寒冷环境对延边牛生理生化指标、免疫功能及抗氧化性能的影响

为研究寒冷环境对延边牛生理生化指标、免疫功能及抗氧化性能的影响，本试验选取同一批次、体重为400 kg左右、生理状态相同且健康的雌性延边牛20头，分别在秋季（2021年9月20日—2021年9月26日）、冬季（2021年12月10日—2021年12月16日）对其生理生化及免疫、抗氧化等功能指标进行比较。首先测定试验秋、冬季的THI从而确定秋季为非冷应激期，冬季为冷应激期。随后在试验期间测定延边牛的生理指标，试验最后1 d尾静脉采血并离心获得血清，用酶联免疫吸附剂测定血清中三碘甲状腺原氨酸（T3）、去甲肾上腺素（NE）、胰高血糖素（GCG）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、生长激素(GH)、促甲状腺激素（TSH）、总抗氧化能力（TAOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）等指标。结果表明：冷应激对延边牛产生了一定的应激，冷应激状态下延边牛的直肠温度、呼吸频率低于非应激状态（P<0.05），血清中T3、NE、GCG高于非冷应激状态（P<0.05）,ACTH、GH、TSH低于非冷应激状态（P<0.05），冷应激状态下的T-AOC、SOD、GSH-P...     

雏鹅冷应激反应中HPA、HPT轴应激激素相关基因表达调控规律

以7日龄皖西白鹅为试验对象,研究于(12±1)℃条件下进行急性冷应激处理时对HPA、HPT轴的影响.利用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)技术动态研究冷应激反应中应激激素相关基因TRH、TSH、CRH、ACTH基因mRNA的变化规律.研究结果表明,下丘脑TRH基因mRNA转录量在冷应激0.5h、3h、6h、9h...     

LINC24065在体细胞核移植牛中的异常表达

旨在揭示DLK1-DIO3印记域上一个新的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)LINC24065在自然繁殖牛(natural reproduction,NR)与体细胞核移植牛(somatic cell nuclear transfer,SCNT)中的组织表达与印记状态,对进一步了解DLK1-DIO3印记域在供体核重编程中的作用提供一定的理论基础。本研究以自然繁殖牛的大脑组织为试验材料,利用RACE和RT-PCR技术,在牛的DLK1-DIO3印记域内鉴定了一个新的印记的lncRNA基因,命名为LINC24065。用基于SNP(single nucleotide polymopisms)的RT-PCR产物直接测序方法分析LINC24065在自然繁殖牛和体细胞核移植牛组织中的表达及印记状态。序列分析发现,LINC24065编码6个可变剪接体,并在自然繁殖牛被检测的7个组织中都表达,而在体细胞核移植牛组织中没有检测到可变剪接体LINC24065-V3,且其它5个剪接体呈现组织特异性表达。印记状态分析发现,LINC24065在自然繁殖牛和体细胞核移植牛的7个组织中均为单等位基因表达,但在体细胞核移植牛的大脑组织中出现了与其他组织亲本来源不同的单等位基因表达。研究结果说明,LINC24065基因在体细胞核移植牛的大脑中出现了印记紊乱,并且剪接体在组织中的表达也发生了改变。以上研究结果说明LINC24065基因与体细胞核移植牛的发育异常有关。     

冷应激对荷斯坦奶牛与三河牛的维持行为和抗氧化性能的影响

研究冷应激条件下荷斯坦奶牛和三河牛的维持行为和抗氧化性能的变化规律,为奶牛选育和冬季饲养管理提供参考。选取第2胎的荷斯坦奶牛和三河牛各12头,随机分为4个处理组:分别对舍内(7℃~12℃)和舍外(-30℃~-16℃)荷斯坦奶牛和三河牛进行为期6d的行为观察和记录,在第7天早晨各组奶牛空腹进行尾部静脉采血测定抗氧化指标。结果表明,舍外冷应激环境条件下,荷斯坦奶牛和三河牛的卧息时间、反刍时间、排尿次数和排便次数显著性增加(P0.05),站立/游走时间和呼吸频率显著性降低(P0.05);同时血清T-SOD和CuZn-SOD的活力显著降低(P0.05),MDA含量显著增多(P0.05);另外,奶牛品种之间的维持行为和抗氧化性能无显著差异(P0.05),但总体趋势是荷斯坦奶牛各项测定指标变化略大于三河牛。结果显示,冷应激能够显著改变荷斯坦奶牛与三河牛的躺卧息、反刍和站立/游走等维持行为和抗氧化性能,而三河牛比荷斯坦奶牛更能适应高寒天气。     

热应激下齐兴肉兔睾丸组织的转录组分析

为研究公兔在急性热应激过程中相关基因的表达及响应的分子机制,本研究以齐兴肉兔公兔为实验对象,构建热应激公兔睾丸精子发生模型,提取热应激组和对照组睾丸组织总RNA,反转录建立cDNA文库,利用llumina Hiseq^TM测序平台进行转录组测序,对差异表达基因进行GO、KEGG富集分析及RT-PCR验证。结果表明:与对照组相比,热应激组已注释的有765个基因表达上调,37个基因表达下调。对差异显著基因进行KEGG通路富集分析,主要富集于胞吞作用、PI3K-Akt信号通路、核糖体、细胞黏附分子(CAMs)、MAPK信号通路等通路,最终筛选出3个与热应激反应、精子生成有关的基因进行RT-PCR检验,为精子发生的分子调控机制提供线索,并为耐热性家兔的育种提供理论基础。     

动物冷应激反应中多种基因调控机制的研究

冷应激可引起动物生产性能下降,诱发多种疾病,甚至造成死亡。研究动物冷应激发生机制,探索科学的应激监测方法,对提高应激预防水平,保障畜牧业发展有重要意义。动物应激可涉及多种基因表达的改变。作者简要综述了包括抗冻蛋白(AFP)基因、热休克蛋白(HSP70)基因、即刻早期基因(c-fos)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)基因在动物冷应激反应中的表达调控机制。     

长途运输应激对孕中期小鼠胚胎发育的影响

为研究运输应激对胚胎发育的影响机制,采用普通公路运输建立小鼠运输应激模型(1 000 km,15 h)。将27只孕中期(怀孕8～10 d)的小鼠随机分为对照组(13只)和应激组(14只),分析运输应激对胎儿发育的影响;之后2组小鼠随机挑选各3只,采用agilent小鼠全基因组表达谱芯片筛选长途运输应激小鼠垂体和子宫中的差异表达基因。选取6个差异表达基因,应用实时荧光定量PCR技术验证芯片结果的可靠性。结果表明:与对照组相比,长途运输导致活胎率下降和死胎率增加(P<0.05);在孕中期垂体中筛选到138个基因差异表达,其中71个基因表达显著上调,67个基因表达显著下调;在孕中期子宫中筛选到392个基因差异表达,其中73个基因表达显著上调,319个基因表达显著下调。对差异显著基因进行IPA分析发现,主要通路和生物功能涉及免疫和炎性疾病、细胞的生长、增殖和细胞间的相互作用、机能失调等;实时荧光定量PCR对akap3、Angptl4、Cartpt、insl6、thy1进行验证结果与芯片结果的表达趋势一致。     

慢性冷应激对放牧西门塔尔母牛免疫功能、抗氧化功能及血清激素分泌的影响

为研究慢性冷应激对西门塔尔母牛免疫功能、抗氧化功能及血清激素分泌的影响,选取在内蒙古锡林郭勒草原体况相近,体质健康的全年放牧西门塔尔牛母牛各8头,并于试验期最后1 d清晨进行颈静脉采血并制备血清,采用ELISA方法检测血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素释放激素(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)、生长激素(GH)、糖皮质激素(GC)、葡萄糖(GLU)及尿素氮(BUN)的含量。结果表明冷应激对西门塔尔母牛产生了较强的应激:与非应激期相比,冷应激状态下西门塔尔母牛血液中的T3、T4、ACTH、GC及GLU等血清激素分泌显著升高(P0.05),GH含量显著下降(P0.05),TSH及BUN含量差异不显著(P0.05);冷应激引起西门塔尔母牛血清中IL-2、IL-4、IgA、IgG和T-AOC含量显著降低(P0.05),MDA含量显著升高(P0.05),但IgM和SOD含量差异不显著(P0.05)。综上,冬季低温环境对西门塔尔母牛造成了较严重应激,HPA轴被激活,机体产热增加以抵抗低温应激;在低温应激刺激下,西门塔尔母牛免疫功能和抗氧化功能遭受严重破坏,说明西门塔尔牛对内蒙古草原冬季低温环境适应能力不足。     

慢性冷热应激对蒙古牛血清内分泌激素及抗氧化指标的影响

为了研究慢性冷热应激对放牧蒙古牛血液指标的影响,试验从锡林郭勒草原放牧的蒙古牛中采集夏、春、冬季的蒙古牛血清样品,采用ELISA方法检测蒙古牛血清内分泌激素、免疫指标以及与营养代谢相关的血液生化指标。结果表明:热应激期肉牛的肾上腺皮质激素(ACTH)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、生长激素(GH)含量显著低于冷应激期和非应激期(P0.05),而谷草转氨酶(GOT)活性在热应激期间则显著升高(P0.05);在冷应激期间,三碘甲状腺原氨酸(T3)、尿素氮(BUN)含量显著高于热应激期和非应激期(P0.05),热应激期和非应激期差异不显著(P0.05);丙二醛(MDA)含量在冷热应激期间显著高于非应激期(P0.05)。说明冷热应激对蒙古牛内分泌激素和抗氧化指标的影响是多方面的;机体通过内分泌系统的主要激素调节机体的生理功能,维持内环境的相对稳定,进而适应外界的环境应激。     

奶牛TLR2基因遗传变异与乳房炎体细胞评分的相关研究

选用中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛共207头奶牛为研究对象,采用PCR-RFLP和创造酶切位点RFLP（CRS-RFLP）技术对其TLR2基因进行多态性研究,发现TLR2基因第2外显子上T/G,G/A和G/A 3个突变,分别是EcoRⅤ,HaeⅢ和HhaⅠ限制性内切酶的酶切多态位点,其中T/G突变引起蛋白质氨基酸天冬氨酸/谷氨酸的变化。对3个酶切多态位点进行基因型分析,χ^2检验表明：中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛在3个酶切多态位点都达到了Hardy-Weinberg平衡。中国西门塔尔牛在3个酶切多态位点PIC为最高。运用SAS9.0软件,采用最小二乘拟合一般线性模型分析了3个酶切多态位点与中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛体细胞评分（SCS）的关系,结果表明：在这3个酶切多态位点中,只有EcoRⅤ酶切多态位点BB基因型个体的SCS显著低于AA和AB基因型个体（P〈0.05）,说明BB基因型可能为抵御乳房炎的有利基因型。     

慢性冷热应激对繁殖母牛血清指标的影响

本试验旨在研究慢性冷热应激对繁殖母牛血清生化指标、免疫指标、抗氧化性和内分泌激素的影响，评估可早期监测繁殖母牛冷热应激反应指示物。试验选取体重和胎次相近的繁殖母牛10头，分为对照组、冷应激组和热应激组，分别在秋季、冬季和夏季3个阶段进行，各试验期采集血样测定免疫生化等指标，温湿仪测定养殖场全年的环境温度和相对湿度，计算温湿指数（THI）。结果表明：全年THI监测显示夏季六、七、八月份属于轻度热应激；冬季一、二月份属于轻度冷应激，其余月份处于舒适区。血清指标测定分析发现总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、白细胞介素-4(IL-4)、雌二醇（E2）均呈现冷应激组>对照组>热应激组的规律，除GLB和GLU外，其余指标均差异极显著或显著（P <0.01;P <0.05）。MDA和IL-2冷应激组极显...     

奶牛热应激相关生理生化指标影响因素分析

为了研究胎次、泌乳阶段、挤奶等因素对奶牛热应激反应相关生理生化指标的影响,试验选用不同胎次、不同泌乳阶段的荷斯坦泌乳母牛59头,于夏季热应激期对奶牛进行直肠温度测定,收集血液样品,检测血清生化指标,采用固定效应模型进行因子分析。结果表明:热应激下,不同胎次奶牛直肠温度、皮质醇(COR)水平差异极显著(P0.01);不同泌乳阶段奶牛COR水平差异显著(P0.05);奶牛挤奶前后促肾上腺皮质激素(ACTH)水平差异显著(P0.05)。由于胎次、泌乳阶段、挤奶等因素对奶牛在热应激情况下的直肠温度和血清生化指标ACTH、COR水平会造成影响,因此在奶牛热应激相关研究中,应尽可能保证所选研究对象生理阶段等因素的一致性。     

KLF3基因3′-UTR区双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建与活性鉴定

试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs。首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经XhoⅠ、NotⅠ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与KLF3基因3′-UTR相互作用的miRNA;使用脂质体2000转染试剂将miRNAs mimics与构建好的KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶报告载体或突变载体共转染于常规培养的293T细胞中,检测荧光素酶活性。结果表明,KLF3基因3′-UTR可能是miR-21的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-21 mimics组(0.6900±0.0144)比突变组(1.000±0.0688)和空白对照组(1.000±0.0159)KLF3基因3′-UTR双荧光素酶基因报告载体和突变载体的活性降低了31%(P0.01)。本试验成功构建了含有KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶基因报告载体与突变载体,初步证实miR-21对KLF3基因有调控作用。     

冷应激对科尔沁牛与科尔沁牛杂交牛的生理指标及抗氧化功能的影响

为研究冷应激对科尔沁牛与科尔沁牛杂交牛生理指标及抗氧化功能的影响,试验选取了身高、体重、胎次相近的健康科尔沁牛与科尔沁牛杂交牛母牛各20头为研究对象,分冷应激期(2019年12月15—21日)和非冷应激期(2020年4月11—17日)两个阶段进行试验,在试验第7天测定两个品种牛的呼吸频率与直肠温度,以及血清超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC),分析在非冷应激和冷应激条件下两品种牛的呼吸频率、直肠温度及抗氧化功能差异。结果表明：两个品种牛在冷应激期内的呼吸频率、直肠温度均显著低于非冷应激期(P<0.05);两个品种牛在非冷应激期内血清SOD活性均极显著高于冷应激期(P<0.01),MDA含量均极显著低于冷应激期(P<0.01),T-AOC与冷应激期差异不显著(P>0.05);科尔沁牛杂交牛非冷应激期内血清GSH-Px活性与冷应激期差异不显著(P>0.05),但冷应激期科尔沁牛的GSH-Px活性比非冷应激期极显著降低(P<0.01)。在非冷应激期时,两个品种牛的呼吸频率、直肠温...     

冷应激对动物血清生化指标、抗氧化能力及免疫功能影响的研究进展北大核心CSCD

冷应激是畜牧业中较为常见的应激反应之一,能够显著影响动物的生产性能,甚至引起疾病、死亡,为北方高寒地区畜牧业带来严重困扰。动物处于冷应激环境时可导致机体生化指标和免疫指标的改变,其可直接反映动物机体组织器官、细胞机能、代谢物质的变化和免疫功能的状态。本文综述了冷应激对动物血清生化指标、抗氧化能力及免疫功能影响的研究进展,分析了冷应激环境中动物身体机能的变化及其适应性机制,旨在为研究冷应激发生机理和实践生产提供理论依据。     

热应激对肉牛血清内分泌激素含量、抗氧化酶活性及生理生化指标的影响

本试验旨在研究热应激对肉牛血清内分泌激素含量、抗氧化酶活性及生理生化指标的影响。选择9头8月龄体重(210±20)kg的健康锦江黄牛,分别测定非热应激期和热应激期牛舍环境温度和相对湿度,并测定试验牛血清中内分泌激素含量、抗氧化酶活性及生理生化指标。结果表明:1)热应激期试验牛的呼吸频率和腹泻率均显著高于非热应激期(P<0.05);在热应激期第1阶段,试验牛的直肠温度显著升高(P<0.05),而后逐渐恢复正常;2)与非热应激期相比,热应激期肉牛血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)含量显著降低(P<0.05),甲状腺素(T4)含量差异不显著(P>0.05);皮质醇(COR)含量在第20天显著升高(P<0.05),而后逐渐恢复正常;葡萄糖(GLU)含量在第60天降低了41.55%(P<0.05);超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(ALP)的活性在第40天明显下降(P<0.05);丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性显著升高(P<0.05)。这表明夏季高温高湿环境诱发了锦江黄牛的热应激反应,热应激牛表现为直肠温度升高,内分泌系统紊乱,抗氧化能力降低。但随着热应激时间的延长,试验牛直肠温度、血清内分泌激素含量逐渐恢复正常。     

慢性冷应激对舍饲蒙古牛血清代谢指标的影响

试验旨在研究慢性冷应激对舍饲蒙古牛下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴（HPA）、下丘脑-垂体-甲状腺轴（HPT）和交感-肾上腺-髓质轴（SAM）激素、血清免疫指标和抗氧化指标的影响。选取年龄、胎次相近的28月龄健康蒙古牛24头,根据环境温度和风速的变化,分为冷应激期与冷应激恢复期。冷应激期7 d,冷应激恢复期7 d。结果显示,冷应激期的环境平均温度为-12.5℃,牛处于冷应激状态;冷应激恢复期的牛处于非应激状态。与冷应激恢复期相比,冷应激期蒙古牛血清中促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质醇（COR）含量显著升高（P<0.05）,葡萄糖（GLU）含量显著降低（P<0.05）;中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、免疫球蛋白M (IgM)和免疫球蛋白G (IgG)含量极显著降低（P<0.01）,冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）、白细胞介素-4 (IL-4)和脂多糖（LPS）含量显著降低（P<0.05）,白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-2 (IL-2)和免疫球蛋白A (IgA)含量极显著升高（P<0.01）;超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量极显著降低（...     

高湿热条件下蜀宣花牛与西门塔尔牛、荷斯坦牛血液生化指标比较研究

为了明确地方牛种资源的耐热应激生化调节模式,试验测定了6—9月份高湿热环境下西门塔尔牛、荷斯坦牛和蜀宣花牛的血液生化指标。结果表明:7—8月份时,荷斯坦牛和西门塔尔牛血清中总蛋白、甲状腺素(T4)减少量极显著高于蜀宣花牛(P0.01);三碘甲腺原氨酸(T3)减少量高于蜀宣花牛;皮质醇(cortisol)、谷丙转氨酶(GPT)、肌酸激酶(CK)增加量均显著或极显著高于蜀宣花牛(P0.05或P0.01)。说明蜀宣花牛较西门塔尔牛和荷斯坦牛具有更强的抗热应激能力。     

中国荷斯坦牛HSPB8基因与热应激反应性状相关性研究

为筛选中国荷斯坦牛热应激耐受力相关遗传标记,本研究从细胞水平探究了HSPB8基因的表达变化及其多态与热应激反应性状的相关性。奶牛外周血单核细胞和牛肾细胞经42℃热处理后,HSPB8基因的表达水平极显著上调;采用DNA混池测序在1 665头中国荷斯坦牛中筛查到HSPB8基因的2个SNPs,通过竞争性等位基因特异性PCR对这2个位点进行分型,与3个热应激反应性状(直肠温度、呼吸评分和流涎指数)的估计育种值(EBVs)进行关联分析,并对2个位点的连锁不平衡情况进行分析。结果显示:位于内含子2的位点g.58406728GA与流涎指数显著相关,其中AA型和AG型个体的EBVs显著低于GG型;而位于3’UTR区的位点g.58406042AG则与直肠温度显著相关,AA型个体的EBVs极显著低于GG型。此外,2个位点具有较紧密的连锁关系,选取优势单倍型组合(H1H1、H1H2、H2H2)与各性状EBVs进行关联分析,3种单倍型组合与各性状EBVs均无显著相关。本研究证明了奶牛HSPB8基因的表达受热应激诱导,g.58406728GA和g.58406042AG位点可作为重要的遗传标记用于中国荷斯坦牛耐热性能的选育。     

奶牛TLR2基因EcoRⅤ酶切多态性与体细胞评分的关联分析

利用PCR-RFLP技术对中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛3个奶牛品种207头个体的TLR2基因进行多态性分析。结果表明:3个奶牛群体的扩增片段为448bp,PCR产物经限制性内切酶EcoRⅤ酶切后均表现出中度多态,其中中国西门塔尔牛PIC为最高,且3个奶牛品种在该基因座位均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。最小二乘值表明:该酶切多态位点对3个奶牛品种SCS的影响达到了显著水平(P<0.05),且BB基因型个体的SCS显著低于AA和AB基因型个体(P<0.05),说明BB基因型为抗乳房炎的有利基因型。