不同MD免疫抗性鸡羽髓中疫苗毒与超强毒的复制动力学及相关性研究

为研究具有不同抗性的马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡羽髓后,疫苗毒和超强毒(vvMDV)的复制动力学及两种病毒载量的相关性,本实验对经火鸡疱疹病毒(HVT)FC126疫苗株免疫1周后(1wpv),攻击vvMDV Md5株G3系和G7系鸡羽髓中的HVT和vvMDV载量进行定量检测及相关性分析。结果显示,G3系和G7系鸡群羽髓中的vvMDV载量始终高于疫苗毒。其中,G3系鸡群在免疫和攻毒后的相同时间内,疫苗毒与vvMDV载量的消长规律基本一致,均在感染后第4周(4wpi)出现峰值,6wpi降至最低水平,两种病毒载量多表现为正相关,6wpv～8wpv为持续显著正相关;G7系的两种病毒的复制动力学存在差异:vvMDV载量从攻毒后第6周呈增长趋势,而疫苗毒在4wpv出现峰值后迅速下降,两种病毒载量多表现为负相关。本研究表明,免疫遗传基因在对病毒的抵抗中起主要作用,为MDV的感染机制和疫苗免疫机理的研究提供实验依据。     

超强马立克病病毒株的致病性研究

拟对一株超强马立克病病毒(MDV)SD2012-1株的致病性进行研究。将60只SPF鸡平均分成未免组、HVT免疫组和CVI988疫苗免疫组3组。于1日龄时对其进行马立克病(MD)疫苗免疫,于10日龄时进行SD2012-1攻毒;每天观察攻毒鸡临床症状,对病死鸡进行病理剖检和组织学观察;用PCR反应对感染鸡进行MDV跟踪监测。病理学研究结果显示:攻毒后第2周,试验鸡有轻微组织病变;攻毒后第6周,试验鸡有眼观病变,镜检有散在的肿瘤细胞团块;攻毒后第9周,试验鸡有明显的眼观肿瘤病变,镜检有大量肿瘤细胞聚集;SD2012-1可以突破CVI988疫苗免疫,引起高达30%的鸡发病。PCR跟踪监测结果显示:攻毒后第5天,未免组和HVT免疫组可检出MDV;攻毒后第10天,未免组和HVT免疫组阳性检出率均为100%,CVI988免疫组阳性检出率为30%;攻毒后第20天,3组试验鸡阳性检出率均为100%;用PCR检测病死鸡的肝、肾、肌胃、肠系膜、十二指肠、心和法氏囊样品的结果均为MDV阳性;攻毒300d后,健康存活鸡的羽髓PCR检测结果均为MDV阳性。结果表明,HVT疫苗对于SD2012-1株几乎无保护作用,超强马立克病病毒SD2012-1株能够长期在免疫鸡体内存在,突破免疫保护,引起发病,这对国内防控鸡马立克病提出了严峻挑战。     

血清3型火鸡疱疹病毒疫苗与血清1型CVI988疫苗的效力比较

用血清3型火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗和血清1型CVI988疫苗免疫SPF白来航鸡后,分别攻击国内马立克氏病(MD)标准强毒京-1株和国际MD标准超强毒(VVMDV)RB1B株。结果表明,HVT和CVI988免疫组攻击京-1株或RB1B株与相应攻毒对照组相比,保护指数差异极显著(P<0.01)。HVT和CVI988疫苗抗京-1株攻毒的保护效果相似(保护指数分别为93.75%和93%),而CVI988疫苗抗RB1B株的攻击效果优于HVT疫苗(保护指数分别为92.6%和75.3%),但差异不显著(P>0.05)。CVI988疫苗抗京-1株和RB1B株的效果(分别为93%和92.6%)无显著差异(P>0.05),HVT疫苗抗京-1株和RB1B株的效果(分别为93.75%和75.3%)存在一定差异,但差异不显著(P>0.05)。     

马立克氏病双价苗的研究Ⅲ.双价苗与单价苗免疫效应的比较病理学研究

选用SPF种蛋孵化的京白鸡60只,随机分为三组,即马立克氏病单价苗组(2000PFU HVT)、双价苗组(2000 PFU HVT 1200 PFU SB—1)以及攻毒对照组.应用组织学和透射电镜等手段对两种疫苗的免疫保护效应进行了比较病理学研究.结果证明,双价苗免疫鸡,MD发病数显著减少,发病时间推迟,病变程度明显减轻,法氏囊有大量具有分泌活性的浆细胞;单价苗免疫鸡发病数较对照组略有减少,但对延缓或减轻MD肿瘤的发生无明显作用,在法氏囊网状细胞胞浆中、核碎片附近和细胞间隙中存在大量无囊膜的马立克氏病病毒粒子,残存的细胞发生变性、坏死.由此认为,双价苗对实验性鸡马立克氏病的免疫效果明显优于HVT单价苗.     

表达马立克氏病病毒CV1988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB)基因构建成重组鸡痘病毒（rF-PV)。以MDV GA或Md5和RBIB混合攻毒，在不同品种的鸡中评价rFPV-gB/R单价苗和与火鸡疱疹病毒（HVT）组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明，MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中，rFDV-gB/R均能提供免疫保护作用，且其中一种商品蛋鸡中rFPV-gB/R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用，均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出，rFPV-gB/R与常规疫苗一样，可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。     

一株鸡马立克氏病毒的分离鉴定及其主要致病基因分析

吉林省某地区鸡马立克氏病（MD）疫苗免疫鸡群暴发MD,从发病鸡羽髓中分离到一株适应鸡胚成纤维细胞生长的马立克氏病毒（MDV）。该毒株感染无特定病原体（SPF）鸡可引起典型的MD临床症状：对非免疫鸡和火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗免疫鸡的致病率分别为76％和72％,二者无显著差异,表明HVT疫苗对该毒株不能提供有效保护。通过对该毒株病毒基因组中132bp重复序列、meq基因的核苷酸及推导的氨基酸序列分析,发现该毒株的132bp重复序列的拷贝数、meq基因的变异符合高毒力MDV毒株的特点。     

鸡马立克氏病疫苗免疫机理及其发展概况

马立克病毒(MDV)属于疱疹病毒，有3个血清型。血清Ⅰ型(MDV-Ⅰ)，包括致病性的强毒株和非致病性的弱毒株。血清Ⅱ型和血清Ⅲ型(MDV-Ⅱ，MDV-Ⅲ)为非致瘤病毒，临床上以外周神经、性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤的单性细胞浸润为特征。自20世纪70年代，多用抗MD的致弱血清Ⅰ株或HVT免疫鸡。1983年开始使用双价和多价疫苗，以保护鸡体抵抗毒力较强的MDV毒株。尽管疫苗免疫是相当有效的，但由于MDV毒力的不断增强，自20世纪90年代开始使用三价苗。     

MD疫苗免疫增强剂对MDV感染雏鸡免疫保护力的影响

本试验对鸡疱疹病毒苗(HVT)免疫的1日龄雏鸡和1日龄HVT+马立克氏病(MD)疫苗免疫增强剂免疫雏鸡分别在5日龄和10日龄攻击MD强毒后的免疫保护情况进行了对比观察,结果表明,MD疫苗免疫增强剂可明显提高HVT的免疫效果,使雏鸡提前获得免疫保护,从而降低MD的死亡率和病变阳性率。     

表达马立克氏病病毒CVI988／Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白B（gB）基因构建成重组鸡痘病毒（rFPV）。以MDV　GA或Md5和RBIB混合攻毒，在不同品种的鸡中评价rFPV－gB／R单价苗和与火鸡疱疹病毒（HVT）组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明，MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中，rFDV－gB／R均能提供免疫保护作用，且其中一种商品蛋鸡中rFPV－gB／R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用，均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出，rFPV－gB／R与常规疫苗一样，可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。     

MDV Z_4和HVT Fc_(126)在不同遗传抵抗力的CEF上的生长特性及研究

马立克氏病(MD)疫苗 Z_4和 HVT Fe-126病毒在对MD 病毒(MDV)有高度易感性的 P 系鸡、有高度抵抗力的 O 系鸡和普通非免疫鸡的鸡胚成纤维细胞(CEF)上形成的病毒蚀斑大小和数量均无显著差异.说明,CEF 对MDV 的易感性不受遗传因素的影响.MDV 血清2型 Z_4毒株和血清3型 HVT Fc_(126)株在 CEF 上的生长特性比较表明,Z_4毒株生长速度慢,蚀斑小,培养10天蚀斑大小为0.23mm~2,相当于 Fc_(126)毒株培养第4天时的水平.     

MDV—gB重组病苗病毒诱导免疫的检测及保护性

用MDV-gB重组痘苗病毒RVV-gB、HVT冻干疫苗、痘苗病毒WR株分别按试验程序对细胞免疫及体液免疫检测试验中的1日龄SPF鸡进行免疫接种，并于15日龄时对试验各组鸡用GA株强毒攻击，经IFA抗体检测，及以PHA为有丝分裂原的淋巴细胞转化检测，结果表明，重组病毒和HVT冻干疫苗免疫鸡均获得了较高保护，体液免疫效果差异不显著；细胞免疫效果在攻毒有差异不显著，但攻毒后第2d开始，RVV-gB免疫组鸡的淋巴细胞转化率明显高于HVT冻干疫苗免疫组鸡。     

用无细胞火鸡疱疹病毒疫苗对鸡进行抗马立克氏病接种

带有抗火鸡疱疹病毒(HVT)和马立克氏病(MD)疱疹病毒母体抗体的3个品系鸡群,在1日龄时用不同剂量的无细胞HVT接种。对这些鸡用MD强毒进行攻击,无论是注射攻毒还是接触感染攻毒,接种鸡都获得了保护,甚至当接种剂量为每只鸡250噬斑形成单位(PFU)这样的小剂量时,结果也是如此。用1,000PFU的真空冻干无细胞HVT疫苗或结合细胞HVT疫苗,对4个品系的肉用鸡和4个品系的白来杭鸡进行接种。在8或21个星期的实验期间内,没有发现MD肉眼病交频率有重大差异。     

鸡马立克氏病Z4＋HVT二价苗的免疫效力试验

用鸡马立克氏病(MD)血清Ⅱ型和Ⅲ型病毒制备了几种二价苗和单价苗。在实验室以高度易感的SPF鸡和商品鸡进行疫苗的免疫效力试验。结果表明,马立克氏病病毒(MDV)血清Ⅱ型毒株和Ⅲ型毒株之间存在协同保护作用。由血清Ⅱ型和Ⅲ型病毒组成的二价苗免疫效果明显优于单价苗。在以SPF鸡进行的免疫效力试验中,Z_4+HVT、SB_1+HVT、HVT、Z_4和SB_1的保护指数分别为78.9、78.6、41.7、46.7、和45.0;在以商品鸡进行的免疫效力试验中,Z_4+HVT、SB_1+HVT、HVT、Z_4和SB_1的保护指数分别为93.9、88.1、64.3、69.4和60.8。我们还用琼扩试验检查了强毒攻击后不同时期鸡羽囊排毒情况,发现Z_4+HVT二价苗抑制排毒的作用要比SB_1+HVT二价苗强。     

表达MDV—gB基因的重组鸡痘病毒免疫效果观察

将马立克氏病病毒（MDV）gB基因插入鸡痘病毒中，构建了含有MDV－gB基因的重组鸡痘病毒（rFPV)，用rFPV、火鸡疱疹病毒（HVT）冻干疫苗、rFPV HVT二联疫苗分别免疫1日龄AA肉用雏鸡，8日龄攻毒后观察免疫保护效果。结果表明，3种疫苗均诱导了免疫应答，免疫保护率分别为69％、69％和85％。该重组病毒疫苗的免疫效果与HVT疫苗的免疫效果相当，二者联用具有免疫协同作用。     

MDV对雏鸡血浆MDA含量与SOD活性的影响

为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在雏鸡马立克病(MD)发病过程中的作用,研究了雏鸡在人工攻毒后血浆MDA含量与SOD活性的动态变化.结果表明,攻毒组接种马立克病病毒(MDV)后第14天,血浆中MDA的含量显著高于对照组(P＜0.05),第7天和第28天高于对照组,第56天时基本接近;血浆中SOD活性在第7天时对照组显著高于攻毒组(P＜0.05),第14天和第28天高于攻毒组,但差异不显著.表明雏鸡在感染MDV后血浆中MDA含量显著升高,SOD活性明显降低,对雏鸡MD的发病诊断有重要的指导作用.     

不同马立克氏病抗性鸡攻毒后IL-18基因的差异表达

本试验致力于评价鸡白细胞介素-18(IL-18)基因的表达模式与马立克氏病抗性遗传性状的相关性。MDV-1分别感染7日龄普通品系和抗性品系的霞烟鸡,攻毒后第4、7、10、14、21、28、35天采集外周血并分离外周血淋巴细胞,利用实时定量PCR技术对外周血淋巴细胞中IL-18转录水平进行相对定量分析。结果表明,普通霞烟鸡外周血淋巴细胞中具有相对高水平的IL-18mRNA,而马立克氏病抗性霞烟鸡外周血淋巴细胞中则具有相对低水平的IL-18mRNA。结果显示,鸡IL-18基因的表达模式与马立克氏病(MD)抗性遗传性状可能相关。     

鸡马立克氏病免疫失败的原因及综合防制措施

鸡马立克氏病（MD）是鸡的一种高度接触传染性，并以淋巴细胞性肿瘤为特征的病毒病，广泛分布于全世界。70年代初应用火鸡癌疹病毒（HVT）疫苗成功防制MD，但80年代以后，世界各地屡屡发生HVT免疫失败，致使由MD引起的经济损失大幅度上升。1996年收检鸡病例348例，鸡马立克氏病78例，占22．41％，为鸡各类疫病之首。1病原及临诊特征MD的病原为鸡马立克氏病病毒（MDV），为鸡疮疹病毒科、鸡瘤疾病毒1型，HVT为鸡疤疹病毒D型。MDV及其相关的病毒分为3个血清型，即：I型包括MDV强毒（VMDV）、超强毒（VVMDV）及由它们致弱的变异…     

对几种血清Ⅰ型鸡马立克氏病疫苗的比较性评估

本文比较了4种血清Ⅰ型马立克氏病(MD)单价弱毒疫苗及其与血清Ⅱ型和Ⅲ型病毒混合多价疫苗在安全性及效力方面的差异。以0 2ml的剂量皮下接种1日龄母源抗体阳性的雏鸡。接种后5天 ,所有的疫苗接种鸡及对照鸡都用MD强毒株—Md 5或RB1/B株攻毒。血清Ⅰ型单价疫苗的保护指数由56至80以上不等。Ⅰ型毒 +HVT(Ⅲ型)疫苗的保护指数亦有很大的提高。用HVT +SB -1或HVT +301B/1与Ⅰ型毒组成的三价疫苗 ,其保护指数特别高。实验结果表明 ,三价疫苗用于因MD造成的高死亡率鸡群或被MD超强毒污染的鸡群会大有裨益。马立克氏病会引起感染鸡群的严重死亡和污染。MD可通过使用MD单价或含双价、三价的多价疫苗而得到控制。本研究的目的在于评估几种MDⅠ型不同毒株单价疫苗及多价疫苗对母源抗体阳性雏鸡的安全性和有效性     

鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂对机体T淋巴细胞免疫功能影响的研究

辽宁省益康生物制品厂研制的鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂(MMZ)与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗(HVT)同时免疫1日龄雏鸡后 ,可显著地提高机体T淋巴细胞免疫功能 ,增强疫苗的免疫效果 ,应用MMZ HVT免疫组与疫苗免疫组 ,对照组的T淋巴细胞阳性率( %)有显著差异(p<0.05)。     

马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂的安全性、攻毒保护率及现场应用试验

对自行研制的马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂进行了安全性、攻毒保护率及现场应用试验.结果表明,该复合剂应用于1日龄SPF雏鸡安全可靠;与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗联合应用,免疫1日龄SPF雏鸡可使其有效抵抗马立克氏病病毒强毒攻击;该复合剂在2℃～8℃下保存4年后仍然有效;其现场应用效果明显,可确实提高HVT疫苗的免疫效果.