ｒ Ｎ Ａ 为模板,据已报道的８ 种哺乳动物 Ｉ Ｌ—１β核酸序列保守区设计合成１ 对引物,反转录合成ｃ Ｄ Ｎ Ａ 链,经 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,回收扩增后的 Ｄ Ｎ Ａ 片段,用ｋｌｅｎｏｗ 酶处理,与 Ｐｕ ｃ１ ９ ／ Ｓｍ ａ Ｉ 连接构成重组质粒,转化宿主菌大肠杆菌 Ｊ Ｍ１ ０ ９ ,筛选出含有插入片段的重组质粒,用 Ｐ Ｃ Ｒ 及酶切分析鉴定,结果表明获得了带有鸡 Ｉ Ｌ－ １β片段的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆;再经序列分析测定,得知此片段长为２７０ｂｐ ,与人及小鼠 Ｉ Ｌ—１β基因核苷酸序列同源性分别为４５ ％ 和３０ ％ 。     

抗重组鸡IL-2单克隆抗体的制备与鉴定

以纯化的重组鸡IL-2蛋白(rchIL-2)为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,最终获得4株持续且稳定分泌抗鸡IL-2单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为:1A12、4A3、3E7和4E1.4株MAb的抗体类型均为IgG1,轻链为κ;MAb的ELISA效价分别为5.12×105、1.02×106、2.56×105和4.09×106.Western-blot分析表明,所获得的1A12、4A3、3E7和4E1 4株单克隆抗体与rchIL-2均有反应.MAb的制备成功为进一步开展chIL-2的功能研究奠定了基础.     

鸡白细胞介素2原核表达及多克隆抗体的制备

鸡白细胞介素2(IL-2)是一种在机体免疫调节中具有多种功能的细胞因子.本研究将萧山鸡白细胞介素2基因克隆入原核表达载体pET-28b,获得了重组表达载体pET-28b-IL-2,将此重组表达载体转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达萧山鸡IL-2.SDS-PAGE结果表明,萧山鸡IL-2在大肠杆菌中得到了表达,以此表达产物制成油乳剂苗免疫家兔,用ELISA和Western blotting检测兔血中的多克隆抗体,结果均为阳性.因而为进一步开展鸡IL-2的结构和功能研究奠定了基础.     

2种猕猴桃果实中多糖的理化特性及单糖组成研究

对2种猕猴桃果水溶性多糖PP-Ⅰ与PP-Ⅱ进行了理化性质、分子量测定、单糖组成的研究,结果表明,用凝胶法测定的分子量PP-Ⅰ为2.4×104,PP-Ⅱ为3.6×104.经纸层析分析比较,多糖PP-Ⅰ主要由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖等单糖组成,PP-Ⅱ主要是由半乳糖、葡萄糖、木糖、葡萄糖醛酸等单糖组成的杂多糖.     

鼠抗鸡膜联蛋白A2多克隆抗体的制备及应用

为制备鼠抗鸡膜联蛋白A2(ANXA2)多克隆抗体,检测ANXA2蛋白在鸡不同组织中的表达情况,先构建鸡ANXA2基因的重组原核表达载体pET-32a-ANXA2,将其转化入大肠埃希菌中进行诱导表达;采用切胶纯化和切胶免疫小鼠的方法制备鸡ANXA2多克隆抗体,然后利用该抗体检测ANXA2蛋白在4周龄SPF鸡不同组织中的表达情况.结果表明:鸡ANXA2重组蛋白His-ANXA2在IPTG终浓度为0.1 mmol·L-1、诱导时间为5 h的条件下表达量高.通过切胶纯化和切胶免疫方法获得了具有较高效价和特异性的鸡ANXA2蛋白鼠多克隆抗体.组织表达检测结果显示,ANXA2蛋白在鸡法氏囊、胸腺、十二指肠、肾脏、脑、腿肌和心脏中有表达,而在肝脏、脾脏、肺脏、腺胃和胰腺中未检测到表达.这一研究获得的鼠抗鸡ANXA2蛋白多克隆抗体为后续研究鸡相关病毒的复制和致病机制奠定了基础.     

复方白毛藤注射液对鸡IL - 2转录水平的影响

探讨了复方白毛藤注射液对鸡新城疫灭活疫苗的免疫促进作用机理。采用反转录聚合酶链反应技术，研究了复方白毛藤注射液对鸡接种新城疫病毒灭活疫苗后白细胞介素-2(intreleukin-2，IL-2)基因转录水平的影响，能促进鸡IL-2的基因转录水平，28日龄时转录水平最高，可持续至49日龄。     

鸡PLA2基因的克隆与原核表达及PLA2蛋白卵黄抗体的制备

【目的】克隆并原核表达鸡PLA2基因,小量制备鸡PLA2卵黄抗体,为大规模制备PLA2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总RNA,利用RT-PCR方法获得鸡PLA2基因,将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建表达载体pGEX-4T-1-PLA2,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-PLA2融合蛋白。将GST-PLA2融合蛋白免疫青年蛋鸡,每次0.3mg/只,共免疫4次,收集鸡蛋,提取卵黄抗体,采用West-ern Blotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡PLA2基因,构建了pGEX-4T-1-PLA2原核表达载体,并诱导表达了分子质量为44.59ku的GST-PLA2融合蛋白。GST-PLA2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体,经West-ern Blotting检查,制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡PLA2基因的表达系统,并成功的制备了抗鸡PLA2的卵黄抗体。     

鸡蛋气体贮藏方法的研究

本文采用氮气(N_2)、二氧化碳(CO_2)贮藏鸡蛋,主要研究了贮藏蛋中微生物生长情况。结果表明,单独使用这两种气体不能抑制蛋中微生物的繁殖。本试验筛选出了气藏条件下所使用的抑菌剂,即混合杀菌剂(1500 ppm 脱氢乙酸钠和1500 ppm 山梨酸钠混合溶液),并得到气体贮藏蛋的最佳条件:50%CO_2,50%N_2,贮藏温度15℃,相对湿度75%,鸡蛋贮藏前用1500 ppm 混合杀菌剂浸泡杀菌。贮藏6个月可以得到高于81.5%的好蛋率。     

树状高分子PAMAM的合成及其性能研究

本文以乙二胺为核,采用发散法通过Michael加成和酰胺化重复反应合成了一系列0.5～4.0 G代聚酰胺-胺型树状高分子PAMAM.通过红外光谱对它们的结构进行表征,用核磁共振技术证实了PAMAM 4.0 G,并测定了PAMAM水溶液紫外可见光谱和荧光光谱性质.结果显示,PAMAM树状高分子有很好的光学性能,在光学材料方面有广泛的应用前景.     

混合三烃基锡烷氧乙酸、脂肪二酸和氨基酸酯的合成及结构测定

本文合成了混合三烃基烷氧乙酸，脂肪二酸和氨基酸锡酯三个系列共24个化合物，并利用IR、MS和ANR对其结构进行了表征。     

金属蛋白盐的制备及其抗氧化性

本文介绍了以两种工业副产物——豆粕、乳清粉为原料,利用无花果酶、胰酶等5种酶分别水解后,制得了相应的钙蛋白盐,并以一定比例添加到猪油中,以生育酚作对照。结果表明,各种蛋白盐均具有一定的抗氧化性。其抗氧化性强弱与制备过程中所用酶的种类有一定关系,以无花果酶及胰酶制得的蛋白盐抗氧化性为好,而与两种原料的关系不大。利用胰酶、无花果酶在不同用量时所制蛋白盐,测得了酶用量不同对产物抗氧化性的影响,得出使产物具有艮好抗氧化性的最佳胰酶用量(按50g 豆粕或40g 乳清计)为1g,而无花果酶用量则为4g。使蛋白盐表现最佳抗氧化性的添加量为0.5mg/g,在高温下则为3mg/g。     

混合三烃基锡有机芳氧乙酸酯化合物的合成及结构表征

混合三烃基锡有机化合物是在锡原子上连结不同有机基因的一类有机锡化合物。由于混合三烃基锡具有独特的生物活性和结构特征，人们对它们研究日趋活跃；成为有机锡化学的一个生长点和有机锡研究的热点。它们被广泛用作防腐剂及防污涂料[1]，在医药上被作为新型抗癌药物而得到开发应用[2－3]，在农业上，许多有机锡化合物是高效杀螨剂[4]，为了开发出高效、广谱，具有多重活性的新型农药，本文在南开大学元素有机所国家重点室及有机锡化合物研究小组所作工作基础上[5]，合成了23个新的混合三烃基锡有机化合物，并对其本身结构特征和生物活性进行了研究。     

鸡新城疫卵黄荧光抗体的制备及其应用

本试验以鸡新城疫强毒株,采用大剂量连续强化免疫的方法免疫产卵母鸡,获得了含有高效价抗新城疫抗体的鸡卵。在室温条件下,用硫酸葡聚糖钠沉淀的方法,从免疫鸡卵黄液内提取出高效价的、比较纯净的IgG。以异硫氰酸荧光素标记提纯的卵黄IgG所制成的荧光抗体,对人工感染的鸡胚、鸡只和细胞培养物染色检查的结果表明,卵黄荧光抗体具有特异性强、制备方法简便、成本低廉、保存期长而不改变染色性能等优点。因此,本试验所研创的荧光抗体制备法具有广泛的应用和推广价值。     

黄牛白细胞介素-2基因的克隆与序列分析

为了克隆黄牛IL-2基因,采用RT-PCR技术,用ConA刺激12 h的黄牛颈部外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出黄牛IL-2基因,琼脂糖凝胶电泳技术显示扩增片段约为500 bp,分离纯化,将其克隆到PDM18-T载体,重组质粒经PCR鉴定、双酶切鉴定以及核苷酸测序。结果显示,克隆的黄牛IL-2基因大小468 bp,与GenBank中报道的水牛、牛、绵羊、猫、马、鸡、犬、人、山羊、鼠、猪IL-2基因比较,同源性分别为98.9%;98.5%;97.0%;82.4%;79.9%;5.3%;78.2%;79.7%;95.9%;65.2%;84.7%。     

青山羊肉品理化性状及其食用品质的研究

本研究采用二因子多水平有重复的试验方法,对我国著名的优良地方品种济宁青山羊按其不同的年龄（６月龄和１２月龄）和不同的解剖部位（背最长肌和股二头肌）肉品的理化性状和食用品质进行了系统深入的研究。结果表明：年龄因素对肉品的颜色、干物质、肌内脂肪含量、肌纤维密度、必需氨基酸和多数矿物元素的含量有显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜０．０１）的影响;;部位因素对肉品的保水性能、嫩度、肌内脂肪含量、必需氨基酸和多数矿物元素的含量有显著或极显著的影响。其中,比较而言以１２月龄青山羊肉品理化特性和食用品质性状优于６月龄青山羊的肉品,背最长肌优于股二头肌。研究科学而客观地揭示了青山羊肉品具有营养丰富、肉质优良和肉味鲜美的宝贵种质特性。     

湖北省中晚更新世沉积物母质性状及形态特征

研究了三个中晚更新世沉积物代表性剖面的土壤化学组成。粘土化学组成，粘土矿物组成，微形态特征。结果表明：①汉阳剖面为两个不同时期的沉积地层，埋藏在５ｍ以下的地层较其上层具有较低的ｂａ值，较高的高岭石含量；判明了薄圻剖面与汉阳剖面下部为同一个时期的沉积更新世沉积物的定向粘粒胶膜是古气候的产物，在近代成土过程中发生了老化；晚更新世沉积物中普遍可见定向粘粒胶膜和铁锰淀积物，且定向粘粒胶膜和铁锰淀积物，且定