c-Jun在肉鸡腹水综合征过程中肺动脉壁的表达变化及维拉帕米的干预研究

本试验研究低温诱发肉鸡腹水综合征过程中肺动脉壁c-Jun的表达,及阻断钙信号对肺动脉壁c-Jun表达的影响和对肉鸡腹水综合征发生的干预情况,为肉鸡腹水综合征发生机制的研究提供基础。240只15日龄AA肉鸡分为对照组、低温组和维拉帕米组,15~50日龄每组随机取6只测定右心肥大指数,取肺组织做石蜡组织切片进行c-Jun免疫组化染色分析。结果显示,29~50日龄低温组肉鸡右心肥大指数较对照组和维拉帕米组明显升高(P0.05),低温组肉鸡20~50μm、50~100μm和100~200μm肺小动脉c-Jun阳性指数分别从22、29日龄和29日龄开始到50日龄极显著高于对照组和维拉帕米组(P0.01)。研究结果认为,低温诱发肉鸡腹水综合征过程中不同直径大小肺小动脉壁cJun表达明显增强,阻断钙信号可明显抑制肺小动脉壁c-Jun的表达和肉鸡腹水综合征的发生。     

两种钙颉颃剂对肉鸡肺动脉高压和右心肥大的影响

为了揭示肉鸡肺动脉高压的形成机理,为预防和治疗肉鸡腹水综合征提供理论依据,试验研究了两种钙颉颃剂硝苯地平和维拉帕米对肉鸡肺动脉高压和腹水肉鸡右心肥大指数的影响.结果表明:44日龄,硝苯地平组肺动脉压极明显低于低温组(P<0.01);28和36日龄,维拉帕米明显降低肺动脉压 (P<0.05);44日龄维拉帕米组肺动脉压极明显低于低温组(P<0.01).硝苯地平和维拉帕米可降低肉鸡腹水心脏指数.结果说明维拉帕米和硝苯地平降低了低温诱发的肺动脉高压和肉鸡腹水综合征的发生率,降低肉鸡腹水心脏指数,初步证实钙信号参与了肺动脉高压的形成.     

低温诱发肉鸡腹水综合征过程中肺动脉平滑肌细胞增殖的变化

本试验旨在研究低温诱发肉鸡腹水综合征(AS)过程中平滑肌细胞增殖在肺血管重塑过程中的动态变化,初步探讨肺血管重塑的机制。160只15日龄雄性AA商品代肉鸡随机分为对照组(22℃±1.5℃)和低温组(11℃±2℃)。试验持续至50日龄,期间每周每组随机取6只,取肺组织做石蜡切片,Weigert-间苯二酚复红染色,观察并测定血管重塑情况;采用免疫组织化学方法检测肺动脉增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,并对其半定量化,分析平滑肌细胞增殖情况。50日龄时统计整个饲养过程中AS发生率。结果显示:(1)低温组肉鸡AS发生率(18.75%)极显著高于对照组(1.25%)(P<0.01);(2)低温组肉鸡直径20-50μm和50-150μm肺动脉结构从36日龄开始较对照组发生了明显的重塑(P<0.01或P<0.05);(3)低温组肉鸡直径20-50μm和50-150μm的肺动脉平滑肌细胞增殖指数分别从22日龄和36日龄开始极显著高于对照组(P<0.01)。结果表明:低温诱发肉鸡AS过程中肺动脉结构发生了明显的重塑,肺动脉平滑肌细胞发生了明显的增殖,并且平滑肌细胞增殖促进了肺血管重塑,在肉鸡AS发生发展过程中起着重要的作用。     

低温诱发肉鸡腹水综合征发生过程中肺血管重塑与肺动脉高压的关系

将160只15日龄雄性AA商品代肉鸡随机分为对照组((22±1.5)℃)和低温组((11±2)℃)。15~50日龄,每组每周随机取6只,以右心导管法直接测定肺动脉压(PAP),并取肺组织做石蜡切片进行Weigert-间苯二酚复红染色,分析肺血管重塑情况。50日龄时统计整个饲养过程中肉鸡腹水综合征(AS)发生率。结果显示,低温组肉鸡AS发生率(18.75%)极显著高于对照组(1.25%)(P<0.01);低温组肉鸡PAP从22日龄开始较对照组明显升高(P<0.01或P<0.05);20~50、50~100、100~200μm肺动脉结构分别从36、43、43日龄开始较对照组发生了明显的重塑(P<0.01或P<0.05)。结果表明,低温诱发肉鸡AS过程中出现了明显的PAP升高和肺血管重塑,且肺动脉高压(PH)促进了肺血管重塑,肺血管重塑加剧了PAP升高。     

低温诱发肉鸡肺血管重塑过程中肺动脉平滑肌细胞c-Myc蛋白表达的变化

试验旨在研究环境低温诱发肉鸡肺血管重塑过程中肺小动脉血管平滑肌细胞c-Myc蛋白的表达变化,初步探讨肉鸡肺血管重塑的发生机制.120只雄性AA商品代肉鸡15日龄时随机分为对照组((22±1.5)℃)条件下饲养)和低温组((11±2)℃条件下饲养).15～50日龄,每周每组随机取6只,取肺组织做石蜡切片,Weigert-间苯二酚复红染色,观察并测定m管重塑情况;采用免疫组织化学方法榆测肺动脉血管平滑肌细胞c-Myc蛋白表达,并对其进行半定量化.结果显示:(1)低温组肉鸡肺小动脉结构从36日龄开始较对照组发生了明显的重塑(P<0.01或P<0.05);(2)低温组肉鸡肺小动脉血管平滑肌细胞c-Myc蛋白表达从29日龄开始较对照组明显增加(P<0.01).结果表明:低温叫显诱发了肉鸡肺小动脉平滑肌细胞c-Myc蛋白的表达,且参与了肉鸡肺血管重塑的发生发展.     

血栓素和前列环素在肉鸡肺动脉高压中的作用

200只商品代肉鸡分成低温处理组和对照组，处理组在15日龄利用15－18℃低温诱发肉鸡肺动脉高压和腹水症。用放射免疫诊断盒测定处理后19、27、33、40日龄血浆、肺脏TXB2和6－酮－PGF1α的动态变化，利用SMUP－2A生物信号处理系统监测肺动脉压变化。结果表明肺脏和血浆TXB2在低温早期均出现升高，肺动脉低压组、高压组也出现显著性升高；低温处理早期血浆和肺脏组织6－酮－PGF1α浓度呈显著性降低，肺动脉高压组、低压组与对照组相比，明显降低。低温处理2周后肺动脉出现高压，这提示低温早期TXB2／PGI2失去平衡，肺脏和血液中TXB2升高可能是造成低温早期肺血管收缩、肺动脉高压的主要因素之一。     

维拉帕米对肺动脉高压综合征肉鸡心、肺组织中肥大细胞的影响

为了探索肥大细胞（MC）钙信号系统在肉鸡肺动脉高压综合征（PHS）形成中的作用,采用低温诱发肉鸡PHS,给予钙通道阻断剂（维拉帕米）后,右心导管法测定肉鸡血流动力学,常规阿尔新蓝法显示MC,免疫组化方法显示组胺,利用焦锑酸钾组化电镜技术,观察肺组织MC脱颗粒时胞浆钙沉积现象。结果：（1）维拉帕米组肉鸡肺动脉收缩压和舒张压显著低于低温组;（2）维拉帕米维持右心舒缩功能相对正常,抑制右心肥大;（3）维拉帕米组肺血管壁MC数显著（P〈0.05）高于低温组,心脏MC数极显著（P〈0.01）高于低温组,31和38日龄维拉帕米组肺呼吸毛细管和肺小动脉血管壁MC脱颗粒率也显著（P〈0.05）低于低温组;（4）维拉帕米组肺呼吸毛细管组胺阳性细胞数显著（P〈0.05）高于低温组,血管壁组胺阳性细胞数亦显著（P〈0.05）高于低温组;（5）肺动脉高压综合征肉鸡的脱颗粒MC胞浆中可见Ca^2＋颗粒沉积,出现Ca^2＋超载现象。研究表明钙信号参与PHS肉鸡MC的激活,维拉帕米稳定肺和心脏中的MC,防止MC脱颗粒,抑制组胺的释放,同时降低了肺动脉压,这可能是维拉帕米抑制PHS形成的重要机制之一。     

缺氧条件下巨噬细胞移动抑制因子对肉鸡肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

本研究旨在探讨缺氧条件下巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。取14~16日龄鸡胚,改良酶消化法分离培养肺动脉平滑肌细胞。采用氯化钴作为化学缺氧模拟剂处理肉鸡肺动脉平滑肌细胞,以低氧诱导因子1α(HIF-1α)为缺氧指标,摸索合适的氯化钴使用浓度,构建细胞缺氧模型;在此基础上使用阻断剂ISO-1阻断MIF,比较阻断前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平和细胞增殖水平的变化。利用Western boltting检测各蛋白表达水平,利用MTT法及细胞计数方法来检测细胞增殖水平。结果显示:经800μmol/L CoCl2处理24 h后肺动脉平滑肌细胞,HIF-1α表达较正常对照组极显著升高;与正常组相比,缺氧组肺动脉平滑肌细胞MIF及CyclinD1表达均显著升高;与缺氧组相比,阻断剂ISO-1处理后肺动脉平滑肌细胞MIF及CyclinD1表达均极显著升高。综上,缺氧条件下肺动脉平滑肌细胞MIF表达量增加,通过上调CyclinD1的表达来促进平滑肌细胞的增殖。     

肉鸡和藏鸡肺动脉平滑肌中CaSR的表达

肉鸡肺动脉高压是以肺动脉压血管重构为特征的一种疾病,众多研究揭示肺血管重构是其中心环节之一。细胞内钙离子([Ca2+])浓度的升高是诱发并导致血管重构的重要机制,钙敏感受体(CaSR)在肺动脉平滑肌细胞内钙离子稳态失调及低氧性肺血管收缩和肺血管重构中起着重要的作用。应用免疫组化和Western blot方法研究了缺氧条件下CaSR在AA肉鸡和藏鸡肺动脉平滑肌组织中的表达情况,为肉鸡腹水综合征(PAH)的肺动脉重构提供新的证据。结果表明,肉鸡组有肺水肿发生,藏鸡组无肺水肿发生,缺氧条件下饲养的肉鸡肺动脉平滑肌CaSR表达明显高于藏鸡组(P0.05)。通过探讨CaSR在AA肉鸡和藏鸡肺动脉平滑肌组织中的表达情况,从新的角度阐明了肉鸡腹水综合征发生的分子机制。     

两种组胺受体拮抗剂对肺动脉高压肉鸡右心功能的影响

探讨组胺H,受体拮抗剂扑尔敏和H。受体拮抗剂西咪替丁对低温诱发肺动脉高压肉鸡右心功能的影响,由此反证内源性组胺在低温诱发肉鸡肺动脉高压形成过程中的作用。采用160只17日龄AA肉鸡随机分为4组,每组40只。（1）常温组：在常温条件下饲养（22～23℃）,每天注射生理盐水2次;（2）低温组：低温环境中饲养（9～11℃）,每天注射生理盐水2次;（3）扑尔敏组：与低温组相同饲养,每天注射扑尔敏2次;（4）西眯替丁组：与低温组相同饲养,每天注射西眯替丁2次。分别于低温处理后1周（24日龄）、2周（31日龄）、3周（38日龄）、4周（45日龄）从每组中各随机抽取7只,利用右心导管法测定右心室内压和右心室压最大变化速率,计算腹水心脏指数（AHI）和右心衰竭率。剖杀后用常规阿尔新蓝法对心脏中肥大细胞（MC）染色,免疫组化方法显示组胺。结果：（1）低温处理后使肉鸡肥大细胞和组胺阳性细胞数量显著降低,但2种组胺受体拮抗剂对肥大细胞数量及组胺阳性细胞数无明显影响;（2）扑尔敏组肉鸡右心内压相对稳定,45日龄时右心室舒张压显著低于低温组（P〈0．05）。西咪替丁组肉鸡右心收缩压和舒张压处于较低水平,且在31和38日龄时显著低于低温组（P〈0．05）;（3）扑尔敏组右心内压最大变化速率相对稳定,31日龄时显著低于低温组（P〈0．05）,而45日龄时显著高于低温组（P〈0．05）。西咪替丁组右心内压最大变化速率处于较低水平;（4）45日龄时,扑尔敏组AHI显著低于低温组（P〈0．05）;（5）扑尔敏组显著（P〈0．05）降低了右心肥大指数和右心衰竭发生率,西咪替丁组仅显著（P〈0．05）降低了右心衰竭率。以上结果表明,内源性组胺可能通过H3受体介导肉鸡右心肥大和衰竭,从而促进肺动脉高压综合征的发生发展。     

扎鲁司特对低温诱发的肉鸡肺动脉高压的影响

将60只雄性艾维茵商品代肉鸡常规育雏，17日龄随机分为3组：常温对照组(常温组)、低温模型组(低温组)和低温扎鲁司特组(扎鲁司特组)。各组于处理后14d(31日龄)和21d(38日龄)分别用右心导管法及直接导管法测定扎鲁司特对肺动脉压(PAP)和股动脉压(FAP)的影响，同时测定红细胞压积(PCV)和腹水心脏指数(AHI)。结果：(1)在低温环境的早期，扎鲁司特使肉鸡肺动脉收缩压和舒张压均升高，后期仅使舒张压升高；(2)扎鲁司特使PCV升高，增加了血液黏性阻力；(3)扎鲁司特使AHI升高，促进右心肥大；(4)扎鲁司特对股动脉压无显著性影响。可见扎鲁司特促进了肉鸡肺动脉高压综合征的发生发展。     

2种组胺受体拮抗剂对低温诱发的肉鸡肺动脉高压的影响

为探讨组胺H1受体拮抗剂扑尔敏和H2受体拮抗剂西咪替丁对低温诱发的肉鸡肺动脉高压的影响,并由此推测组胺在低温诱发的肉鸡肺动脉高压形成过程中的作用。140只17日龄AA肉鸡随机分为4组。(1)常温组:40只在常温条件下饲养(22～23℃),每日注射生理盐水2次;(2)低温组:40只在低温环境中饲养(9～11℃),每日注射生理盐水2次;(3)扑尔敏组:40只在低温环境中饲养(9～11℃),每日注射扑尔敏2次;(4)西咪替丁组:20只在低温环境中饲养(9～11℃),于24日龄至38日龄期间每日注射西咪替丁2次。分别于低温处理后1周(24日龄)、2周(31日龄)、3周(38日龄)、4周(45日龄)从常温组,低温组,扑尔敏组中各随机抽取10只,西咪替丁组在低温处理后2周(31日龄)、3周(38日龄)各随机抽取10只,称取体重,然后利用右心导管法测定肺动脉压(PAP),并测定红细胞压积(PCV),腹水心脏指数(AHI)。结果发现:(1)24日龄、31日龄、38日龄时,低温组肺动脉收缩压,舒张压显著高于(P<0105)或极显著高于(P<0101)同日龄常温组。24日龄时扑尔敏组肺动脉收缩压显著低于(P<0105)同日龄低温组。38日龄时西咪替丁组肺动脉收缩压,舒张压极显著低于(P<0101)同日龄低温组。(2)24日龄、31日龄、38日龄、45日龄时,低温组PCV极显著高于(P<0101)同日龄常温组。24日龄时扑尔敏组     

高盐负荷诱发肉鸡肺动脉高压-腹水综合征

为探讨肺动脉高压在高盐负荷所致肉鸡腹水综合征发生发展的作用。将160只AA商品代肉仔鸡常规饲养至7日龄,随机分成对照组和试验组(饮水中添加0.30%氯化钠),分别于处理后1、2、3、4、5、6周,每组随机抽取8只鸡,利用右心导管法测定平均肺动脉压(mPAP),用温氏法检测红细胞压积(PCV),同时测定腹水心脏指数(AHI),统计腹水发生率。结果表明:(1)高盐负荷诱发肉鸡肺动脉高压,高盐处理1周试验组肉鸡肺动脉压升高为2.91±0.29kPa,显著高于对照组2.18±0.40kPa(P<0.05);并在整个处理期间持续升高,均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)地高于对照组;(2)高盐负荷诱发肉鸡AS,整个试验期间试验组的累计腹水发生率(16.3%)极显著高于对照组(2.5%)(P<0.01);(3)自分组后1周试验组的红细胞压积显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照组,且与mPAP极显著相关(15～50日龄,r=0.612,P<0.01);(4)高盐负荷诱发肉鸡右心肥大,处理后2周试验组的AHI显著增高(P<0.05),与mPAP显著相关;并在整个处理期间相关程度逐渐密切(22日龄,r=0.532,P<0.05;50日龄,r=0.756,P<0.01)。这些结果说明肺动脉高压是高盐负荷所致肉鸡AS的中心环节,并且与右心肥大密切相关。     

维拉帕米对环境低温诱发肉鸡肺动脉平滑肌细胞增殖的作用

环境低温诱发肉鸡腹水综合征(AS)发生过程中,肺血管发生明显重塑,并以肺动脉中膜增厚为主要特征。血管平滑肌细胞的数量将影响血管中膜的厚度[1]。故推测认为肉鸡肺动脉平滑肌细胞增殖在肺血管重塑过程中起着重要作用。研究认为细胞内的Ca2 是重要的细胞内第二信使,在细胞增殖过程中起着重要的作用。维拉帕米作为一种钙通道阻滞剂,可抑制Ca2 内流,使细胞内Ca2 水平降低,对肉鸡AS的发生有明显的预防作用[2]。但有关维拉帕米对环境低温诱发肉鸡AS过程中肺动脉血管平滑肌细胞增殖的作用,未见报道。增殖细胞核抗原(proliferating cell nucle…     

BQ123对低温诱发的肉鸡肺血管重塑的影响

动态观察了肺小动脉中膜平滑肌的增殖及管腔面积的改变,探讨内皮素受体拮抗剂BQ123 对低温诱发的肉鸡肺血管重塑的影响。200只16日龄AA肉鸡随机均分为4组: 常温(20 ℃)对照组、低温(7~9 ℃)组、低温低剂量BQ123组和低温高剂量BQ123组。23日龄、30日龄时测定肺动脉压,并取肺组织做石蜡切片, 以Weigert间苯二酚复红染色,形态学计算机图象分析法测定肺细小动脉外径和内径、管总面积和管腔面积,计算中膜厚度占外径百分值(%)mMTPA及管壁面积/管总面积WA/TA(%)。结果显示:(1)BQ123 抑制低温肉鸡平均肺动脉压的升高,23日龄时低温高剂量BQ123组显著低于低温组(P<0 05),30 日龄时低温低剂量BQ123 组和低温高剂量BQ123组均极显著低于低温组(P<0 01);(2)BQ123 抑制低温肉鸡肺小动脉WA/TA(%)的升高,30~50μm的肺小动脉,低温组极显著高于低温低剂量BQ123 组及低温高剂量BQ123 组(P<0 01),其它分级的肺小动脉组间差异性与此类似;(3) BQ123抑制低温肉鸡肺小动脉的mMTPA的升高,30~50μm的肺小动脉,23日龄时低温组极显著高于低温低剂量BQ123 组和低温高剂量BQ123 组(P< 0 01), 30 日龄时低温组显著高于低温低剂量BQ123组(P<0 05)、极显著高于低温高剂量BQ123组(P<0 01),30μm以下的肺小动脉组间差异性与此类似,50~120μm     

环境低温对肉鸡肺小动脉壁c-mycmRNA表达的影响

对环境低温诱发肉鸡肺动脉高压综合征(Pulmonary hypertension syndrome,PHS)过程中肺小动脉壁c-mycmRNA的表达变化进行了研究,从而初步确定原癌基因c-myc在环境低温诱发肉鸡PHS过程中的参与作用,为肉鸡PHS发生机制的研究提供基础。120只雄性AA商品代肉鸡15日龄时随机分为对照组((22±1.5)℃)和低温组((11±2)℃)。15～50日龄,每周每组随机取6只,肺组织做石蜡切片,应用原位杂交染色法进行c-myc mRNA杂交,并结合图像分析法,测定环境低温诱发肉鸡PHS过程中肺小动脉壁原癌基因c-myc mRNA的表达情况。结果显示,低温组肉鸡PHS发生率(15.00%)极显著高于对照组(1.67%)(P<0.01);低温组肉鸡肺小动脉壁c-mycmRNA的表达从22日龄开始较对照组明显增加(P<0.05),从29～50日龄较对照组极显著升高(P<0.01)。结果表明,环境低温明显诱发了肉鸡肺小动脉壁c-myc mRNA的表达,且c-myc mRNA的表达参与了环境低温诱发的肉鸡PHS的发生发展。     

卡托普利对腹水综合征肉鸡右心功能的影响

150只15日龄AA肉鸡随机分为常温组、低温组和卡托普利组,探讨卡托普利对腹水综合征肉鸡右心功能的影响。结果:卡托普利降低低温诱发肉鸡腹水的发生率;卡托普利降低低温诱发肉鸡肺动脉高压;卡托普利与低温组比降低肉鸡腹水心脏指数;28、36日龄和44日龄,卡托普利组右心室收缩压低于低温组(P0.05);28、36日龄和44日龄,卡托普利组右心室舒张压分别极低于低温组((P0.01)。本试验证明卡托普利可以降低腹水发生率和右心肥大,有效维护右心功能。     

红三叶异黄酮对肉鸡肺血管重构和平滑肌细胞凋亡的影响

为观察在低温环境下红三叶异黄酮对肉鸡肺血管重构和平滑肌细胞凋亡的影响,选取270只10日龄肉鸡,随机分为常温对照组(Ⅰ)、低温组(Ⅱ)和低温黄酮组(Ⅲ),每组6个重复,每个重复15只,Ⅰ组和Ⅱ组饲喂基础饲粮,Ⅲ组饲喂添加红三叶异黄酮20mg/kg的试验饲粮,分别于14,21,28,35,42日龄从各组随机抽取6只肉鸡,观察各组肉鸡肺血管病理形态学变化,检测Caspase-3和Bcl-2蛋白表达情况。结果表明,Ⅱ组肉鸡肺小动脉结构在28,35,42日龄比Ⅰ组肺小动脉管壁有不同程度增厚、管腔变窄,发生了明显的重构现象(P0.05或0.01)。Ⅲ组与Ⅱ组相比,在28,35,42日龄肺血管重构现象减轻(P0.05或0.01),肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)发病率降低,血管平滑肌细胞Caspase-3蛋白阳性率增高,Bcl-2蛋白表达下降;表明红三叶异黄酮能有效减轻肉鸡肺血管重构,其机制可能与调节平滑肌细胞凋亡有关。     

BQ123抑制低温诱发肺动脉高压肉鸡的肺小动脉肌型化

本试验用高选择性内皮素A受体拮抗剂BQ123处理低温肉鸡的方法,通过动态观察肺动脉压及肌型、部分肌型及非肌型肺小动脉数量的变化,探讨内源性内皮素在肺血管重塑中的作用。结果显示:30日龄时,低温组平均肺动脉压极显著高于常温组、低BQ123组及高BQ123组(P<0.01);低温组肌型及部分肌型肺小动脉的占位比均极显著高于常温组、低BQ123组及高BQ123组(P<0.01);低温组非肌型肺小动脉占位比极显著低于常温组、低BQ123组和高BQ123组(P<0.01),高BQ123组显著高于低BQ123组(P<0.05)。结果表明,BQ123可明显抑制低温肉鸡肺动脉高压和非肌型肺小动脉的肌型化的发生发展,因此认为内源性ET在低温诱发肺动脉高压肉鸡肺血管重塑的发生发展过程中起重要作用。     

BQ123对肉鸡腹水综合征的预防作用研究

通过动态观察肺动脉压、红细胞压积、腹水心脏指数、肺小动脉中膜厚度占外径百分值(mMTPA)及管壁面积/管总面积(WA/TA)的变化,探讨高选择性内皮素A受体拮抗剂BQ123对低温诱发肉鸡腹水综合征的预防作用。结果显示,BQ123能显著降低低温诱发肉鸡的肺动脉压、红细胞压积及腹水心脏指数(P0.05或P0.01);BQ123能显著减小低温诱发肉鸡的mMTPA及WA/TA(P0.05或P0.01)。结果表明,BQ123明显抑制了低温诱发肉鸡的肺动脉高压和肺血管重塑的形成和发展,对肉鸡腹水综合征具有明显的预防作用。