淫羊藿多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响

为研究淫羊藿多糖脂质体(EPSL)增强免疫的作用机理,采用MTT法和实时荧光定量PCR法测定了EPSL对鸡外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响,以淫羊藿多糖(EPS)作为对照.结果表明,EPSL在体外可以显著促进淋巴细胞的增殖,其中在31.250和3.906 μg·mL-1时,无论是单独作用还是协同PHA作用效果都显著优于EPS;EPSL可提高淋巴细胞IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA的表达,其中在62.500和31.250 μg·mL-1时,EPSL对3种细胞因子的诱生作用显著强于EPS,EPSL在62.500 μg·mL-1时的作用最强,在31.250 μg·mL-1时次之,并与剂量呈正相关.EPS经过脂质体包封后其提高淋巴细胞增殖及细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γmRNA表达的作用明显增强.     

不结球白菜提取物对肉鸡脾脏IL-2、IL-4及IFN-γ mRNA表达的影响

本研究旨在探讨不结球白菜提取物(NCCE)对肉鸡脾脏细胞因子mRNA表达水平的影响。选取1日龄健康AA肉鸡180只,随机分为6个处理,每个处理3个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,处理组分别在基础日粮中添加100、300、500、700、900 mg/kg NCCE,试验期为42 d。采用实时荧光定量PCR检测NCCE对肉鸡脾脏组织中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)及γ-干扰素(IFN-γ)mRNA的相对表达量。结果表明,与对照组相比,300、500、700、900 mg/kg处理组显著提高了鸡脾脏IL-2、IL-4 mRNA表达水平(P0.05);500、700、900 mg/kg处理组显著提高了IFN-γmRNA表达水平(P0.05);与700 mg/kg处理组相比,500 mg/kg处理组IL-2、IL-4及IFN-γmRNA表达量具有增加的趋势(P0.05)。NCCE能够诱导肉鸡脾脏IL-2、IL-4及IFN-γmRNA的表达,基础日粮中添加500 mg/kg效果最好。     

甘草次酸脂质体体外对鸡IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响

为了研究甘草次酸脂质体(GAL)增强免疫的作用和分子机理.采用Primer Primier 5.0软件自行设计白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)3对引物.培养鸡外周血淋巴细胞,分别加入3种浓度的GAL、甘草次酸(GA)和空白脂质体(BL),另设LPS对照组,培养36 h后收集细胞,提取总RNA,然后对其进行反转录.用荧光定量PCR方法测定GAL对鸡外周血淋巴细胞IL-2、IL-4和IFN-γ的mRNA表达的影响.结果:在8.750 mg/L、2.188 mg/L、0.547 mg/L时,GAL促进外周血淋巴细胞3种细胞因子mRNA的转录能力显著强于GA和BL,且在8.750 mg/L时的作用最强.这可能是GAL增强机体免疫的分子机制之一.     

芪蓝四君子汤对雏鸡小肠IL-2和IFN-γ mRNA表达的影响

为了研究芪蓝四君子汤对雏鸡小肠IL-2和IFN-γ mRNA表达的影响,选用90只1日龄雏鸡,随机分成5组:Ⅰ-Ⅳ组用新城疫LaSota系冻干苗进行口腔免疫,Ⅰ-Ⅲ组在免疫的同时,分别按0.125 g/mL、0.25 g/mL、0.5 g/mL 3个浓度灌服芪蓝四君子汤1 mL,连续灌服10 d。Ⅳ组和Ⅴ组灌服等量生理盐水。各组分别于20、40、60日龄时各宰杀6只,取小肠(空肠段),用半定量RT-PCR方法检测空肠中IL-2和IFN-γ的mRNA表达变化。结果表明,芪蓝四君子汤能显著促进雏鸡空肠中IL-2和IFN-γ mRNA的表达,诱导机体产生Th1免疫反应,进而增强机体局部的细胞免疫水平。     

沙葱、油料籽实对绵羊外周血单核细胞和T淋巴细胞的影响

研究选用28只内蒙古羯羊,依照体重相近的原则随机分为4组,分别为对照组、4%沙葱组(占精料干物质的比例,以下相同)、4%沙葱+油料籽实(8%胡麻籽+2%麻籽+2%葵花籽)组、油料籽实(8%胡麻籽+2%麻籽+2%葵花籽)组,在试验期45d内采4次血,研究以上4个处理对绵羊血液细胞免疫、非特异性免疫功能的影响。结果表明:试验组单核细胞、CD2+和CD4+T淋巴细胞数均显著高于对照组(P<0.05);对照组CD8+T淋巴细胞数高于试验组,差异不显著(P>0.05)。从结果来看,沙葱和油料籽实显著提高了绵羊机体的非特异性免疫和细胞免疫机能,为以后开发舍饲肉羊新型的免疫添加剂以及进一步研究沙葱影响免疫机能的机理提供了理论依据。     

SPF雏鸡感染REV后IL-6和IFN-γ mRNA表达的动态变化

建立并利用鸡白细胞介素6和γ干扰素荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendo-theliosis virus,REV)感染SPF鸡后主要免疫器官的鸡白细胞介素6和γ干扰素基因转录水平进行了初步研究.结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和腔上囊中IL-6和IFN-γ的分泌水平在所有时间点均显著升高(P＜0.05)或极显著升高(P＜0.01).本试验为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础.     

鸡鼻相关淋巴组织中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平的动态变化

本研究旨在观察鸡鼻黏膜相关淋巴组织（NALT）在不同日龄时细胞因子上干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）mRNA的表达水平,分析鸡NALT免疫功能的建立情况,试验以不同日龄海蓝白鸡鼻腔后部组织为研究对象,采用SYBRGreen1qRT—PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后初期鼻相关淋巴组织中IFN-γ和IL-2mRNA的表达水平。研究发现：NALT中于18胚龄检测到IFN-7和IL-2mRNA,随后表达水平逐渐升高,并于21日龄时达到峰值。此外,在4日龄时2种细胞因子与CD4＋细胞出现的时间相同,表明2种细胞因子由该免疫活性细胞所分泌。NALT在4日龄时开始具有-定的免疫功能,并随日龄增长逐渐增强,21日龄时达到成熟水平。     

复方苦芩多糖对细小病毒病犬外周血IL-4及IFN-γ表达的影响

为了探讨复方苦芩总多糖(KQPC)对细小病毒病犬的免疫功能的影响,将KQPC制成针剂,犬细小病毒攻毒;将健康犬随机分成空白组、阳性组、攻毒组、复方苦芩组及3种浓度的KQPC组;给药7 d后攻毒,ELISA法检测外周血IL-4、IFN-γ含量,分离外周血淋巴细胞提取总RNA,RT-PCR法测定IL-4、IFN-γ表达水平。结果与攻毒组相比,复方苦芩、KQPC均能降低IL-4含量及其mRNA表达,提高IFN-γ含量及其mRNA表达(P<0.01)。表明KQPC能调节细小病毒病犬免疫功能,可能是复方苦芩的主要作用成分之一。     

豆粕提取物对鸡脾脏组织IFN-γ和IL-2mRNA表达的影响

选择1日龄AA肉仔鸡150羽,随机分为5个处理组,每个处理设3个重复,每个重复10羽。对照组饲喂基础日粮,4个处理组在基础日粮基础上分别添加250、500、750、1 000mg/kg的豆粕提取物,试验期49d。采用实时定量-PCR(RT-PCR)检测豆粕提取物对脾脏γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-2(IL-2)的信使RNA(mRNA)的相对表达。结果显示,与对照组比较,500、750、1 000m/kg处理组的INF-γ和IL-2mRNA水平均显著增加(P<0.05);而1 000mg/kg处理组较750m/kg处理组INF-γ和IL-2mRNA表达量有下降趋势,但无显著差异(P>0.05)。结果表明,豆粕提取物能够诱导IFN-γ和IL-2 mRNA的表达,基础日粮中添加750 mg的豆粕提取物对IFN-γ和IL-2mRNA表达量作用效果最为明显。     

沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞的调节作用研究

试验研究沙葱多糖（Allium mongolicum regel polysaccharides）对绵羊外周血淋巴细胞增殖及一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。试验设置不同浓度（0~250μg/ml）的沙葱多糖和不同的作用时间（24、48、72 h）,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖;以培养24 h的绵羊外周血淋巴细胞为研究对象,以微板法、硝酸还原酶法分别测定NO及iNOS。结果表明,沙葱多糖浓度为50~100μg/ml时抑制淋巴细胞的增殖,当浓度为150~250μg/ml时促进淋巴细胞的增殖,且作用时间为24 h时增殖效果最强。较低浓度的沙葱多糖（50~100μg/ml）抑制淋巴细胞分泌NO,随着浓度的加大,NO分泌量增加。沙葱多糖对淋巴细胞内iNOS 活性没有显著影响（P>0.05）。因此,沙葱多糖能够影响淋巴细胞的增殖,释放 NO 及 iNOS,并且呈现量效和时效关系,说明沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞具有免疫调节作用。     

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ mRNA转录的影响

用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明,IL-12p40 mRNA转录从攻毒后3 d开始显著上调(P<0.05),7 d达高峰,14 d开始下降,但仍显著高于对照组(P<0.05),28 d和42 d低于对照组;IL-10 mRNA在3 d显著上调(P<0.05),14 d达到转录高峰(P<0.01),之后逐渐下降,42 d接近对照组水平;IFN-γmRNA转录水平尽管在3 d和28 d时出现2次转录低峰1、4 d和42 d时出现2次高峰,但只在3 d和7 d差异显著(P<0.05)。由此表明,PRRSV和PCV2共感染可导致PAM细胞因子IL-12p40和IL-10 mRNA的转录在感染早期被激活,而IFN-γ mRNA转录则呈较复杂的动态变化,提示PRRSV和PCV2共感染猪PAM的免疫应答、免疫调节和抗感染功能均受到不同程度的影响。     

沙葱黄酮对肉羊外周血淋巴细胞转化率和凋亡率的影响

本试验旨在研究饲粮中添加沙葱黄酮对肉羊外周血淋巴细胞转化率和凋亡率的影响。选用60只6月龄左右、体重(39.9±3.2)kg的小尾寒羊为试验动物,按照出生月龄和体重相近的原则,随机分为4组,每组15只羊。对照组饲喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮中添加11、22、33 mg/kg的沙葱总黄酮。预试期为15 d,正试期为60 d。正试期第60天空腹颈静脉采血,采用噻唑蓝(MTT)法测定肉羊外周血淋巴细胞转化率,采用流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡率。结果表明:1)饲粮添加11、22、33 mg/kg沙葱黄酮可提高肉羊外周血淋巴细胞转化率,其中33 mg/kg组显著高于对照组(P0.05);2)与对照组相比,饲粮添加33 mg/kg沙葱黄酮能够显著提高S期和G2/M期细胞比例(P0.05);3)与对照组和11 mg/kg组相比,22和33 mg/kg组外周血淋巴细胞凋亡率显著提高(P0.05)。由此可见,饲粮中添加11~33 mg/kg沙葱黄酮可促进肉羊外周血淋巴细胞转化,并使细胞向DNA合成期转化,促进细胞分裂,对细胞凋亡有显著促进作用,以添加33 mg/kg沙葱黄酮的效果最佳。     

猪圆环病毒2型感染后猪外周血淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ和TNF-α mRNA转录的变化

采用竞争定量RTPCR技术（qcRT—PCR）对PCV2感染组和健康对照组外周血淋巴细胞中IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ和TNF-α mRNA转录水平进行分析。结果表明,在14和21 DPI（Dayspost inoculation）感染组Th1类细胞因子IL-2 mRNA转录水平分别为对照组的5．1（P〈0．01）和24．0（P〈0．01）倍;IL-12p40 mRNA转录水平在14和21 DPI分别为对照组的1．7（P〈0．05）和1．2（P〈0．05）倍;感染组IFN-γ mRNA转录水平除在7 DPI低于对照组外（P〈0．05）,在28和42 DPI均明显高于对照组,分别为对照组的38．2（P〈0．01）和4．0（P〈0．05）倍。Th2类细胞因子波动较为明显,28 DPI IL-4 mRNA转录水平显著高于对照组（P〈0．01）;感染组IL-10 mRNA在7（P〈0．01）和14 DPI（P〈0．05）的转录水平均显著高于对照组,而在35 DPI明显低于对照组（P〈0．05）。在整个试验过程中TNF—α mRNA转录水平没有发生明显变化。上述6种细胞因子mRNA变化结果显示,PCV2感染猪Th1细胞的细胞因子表达水平升高,而Th2细胞的细胞因子在28 DPI前后出现明显波动,尤其是在35 DPI IL-10 mRNA显著下降（P〈0．05）,提示PCV2感染可造成猪体内Th1／Th2免疫应答的失衡,导致细胞免疫应答功能增强而体液免疫应答下降。     

紫黄散对免疫抑制小鼠血清IL-2、IL-4和IFN-γ的影响

为了研究自拟的紫黄散对免疫抑制小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量的影响,试验将60只小鼠随机分成6组,即紫黄散组(高、中、低3个剂量组)、扶正解毒散组、模型对照组、空白对照组,除空白对照组外,其余各组小鼠分别在给药后第8,10,12天腹腔注射氢化可的松注射液,制造免疫抑制模型,空白对照组和模型对照组小鼠灌胃生理盐水,其余各组小鼠分别灌胃高、中、低剂量紫黄散和扶正解毒散,共灌胃14 d,于末次给药后第2天摘眼球取血制备血清,检测小鼠血清IL-2、IL-4和IFN-γ的含量。结果表明:紫黄散和扶正解毒散均能明显提高免疫抑制小鼠血清IL-2、IL-4和IFN-γ水平,紫黄散的免疫增强效果优于扶正解毒散,且以中剂量的紫黄散效果最佳。说明自拟紫黄散能够提高免疫抑制小鼠血清IL-2、IL-4和IFN-γ水平。     

PRRS病毒感染对猪细胞因子IL-2、IL-4和 IL-10mRNA转录的影响

通过构建猪细胞因子IL-2、IL-4和IL-10的缺失cDNA竞争分子，利用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒感染过程中细胞因子IL—2、IL—4和IL—10的mRNA进行转录水平变化的定量检测，研究PRRS病毒感染对猪细胞因子IL—2、IL-4和IL—10mRNA转录的影响。结果 表明猪Th1型细胞因子IL—2的mRNA转录水平分别在PRRS病毒感染后1d、28d和56d出现3个mRNA转录高峰；而Th2型细胞因子IL—4的mRNA转录水平在病毒感染后56d内，一直处于低水平，而后才逐渐升高；IL—10的mRNA转录水平在病毒感染后6d内，一直处于低水平状态，第6d后才逐渐上升，至42d到达高峰，而后下降，恢复正常。结果显示PRRS病毒感染可导致Th2型细胞因子IL-4和IL-10基因转录的抑制。     

干扰Sirt2表达对绵羊颗粒细胞增殖、凋亡及抗氧化能力的影响

Sirt2对雌性动物的生殖具有重要调节作用,实验旨在探讨小干扰RNA(siRNA)干扰颗粒细胞Sirt2表达后,对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及抗氧化能力的影响.首先利用免疫荧光染色检测FSHR以鉴定颗粒细胞纯度,qRT-PCR检测干扰效率,随后利用MTT法检测干扰Sirt2表达后对细胞增殖的影响,最后利用qRT-PCR...     

毒害艾美耳球虫感染对雏鸡免疫器官IL-2表达及淋巴细胞增殖能力的影响

为了探讨毒害艾美耳球虫(E.necatrix)感染雏鸡后,其免疫器官白细胞介素(IL-2)和T、B淋巴细胞增殖能力的变化,本研究应用组织匀浆涂片和酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对E.necatrix感染雏鸡免疫器官的T淋巴细胞百分数、IL-2诱生活性、T和B淋巴细胞对C...     

PRRSV体外感染PAMs对IFN-γ mRNA转录水平的影响

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)对IFN-γmRNA转录水平的影响,选用PRRSV血清抗体和抗原均为阴性的4周龄健康仔猪3头,无菌分离PAMs,随机将其分为对照组、PRRSV感染组(PRRSV组)、PRRSV+PHA组和RRRSV+Dex组,分别在培养6、12、24、48和60 h收集PAMs。运用荧光定量PCR检测IFN-γ和PRRSV mRNA转录情况。结果显示,PRRSV mRNA转录量在感染PAMs后6~24 h逐渐升高,在48 h有所下调,在60 h再次升高,IFN-γmRNA转录量在6~48 h逐渐升高,24、48 h显著高于对照组,而到60 h又恢复到对照组水平;与同时间点的PRRSV组相比,PRRSV+PHA组中PRRSV mRNA转录量有所下调,IFN-γmRNA转录量有所上调;而RRRSV+Dex组PRRSV mRNA转录量有所上调,IFN-γmRNA转录量所下调。结果表明,IFN-γ在一定程度上可以抑制PRRSV在PAMs中的增殖,IFN-γ的抑制可能是PRRSV导致细胞损伤的机制之一。     

猪IL-2的原核表达及其促淋巴细胞增殖活性研究

为研究猪IL-2作为免疫佐剂的可行性,用IPTG诱导含有猪IL-2基因的BL21(DE3)LysS工程菌。目的蛋白经超声波破碎、洗涤、变性溶解后,用固化金属亲和层析法纯化后复性。MTT法对复性的重组蛋白的生物学活性进行分析。结果显示,相同浓度复性的IL-2与未复性的IL-2比较,刺激淋巴细胞体外增殖的能力差异极显著(P<0.01)。说明复性的重组猪IL-2具有良好的刺激淋巴细胞体外增殖的活性,在作为免疫佐剂方面具有潜在的应用价值。     

缺硒对雏鸡空肠和回肠IFN-γ、IL-2、IL-4基因转录的影响

选取120只1日龄的SPF雏鸡,随机分为低硒饲料组和正常饲料组。分别在试验期7,14,21,28d对雏鸡进行剖杀并取其空肠与回肠,用实时荧光定量PCR法检测IL-2、IL-4和IFN-γ基因转录结果,以明确硒缺乏对雏鸡肠黏膜免疫功能的影响。结果表明:试验组与对照组相比,试验组雏鸡在试验期14和21d时,空肠中IL-4基因转录结果极显著降低(P0.01),IL-2和IFN-γ基因转录结果极显著升高(P0.01);28d时,IL-4基因转录结果极显著降低(P0.01),IL-2基因转录结果显著降低(P0.05),IFN-γ基因转录结果无明显差异。试验组与对照组相比,试验组雏鸡在试验期14和21d时,回肠中IL-4基因转录结果极显著降低(P0.01),IL-2和IFN-γ基因转录结果极显著升高(P0.01);28d时,IL-2、IL-4、IFN-γ基因转录结果极显著降低(P0.01)。结果说明,硒对雏鸡肠黏膜部分细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌具有一定的调节作用,为硒调控肠黏膜免疫的机制研究奠定基础。