家兔小肠不同区段营养物质转运载体相关基因的分布规律

旨在研究家兔小肠不同区段营养物质转运载体相关基因的分布规律。本研究选取110日龄体重相近的健康白色獭兔10只,屠宰后采集十二指肠、空肠、回肠样品,采用real-time PCR研究家兔不同肠段小肽转运载体Pep T1,氨基酸转运载体CAT1、B~0AT、EAAT3、rBAT,葡萄糖转运载体SGLT1、GLUT2、GLUT5,以及脂肪酸转运载体FATP4的mRNA表达丰度。结果显示,小肽转运载体Pep T1 mRNA在十二指肠表达量最高,空肠略低;碱性氨基酸转运载体CAT1、兼性氨基酸转运载体rBAT和中性氨基酸转运载体B~0AT mRNA的表达量均在回肠最高,空肠次之;酸性氨基酸转运载体EAAT3 mRNA的表达量在空肠和回肠均较高;葡萄糖转运载体SGLT1和GLUT5 mRNA的表达量在十二指肠和空肠均较高;葡萄糖转运载体GLUT2和脂肪酸转运载体FATP4 mRNA的表达量则是空肠最高,十二指肠次之。结果表明,家兔肠道转运吸收小肽、葡萄糖和脂肪酸的主要部位是小肠前半段,转运吸收氨基酸的主要部位是小肠后半段。     

实时荧光定量RT-PCR检测糖皮质激素对肉仔鸡空肠葡萄糖转运载体mRNA表达的影响

为探讨糖皮质激素对肉仔鸡空肠葡萄糖转运影响的机理,采用实时荧光定量方法研究了长期注射糖皮质激素类药物地塞米松对肉仔鸡空肠上皮细胞钠葡萄糖共转运载体(SGLT1)和葡萄糖易化转运载体(GLUT2)mRNA表达的影响.试验选取21日龄体重相近的AA肉仔鸡24只,随机分为4组,其中3个试验组每只腹部皮下注射地塞米松生理盐水注射液1mL(剂量分别为每1kg体重0.1mg,1mg和5mg),对照组注射等体积的生理盐水,连续7天.结果显示各地塞米松处理组间SGLT1 mRNA的表达量无显著差异(P＞0.05),但各处理组SGLT1 mRNA的表达量均显著低于对照组(P＜0.05);注射地塞米松显著影响了GLUT2 mRNA的表达量(P＜0.05).其中0.1和1 mg/kg体重地塞米松处理组的GLUT2 mRNA表达量均显著高于对照组(P＜0.05),5 mg/kg地塞米松处理组GLUT2 mRNA表达量略高于对照组(P＞0.05).结果表明糖皮质激素可能通过改变SGLT1和GLUT2转录水平的表达来实现对肉仔鸡空肠葡萄糖转运的调节.     

日粮能量及蛋白质水平对滩羊糖类转运载体mRNA表达的影响

试验旨在研究日粮能量及蛋白质水平对滩羊小肠和肌肉组织中主要糖类转运载体mRNA表达的影响。选取112只健康、体重相近的滩羊（公、母各半）,随机分为4组,每组4个重复,每个重复7只羊。参考肉羊饲养标准（NY/T 816-2004）,分别饲喂不同能量及蛋白质水平日粮,即0.84×标准水平（Ⅰ组）、0.96×标准水平（Ⅱ组）、1.08×标准水平（Ⅲ组）和1.20×标准水平（Ⅳ组）。试验分两个阶段（29~35和36~40 kg）,于每个阶段末,每个重复屠宰1只试验羊,取其小肠和肌肉组织样,运用实时荧光定量PCR技术,研究SGLT1、GLUT4、GLUT5基因mRNA的表达量变化。结果显示,在29~35 kg阶段末,Ⅲ组小肠中SGLT1基因mRNA的表达量最高,显著高于其他组（P< 0.05）,在36~40 kg阶段末各组间无显著差异（P> 0.05）,各组肌肉中SGLT1基因mRNA的表达量在两个阶段都随着能量及蛋白质水平的提高而增加,Ⅳ组均最高;在29~35 kg阶段末,各组间小肠中GLUT4基因mRNA表达量无显著差异（P> 0.05）,而在36~40 kg阶段末,GLUT4基因mRNA的表达量随着能量及蛋白质水平的提高而增加,Ⅳ组显著高于其他组（P< 0.05）,在肌肉中,Ⅳ组GLUT4基因mRNA在两个阶段末表达量均最高,均显著高于Ⅰ组（P< 0.05）;在两个试验阶段,GLUT5基因mRNA的表达量无规律性。综上所述,日粮能量及蛋白质水平会影响滩羊小肠和肌肉中SGLT1、GLUT4基因mRNA的表达量,从而影响机体对葡萄糖的消化吸收。     

肠道上皮主要葡萄糖转运载体及其作用机制

葡萄糖在肠道的吸收主要通过Na~+依赖性葡萄糖转运载体1(SGLT1)和易化葡萄糖转运载体2(GLUT2)实现。许多影响肠道葡萄糖吸收功能的因素都是通过调控SGLT1和GLUT2转录水平、mRNA稳定性及蛋白水平来实现的。通过对葡萄糖转运载体结构和功能的研究,不仅为人类肥胖症和糖尿病等相关疾病提供潜在药物靶点,还能为调节动物营养物质吸收提供思路。本文综述了肠道上皮主要葡萄糖转运载体SGLT1和GLUT2的功能和影响其在肠道上皮表达的因素,旨在从分子层面揭示葡萄糖在肠道的吸收以及体内葡萄糖平衡的调控。     

鸡肝细胞中C/EBPα基因的敲低及对糖脂代谢相关基因表达的影响

C/EBPα即CCAAT/增强子结合蛋白α基因,其编码的CCAAT/增强子结合蛋白是重要的转录调控因子,在细胞的分化和代谢过程中发挥着重要的调节作用。试验利用RNAi来敲低鸡LMH细胞系中C/EBPα基因的表达,以研究C/EBPα基因影响脂肪代谢的机制。根据鸡C/EBPα基因的mRNA序列,设计3对siRNA,用RNAi干扰技术来敲低鸡LMH细胞中的C/EBPα基因表达,然后用荧光定量PCR检测C/EBPα基因的表达情况,发现其中的C/EBPα-siRNA-161能够显著降低C/EBPα基因的表达;并将C/EBPα-siRNA-161转染LHM细胞后48 h后,利用荧光定量PCR检测LMH细胞中糖脂代谢相关基因(PCK1、SCD、GLUT2、PPARγ、INS、G6PC、IGF1、IGF2、INSR、STAT3)的表达,发现在LMH细胞中PCK1、G6PC、GLUT2基因的mRNA表达量下降,结果表明C/EBPα基因能影响糖代谢相关基因G6PC、GLUT2、甘油异生相关基因PCK1的表达,证实了C/EBPα基因对鸡肝细胞中的糖脂代谢具有调控作用,通过调控C/EBPα基因的表达将影响糖吸收及甘油异生。     

妊娠后期营养限制对母羊胃肠道葡萄糖转运载体相关基因表达的影响

本研究旨在研究妊娠后期营养限制对母羊胃肠道葡萄糖转运载体相关基因表达的影响。选取20只同期受孕的湘东黑山羊,随机分为2组,即对照组(自由采食)和限饲组(40%采食量限制),每组10只。预试期15 d(妊娠81~95 d),正试期39 d(妊娠96~135 d)。正试期结束后,屠宰并采取瘤胃、十二指肠、空肠、回肠以及盲肠的黏膜样品,利用实时定量PCR技术,检测Na+-葡萄糖共转运载体1(SGLT1)、Na+-葡萄糖共转运载体3(SGLT3)、易化葡萄糖转运载体2(GLUT2)和易化葡萄糖转运载体5(GLUT5)基因表达量。结果表明:限饲组与对照组相比,SGLT1基因表达量在瘤胃显著降低(P0.05),在空肠和回肠中有降低趋势(0.05≤P0.10);GLUT5基因表达量在盲肠显著降低(P0.05);而其他葡萄糖转运载体基因胃肠道表达量在限饲组和对照组差异均不显著(P0.05)。由此可见,母羊妊娠后期营养限制对胃肠道中葡萄糖转运载体基因表达有不同程度的影响,进而引起母羊机体内葡萄糖转运的改变。     

热应激造成奶牛乳腺上皮细胞损伤并影响乳合成相关载体的基因表达

本试验以奶牛乳腺上皮细胞为模型,旨在寻找热应激下调奶牛泌乳功能的相关因素。42℃高温处理奶牛乳腺上皮细胞0、0.5、1、1.5、2、4、8及12h,检测其对细胞活率,线粒体膜电位,热休克分子及蛋白基因、氧化应激相关基因以及氨基酸和葡萄糖转运载体基因表达的影响。结果显示,不同时间热处理显著降低乳腺上皮细胞活率(P0.05),损伤细胞线粒体膜电位。HSP27基因表达显著下降(P0.05),HSP70基因表达显著上调(P0.05),HSP90基因表达在前4h显著上调(P0.05),后恢复至正常水平,HSF-1基因表达在某些时间点显著上调(P0.05)。氧化应激相关基因Keach样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)表达无显著变化(P0.05),核因子E2相关因子2(Nrf2)表达显著上调(P0.05),NAD(P)H脱氢酶醌-1(NQO1)表达显著上调(P0.05)。跨膜氨基酸转运载体SLC7A7基因表达在1h和4h显著上调(P0.05)。葡萄糖转运载体GLUT1及GLUT8基因表达显著下调(P0.05)。葡萄糖转运载体GLUT12在热处理0~2h表达显著上调,4~12h显著下调(P0.05)。热应激能够显著降低奶牛乳腺上皮细胞活率,引起氧化应激,改变热休克蛋白和分子及跨膜转运载体的基因表达。     

科技前沿

断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响本试验旨在研究仔猪断奶后小肠黏膜钠葡萄糖转运蛋白l(SGLTl)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)     

鸡肠道SGLT1和GLUT2 mRNA表达的组织特异性研究

运用相对定量RT-PCR方法，研究不同肠段Arbor Acre（AA）肉鸡肠道葡萄糖吸收转运主要载体SGLT1和GLUT2mRNA表达的组织特异性。结果发现。随着肠道空间位置的后移，SGLT1 mRNA的表达量逐步降低。十二指肠SGLT1 mRNA的丰度比结直肠高76．19Vo，差异极显著（P〈0．01）；而空肠和回肠SGLT1 mRNA的表达量分别比结直肠高42．86％和38．10％，差异不显著（P〉0．05），但有提高的趋势（P值分别为0．06和0．07）。十二指肠与空肠和回肠相比，SGLTlmRNA的表达量虽然分别高23．33％和27．59％，但差异不显著（P值分别为0．18和0．10）。相对定量分析表明，十二指肠和空肠GLUT2 mRNA丰度非常接近，差异不显著（P〉0．05）。定性研究显示，十二指肠与空肠GLUT2 mRNA丰度高于回肠和结直肠。鸡肠道SGLT1和GLUT2 mRNA表达的组织特异性之生理功能，有待于进一步研究。     

游离亚麻酸对奶牛乳腺上皮细胞脂肪酸代谢相关基因mRNA转录的影响

本研究以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究外源添加不同浓度游离α-亚麻酸(LNA)对细胞脂肪酸代谢相关靶基因mRNA转录水平的影响.体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,以牛血清白蛋白(BSA)代替胎牛血清为对照组,BSA与不同浓度LNA为试验组,试验培养36 h,采用RT-qPCT对目的基因进行定量,检测其表达丰度.结果显示:1)0.625～5.000μmol/L LNA极显著上调了脂肪酸转运基因中CD36的表达(P<0.01),而较高浓度(≥5μmol/L)的LNA下调了另2种转运蛋白,即长链酰基辅酶A合成酶-1基因(ACSL1)和脂肪酸结合蛋白-3(FABP3)基因的表达(P<0.01);2)LNA对奶牛乳腺上皮细胞脂肪酸合成相关基因表达丰度的影响具有剂量效应,较高浓度(≥5μmol/L)的LNA极显著降低脂肪酸合成酶(FASN)基因和硬脂酰去饱和酶(SCD)基因mRNA转录水平(P<0.01);3)LNA的浓度对过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG)基因的mRNA转录水平没有显著影响(P>0.05),但所有浓度的LNA均极显著降低了固醇调节元件结合蛋白-1(SREBF1)基因的mRNA转录水平(P<0.01).本试验结果证实,长链脂肪酸LNA对乳腺上皮细胞脂肪酸关键合成酶的基因转录具有抑制作用,而CD36在长链脂肪酸转运进入奶牛乳腺上皮细胞的过程中具有重要作用.     

海藻多糖对仔猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白及核转录因子-κB信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在研究不同浓度海藻多糖对仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)紧密连接蛋白及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关基因表达的影响。IPEC-J2细胞加入浓度分别为0(对照)、60、120和240μg/mL的海藻多糖处理培养基培养24 h,分析海藻多糖对IPEC-J2细胞机械屏障和免疫屏障相关基因以及蛋白表达的影响。结果表明:1)与对照组相比,60、120μg/mL的海藻多糖可以显著上调紧密连接蛋白闭锁蛋白(occludin)和闭合小环蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量(P0.05);但240μg/mL海藻多糖组occludin和ZO-1的mRNA相对表达量与对照组无显著差异(P0.05)。与对照组相比,120和240μg/mL的海藻多糖可以显著上调封闭蛋白-1(claudin-1)的mRNA相对表达量(P0.05)。与对照组相比,120、240μg/mL的海藻多糖可以显著上调claudin-1和ZO-1的蛋白相对表达量(P0.05)。2)与对照组相比,60、120和240μg/mL的海藻多糖均显著降低了髓样分化蛋白88(MyD88)和p65的mRNA相对表达量(P0.05),240μg/mL的海藻多糖显著降低了Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)的mRNA相对表达量(P0.05)。由此可知,海藻多糖可以上调IPEC-J2细胞紧密连接蛋白occludin、claudin-1和ZO-1的mRNA相对表达量,降低IPEC-J2细胞NF-κB信号通路相关基因的表达,对改善仔猪小肠上皮细胞屏障功能具有积极的作用。     

冷季补饲对藏羊小肠形态发育及营养物质转运载体基因表达量的影响

本试验旨在研究冷季补饲精料或尿素-糖蜜型舔砖对藏羊小肠组织形态发育及营养物质转运载体基因表达量的影响。选择1.5岁、体重((29.4±1.79)kg)相近的健康藏系绵羊母羊18头,随机分为对照组(CON组)、尿素-糖蜜型舔砖补饲组(BS组)和精料补饲组(CS组)。CON组自由采食燕麦干草,BS组在CON组基础上自由舔食尿素-糖蜜型舔砖,CS组在CON组基础上补饲精料200g·只-1·d-1。进行60d的饲养试验后,对全部试验藏羊进行屠宰,采集小肠各段组织,通过制作组织切片及荧光定量PCR,测定小肠组织形态发育和营养物质转运载体基因表达量。结果表明:(1)补饲精料或舔砖均显著提高了藏羊消化能和粗蛋白质摄入量(P0.05),且CS组显著高于BS组(P0.05);(2)补饲精料或舔砖均显著提高了藏羊十二指肠、空肠及回肠绒毛宽度(P0.05),且CS组均显著大于BS组(P0.05),补饲精料还显著提高了十二指肠和回肠绒毛高度(P0.05),显著降低了空肠和回肠隐窝深度(P0.05);(3)胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin-like growth factor binding protein,IGFBP5)mRNA表达量在十二指肠和空肠黏膜中CS和BS组均显著高于CON组(P0.05),且CS组显著高于BS组(P0.05),在回肠黏膜中CS组显著高于BS和CON组(P0.05);(4)十二指肠黏膜中L型氨基酸转运载体1(L-type amino acid transporter 1,LAT1)、阳离子氨基酸转运载体1(Cationic amino acid transporters 1,CAT1)、小肽转运载体1(Peptides transporter 1,pepT1)、钠依赖型葡萄糖转运载体1(Na+-dependent glucose co-transporter 1,SGLT1)及促葡萄糖转运载体2(Facilitative glucose transporter 2,GLUT2)mRNA表达量CS组显著高于BS和CON组(P0.05),空肠黏膜中CAT1、pepT1mRNA表达量和回肠黏膜中CAT1、LAT1、SGLT1及GLUT2mRNA表达量,BS组显著高于CS和CON组(P0.05)。以上结果表明,冷季补饲精料或尿素-糖蜜型舔砖均增加了藏羊对能量和蛋白质等营养物质的摄入量,促进了小肠组织形态发育,补饲精料提高了十二指肠黏膜中氨基酸、小肽及葡萄糖转运载体基因mRNA的表达量,而补饲尿素-糖蜜型舔砖提高了其在空肠和回肠黏膜中的表达量。     

鸡卵清蛋白基因5′调控序列表达载体的构建及其在鸡原代输卵管上皮细胞及鸡成纤维细胞的表达

将氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因与鸡卵清蛋白基因上游调控序列融合，构建了pCAT-3-OVP(鸡卵清蛋白基因5′调控序列）表达载体。将构建的载体与脂质体混合后制备转染液，转染鸡原代输卵管上皮细胞和鸡成纤维细胞进行瞬时表达。结果表明，在鸡原代输卵管上皮细胞，转染后48h表达量最高，为0．67μg/L;而在鸡成纤维细胞，不论有无类固醇激素存在，均不表达。结果提示，在输卵管细胞中存在细胞特异性转录因子。     

非反刍动物小肠内葡萄糖的吸收与调控

营养性碳水化合物被非反刍动物摄入后，在消化道内逐渐降解成葡萄糖等单糖以及少量的双糖。小部分葡萄糖在门静脉回流组织(PDV)中进行供能代谢，大部分被小肠绒毛吸收而进入门静脉。葡萄糖吸收是由小肠黏膜上的Na^ 依赖型葡萄糖协同转运1(SGLT1)、Na ／K ATP酶、葡萄糖转运子2(GLUT2)以及与吸收有关的调控因子共同完成。     

断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响

本试验旨在研究仔猪断奶后小肠黏膜钠葡萄糖转运蛋白1(SGLTl)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)mRNA表达的发育性变化规律及谷氨酰胺是否对SGLTl和GLUT2 mRNA的表达产生影响.选择21日龄断奶的杜×长×大仔猪69头,断奶当天屠宰3头猪,其余66头随机分成2组,每组3个重复,每个重复11头仔猪.对照组饲喂基础...     

二价金属离子转运蛋白的功能和表达调控

二价金属离子转运蛋白1(divalent metal transporter 1，DMT1)是动物跨膜铁转运蛋白，它主要是介导小肠上皮细胞的铁吸收以及参与铁从内吞小体跨膜转运到胞浆的过程。DMT1 mRNA有2种存在形式：“ IRE”和“-IRE”型，它的表达与铁呈依赖性关系。DMT1 mRNA调控主要是通过DMT1-IRE结合到IRP1的铁参与后的转录调控，但也存在其他未知的调控机制。文中对DMT1的主要功能和铁依赖性调控进行了综述。     

高、低淀粉饲粮对山羊小肠甜味受体信号通路基因表达的影响

本试验旨在探讨高、低淀粉饲粮对山羊小肠黏膜结构、肠道激素浓度、甜味受体及其通路元件基因表达的影响。试验选择体况相似的雄性湘东成年黑山羊20只,随机分为2组,每组10只,分别饲喂高淀粉(50.4%,HS组)和低淀粉饲粮(13.1%,LS组)。试验期38 d。结果表明:1)与LS组相比,HS组空肠和回肠的隐窝深度增加(P0.05),十二指肠和空肠的绒毛高度降低(P0.05);回肠黏膜中胆囊收缩素(CCK)(P0.05)和胰高血糖素样肽-2(GLP-2)(P0.05)及回肠内容物中胰高血糖素样肽-1(GLP-1)(P0.05)和酪酪肽(Pyy)(P0.05)的浓度均增加,但回肠黏膜和回肠内容物中胃泌素抑制肽(GIP)的浓度降低(P0.05)。2)2组间Ⅰ型味觉受体3(T1R3)、α-味移导素(α-gustducin)、瞬时受体电位离子通道蛋白M型5(TRPM5)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和钠/葡萄糖共转运载体1(SGLT1)在十二指肠、空肠和回肠中的基因表达量无显著差异(P 0.05),但HS组空肠α-gustducin基因表达量显著低于LS组(P 0.05)。3)相关性分析显示,回肠内容物葡萄糖浓度与回肠α-gustducin、TRPM5和SGLT1的基因表达量之间呈显著正相关(0.05 r0.30,P 0.05),而与空肠甜味受体关键元件T1R3与SGLT1的基因表达量之间的相关系数为0.93(P0.01),与空肠TRPM5基因表达量之间的相关系数为0.66(P0.01),与空肠GLUT2基因表达量之间的相关系数为0.48(P0.01)。综上所述,相比粗蛋白质和粗纤维,淀粉是甜味信号通路元件以及葡萄糖转运载体的主要影响因素,但高淀粉饲粮对发育成熟的山羊肠道黏膜结构及功能影响较小。     

催乳素刺激牛乳腺中脂肪生成基因的表达但不刺激葡萄糖转运蛋白的表达

在泌乳开始时,葡萄糖转运蛋白(GLUT)和参与乳脂合成的一些酶的表达呈显著增加,本试验旨在研究催乳素是否刺激这些基因的表达。试验分为:无激素(对照组)、胰岛素样生长因子Ⅰ组、胰岛素(Ins)组、胰岛素+氢化可的松+羊催乳素(InsHPrl)组、胰岛素+氢化可的松+催乳素+17β-雌二醇(InsHPrlE)组,牛乳腺组织培养采用激素处理48、72和96h。试验采用实时荧光定量PCR检测β-酪蛋白、α-乳清蛋白和甾醇调节元件结合因子1(SREBF1)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰基辅酶A羧化酶(ACACA)、stearyol-CoA去饱和酶(SCD)、葡萄糖转运蛋白1、葡萄糖转运蛋白8和葡萄糖转运蛋白12的相对表达量。结果表明,催乳素混合组InsHPrl和InsHPrlE处理96h后,乳腺组织块中β-酪蛋白和α-乳清蛋白mRNA的表达增加了数百倍,同时也极显著提高了SREBF1、FASN、ACACA和SCD基因的表达(P<0.01)。然而,InsHPrl和InsHPrlE处理72h后,GLUT1或GLUT8表达量无明显变化,而GLUT12表达量显著降低了50%(P<0.05)。单一催乳素刺激组的小鼠乳腺上皮细胞系HC11或牛原代培养乳腺上皮细胞中,GLUTs表达不增加。此外,在催乳素刺激的奶牛乳腺中,GLUTs表达也无明显变化。说明在泌乳开始时,催乳素明显的增加了乳蛋白和脂肪生成基因的表达,但并没有显著上调GLUT基因的表达。