牛结核PCR诊断试剂盒检测某奶牛场结核病的报告

本文采用自发研究的牛结核病PCR诊断试剂盒,对某奶牛场856头份奶牛血液和奶样进行检测,共检测阳性牛16头份,阳性检出率为1.87%,检出时间为6小时,同时,采用PPD的检测方法进行了检测,检测阳性牛17头份,阳性检出率为1.98%,两种方法的检测符合率为94.12%。试验表明:PCR试剂盒在检测牛结核病标本中显示出快速、特异等优点。为今后牛结核病的检测工作提供了一条新途径。     

牛分枝杆菌esat6和cfp10蛋白的表达及在临床检测中的应用

本研究以牛分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增esat6和cfp10基因,构建重组表达载体p ET-32a(+)-esat6和p ET-32a(+)-cfp10,并通过原核表达系统分别表达重组esat6和cfp10蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化后,对目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot验证,BCA法测定目的蛋白浓度,最后将east6和cfp10蛋白混合后用于牛结核病临床检测,并对检测数据进行分析。结果表明,牛分枝杆菌esat6和cfp10蛋白在大肠杆菌系统中获得高效表达;其混合蛋白应用于结核病检测具有较高的特异性,且在皮肤变态反应和IFN-γ释放试验两种检测方法中具有较高的符合率。说明相较于提纯结核菌素(PPD),esat6和cfp10混合蛋白具有较高的特异性和稳定性,将有希望替代PPD用于牛结核病检测。     

γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用

【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况,为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查,共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头,阳性检出率分别为1.15％和1.08％,总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测,发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应,且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时,先以变态反应检疫牛群,再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断,更有利于牛结核病的检测与净化。     

国产与进口牛型结核菌素在牛结核病检疫中的对比试验

牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人、畜、禽共患的慢性传染病,该病目前仍然是危害养牛业的主要传染病。牛结核病预防的唯一办法是检出感染牛,然后进行淘汰处理,最终建立无结核病牛群。我国检疫牛结核病的唯一指定方法是皮内变态反应,该方法也是最古老的方法,存在着许多不足之处,受人为操作和诊断试剂纯度的影响较大。笔者通过使用进口的牛型结核菌素与国产的牛型结核菌素进行皮内变态反应对比试验,探索牛的结核病检测方法。     

广西奶水牛结核病三种检测方法的比较

应用牛结核变态反应、PCR和分离培养3种方法,对奶水牛进行牛结核病检测,比较3种检测方法的符合率。结果表明,1850头奶水牛中有78头奶水牛的皮内变态反应结果为阳性,而对变态反应阳性的牛样品进行PCR检测和分离鉴定,分别鉴定出4份和2份牛分枝杆菌。阳性检出率以变态反应为最高(4.22%),PCR和分离鉴定的较低,分别为0.21%和0.11%。变态反应与PCR检测、分离鉴定的符合率较差,而PCR检测与分离鉴定的符合率相对较接近。因此建议,在对奶水牛群进行结核病检测时,应先以变态反应检疫牛群,再结合PCR检测进行综合诊断,更有利于奶水牛结核病的检测与净化。     

清镇市某奶牛场牛结核的检测与净化

采用结核菌素皮内试验和牛结核PCR诊断试剂盒,对清镇市某奶牛场牛结核病进行检测,并制定和采取了有效的防控和净化措施,使该奶牛场结核病由2012年的阳性检出率1.98%,下降到2013年的0.26%,该场牛结核病得到了有效控制。     

影响结核菌素试验敏感性的一些因素

结核病是牛常见的一种慢性传染病,尤其是奶牛,为了防止牛群发生结核病或结核病不断散播,奶牛场每年都要定期用结核菌素对牛做变态反应试验[1]。因此对结核菌素敏感性进行研究有助于提高检测方法的敏感性,减少假阴性。影响结核菌素试验敏感性的因素很多,现笔者总结如下,供参考。     

牛结核病监测与分析研究

[目的]掌握牛结核病的感染情况及其感染原因,逐步控制包括人在内的结核病的发病率,帮助奶牛养殖业持续健康发展.[方法]2010年下半年对乌鲁木齐周边地区部分牛用“提纯结核菌素皮内变态反应”方法进行了结核病监测.[结果]对监测结果数据进行统计分析显示:此次共监测牛1 052头,其中检出结核阳性牛5头,阳性率为0.47;.[结论]牛结核病零星散发,应做好检疫和扑杀工作.     

牛结核杆菌病PCR检测方法的建立及初步应用

根据PCR技术原理.建立了牛结核病PCR诊断方法,并测定出该方法的敏感性为1.025 Pg,茵细胞的灵敏度为200个茵左右.特异性试验表明,除牛结核分枝杆菌的特异扩增带(317 bp)外,其他的细茵均未出现特异性扩增带.采用PCR检测方法,通过对94份奶牛奶样的检测.得到牛结核分枝杆茵的阳性率为11.7%(11/94),PCR和胶体金方法检出率有明显的差异.PCR方法敏感性强,特异性高,是一种提高牛结核病临床诊断的好方法.     

牛结核病防治技术规范

在牛养殖过程中,牛结核病是一种慢性的消耗性的疾病,在养殖中如果出现了这些疾病需要我们及时的将疫情上报。这种疾病牛养殖产业和牛肉制品安全以及人类的健康构成了严重的威胁,因此,做好该种疾病的防治工作就显得十分重要了,但是由于牛结核病存在较长时间的潜伏感染,现阶段又无明显的诊断和治疗对策,所以牛结核病的防控难度较大。本文主要就牛结合结核病的发病流行特点、临床症状以及诊断方法进行分析,并提出了牛结核病的防治技术,希望通过本次研究对更好促进牛养殖产业健康的发展有一定的促进作用。     

重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白间接ELISA检测方法的建立

[目的]建立检测牛分枝杆菌的间接ELISA方法,快速区分致病性与非致病性牛分枝杆菌,为净化牛结核病提供技术支撑.[方法]以体外扩增表达并纯化的重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白为包被抗原,建立检测牛分枝杆菌的间接ELISA,并应用方阵法优化间接ELISA的检测条件.[结果]重组CFP-10蛋白间接ELISA的最佳检测条件为：以8μg/mL重组CFP-10蛋白包为被抗原,37℃下包被1h,再以5％脱脂奶封闭1h,血清（一抗）经1∶200倍稀释后作用1h,然后以1：500倍稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG（二抗）作用1h.该间接ELISA的阴阳临界值为0.281,仅与牛分枝杆菌呈阳性反应,与牛布鲁氏杆菌、牛口蹄疫病毒无交叉反应;其敏感性能检测1：320倍稀释的血清,批内与批间的变异系数均小于5.0％.[结论]建立的重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白间接ELISA具有特异、敏感等优点,临床上可用于致病性牛分枝杆菌的检测.     

ELISA方法在牛结核病诊断的应用

牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的一种人兽共患传染病,给奶牛养殖业和人类健康带来巨大危害。目前,牛结核病的诊断方法多种多样,本文综述了该病的ELISA诊断方法的特点及应用进展,并对该方法的应用进行展望。     

排除牛结核变态反应中禽结核干扰的研究

以牛型结核菌素和禽型结核菌素对黑龙江省部分地区300头牛进行牛结核病检测,按OIE、中国和欧共体对皮内变态反应判定标准进行结果判定,同时以ELISA方法对牛血清进行检测。不同方法不同标准检测结果的比较分析结果表明:在牛结核的检疫中存在禽结核的干扰,采用牛型结核菌素和禽型结核菌素皮内变态反应结合ELISA方法进行检疫可排除禽结核的干扰。     

ELISA方法在牛结核病诊断的应用

牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的一种人兽共患传染病，给奶牛养殖业和人类健康带来巨大危害。目前，牛结核病的诊断方法多种多样，本文综述了该病的ELISA诊断方法的特点及应用进展，并对该方法的应用进行展望。     

山羊结核病PCR检测方法的建立及初步应用

根据Gen Bank中的牛分枝杆菌的Pnca基因序列,设计了1对引物,建立了山羊结核病的PCR检测方法。扩增的阳性条带为241bp,特异性与敏感性结果显示,最低核酸检测量为0.62ng/L,同时检测羊大肠杆菌,羊链球菌,羊魏氏梭菌,金黄色葡萄球菌,羊多杀性巴氏杆菌,结果均为阴性。应用该方法对154份临床样本及864分血清(全血)进行检测,山羊结核病阳性率为43.5%,其PCR检测结果高于细菌学检测。结果表明,该PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床山羊结核病的早期快速诊断。     

牛结核病γ-干扰素检测技术

<正>1技术概述1.1技术基本情况牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人畜共患慢性传染病。近年来，人结核病阳性检出率逐年上升，世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”，1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”，并将每年3月24日定为“世界防治结核病日”。据报道，约有10.6%的人结核病是由牛分枝杆菌引起的，牛结核病中的7%是由人结核杆菌引起。2002—2020年大理市共检测奶牛52 761头，     

浅析牛结核病防治技术规范

牛结核病是一种常见的慢性、传染性疾病,一年四季均可发病。牛结核病不仅影响养殖户的经济效益,还会对养殖人员的人身健康造成危害,造成牛肉制品食品安全事故。但由于牛结核病潜伏期较长,且目前尚无明显的治疗方法,因此必须做好牛结核病的防范工作,采取针对性的防范措施,保证牛养殖业的健康发展。     

胶体金条在牛结核病防治中的应用

牛结核病是一种由牛分枝杆菌引起的慢性、消耗性人兽共患病,世界动物卫生组织(OIE)将牛结核病列入B类动物疫病,我国也在二类动物疫病中将其收录。该病对奶牛生产业造成巨大的经济损失,严重危害人类健康,威胁社会公共卫生安全。因此,科学防治牛结核病对于畜牧业发展、人类健康和公共卫生安全都具有重大意义。我们采用胶体金试纸条对该地区的牛群进行牛结核病检疫,及时扑杀阳性牛,积累了部分胶体金试纸条在牛结核病防治中的应用经验。     

开平市规模化奶牛场结核病监测报告

牛结核病是一种人畜共患的慢性消耗性传染病。既造成奶牛疾病,又导致产品质量下降,产量降低,还传染人类和其他动物。为了掌握开平市牛结核病的情况,对辖区内的大型奶牛场进行了4年的牛结核病的监测,结果表明未有结核病的发生和流行。     

牛分枝杆菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立一种检测牛分枝杆菌的SYBR Green I 实时荧光定量PCR,为防控牛结核病提供技术支持。【方法】根据牛分枝杆菌特异性基因序列（No. MBU87961,gi9954088）设计合成一对扩增牛分枝杆菌的特异性引物,从引物设计、各成分配比、样品采集及样品DNA提取等方面进行优化,并对建立的方法进行标准曲线、溶解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】牛分枝杆菌SYBR Green I实时荧光定量PCR的检测模板范围为1.0×109～1.0×10拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系,溶解曲线表现为单一波峰,Tm值为86.48～86.65℃。SYBR Green I实时荧光定量PCR的牛型分枝杆菌扩增结果为阳性,其他参试菌株均为阴性;可检测出10拷贝/μL的牛分枝杆菌DNA,敏感性是常规PCR的100倍;Ct值变异系数小于5%,重复性好;对50份PPD检测为阳性的牛鼻黏液、牛奶和淋巴结进行检测,其结果与常规PCR检测结果一致。【结论】建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR具有快速、便捷、准确等优点,适合于牛分枝杆菌的鉴别诊断。