咖啡短体线虫分子鉴定

本实验采用单条线虫法提取DNA,rDNA-ITS-PCR技术扩增目的片段(ITS1、5.8S、ITS2和部分的18S和28S),将此片段纯化回收,克隆测序分析,与GenBank比对,结果为:该种群的基因序列与AY561436(基因库编号)的相似度为92.3%,与AB053485的相似度为91.3%.分子鉴定结果与形态鉴定该线虫为咖啡短体线虫.     

从尼日利亚进境的芋头中截获最短尾短体线虫

广东检验检疫技术中心植检实验室于2008年4月从尼日利亚进境的芋头中分离到数条短体线虫,经纯培养、形态观察、测量,以及对rDNA-ITS、D2D3区序列的扩增、克隆、测序分析,鉴定为最短尾短体线虫(Pratylenchus brachyurus(Godfrey,1929)Filipjev & Schuurmans Stekhoven,1941)。该线虫在国内局部分布,属于检疫性线虫,在系统内首次截获。     

日本盆景中截获的短体线虫与根结线虫的鉴定

2014年,天津口岸从日本进境盆景中截获3种短体线虫和1种根结线虫。通过形态学和DNA条形码方法将截获的短体线虫鉴定为朱顶红短体线虫(Pratylenchus hippeastri)、伤残短体线虫(P.vulnus)和穿刺短体线虫(P.penetrans)。根据形态学并结合特异PCR和DNA条形码方法,将截获的根结线虫2龄幼虫鉴定为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)。朱顶红短体线虫是短体线虫属非中国种,为我国进境植物检疫性有害生物,在挪威槭和榉树盆景中截获该线虫为国内外首次报道。     

四种短体线虫的形态和分子生物学鉴定

 采用形态学和分子生物学方法对来自荷兰的藏橐吾和铃兰、泰国的高山榕、缅甸的香蕉等种苗(球)分别鉴定出玻利维亚短体线虫Pratylenchus bolivianus、铃兰短体线虫P. convallariae、咖啡短体线虫P. coffeae和斯佩奇短体线虫 P. speijeri。对这4种线虫的形态特征进行较为详细的描述后,认为头环、口针、侧区、生殖系统和尾形等形态特征是种类鉴定的重要依据;进一步利用引物28S-D2A/28S-D3Br扩增测序得到上述4种线虫的28S rRNA基因D2/D3区序列,序列分析发现玻利维亚短体线虫从欧洲到美洲的不同种群之间的遗传距离变异较小,仅为0~0.007;铃兰短体线虫同一种群不同个体之间的遗传变异较大,为0.006~0.029;咖啡短体线虫不同种群之间的平均遗传距离为0.013;斯佩奇短体线虫不同种群之间的平均遗传距离为0.010;咖啡短体线虫P. coffeae和斯佩奇短体线虫P. speijeri亲缘关系很近,二者种间平均遗传距离仅为0.026。本研究再次证明线虫28S rRNA基因D2/D3区基因序列可作为短体线虫种间鉴定的依据。     

四种短体线虫的形态和分子生物学鉴定

采用形态学和分子生物学方法对来自荷兰的藏橐吾和铃兰、泰国的高山榕、缅甸的香蕉等种苗(球)分别鉴定出玻利维亚短体线虫Pratylenchus bolivianus、铃兰短体线虫P.convallariae、咖啡短体线虫P.coffeae和斯佩奇短体线虫P.speijeri。对这4种线虫的形态特征进行较为详细的描述后,认为头环、口针、侧区、生殖系统和尾形等形态特征是种类鉴定的重要依据;进一步利用引物28S-D2A/28S-D3Br扩增测序得到上述4种线虫的28S rRNA基因D2/D3区序列,序列分析发现玻利维亚短体线虫从欧洲到美洲的不同种群之间的遗传距离变异较小,仅为0～0.007;铃兰短体线虫同一种群不同个体之间的遗传变异较大,为0.006～0.029;咖啡短体线虫不同种群之间的平均遗传距离为0.013;斯佩奇短体线虫不同种群之间的平均遗传距离为0.010;咖啡短体线虫P.coffeae和斯佩奇短体线虫P.speijeri亲缘关系很近,二者种间平均遗传距离仅为0.026。本研究再次证明线虫28S rRNA基因D2/D3区基因序列可作为短体线虫种间鉴定的依据。     

4种短体线虫形态及rDNA-ITS的PCR-RFLP鉴定

 短体线虫隶属于垫刃目(Tylenchida Thorne, 1949),垫刃亚目(Tylenchina Chitwood, 1950),短体科(Pratylenchidae Thorne, 1949),短体亚科(Pratylenchinae Thorne, 1949),短体线虫属(Pratylenchus Filipjev, 1936),是一类重要的迁移性内寄生植物病原线虫 ^[1]。国内外已报道该属线虫百余种。其中我国已报道种类有P.alleni、 P.artemisiae、 P.coffeae、 P.crenatu、 P.cruciferus、 P.dioscoreae、 P.hexincisus、 P.loosi、 P.penetrans、 P.pratensi、 P.neglectus、 P.penetrans、 P.scribneri、 P.thornei、 P.varicaudatus、 P.vulnus及P.zeae 17种。近年来,随着世界各地贸易往来日益频繁,植物线虫的传播机会大大增加,我国口岸也先后从进境植物根围截获P.brachyurus、 P.neglectus、 P.zeae、 P.coffeae、 P.penetrans、 P.pinguicaudatus等。基于本类群线虫的重要性和国内以往的鉴定都主要单纯依据形态学特征,本研究结合形态学和rDNA的PCR-RFLP及序列分析技术对浙江和海南不同寄主上植物线虫调查时发现的4个短体线虫群体进行了鉴定。     

美国报道线虫新种达科他短体线虫

《Plant》 2021年1月17日在线刊文,Zafar Handoo研究团队在来自美国北达科他州的大豆土样中分离到短体线虫,经培养后发现其可侵染大豆并以其为寄主繁殖。该线虫群体为两性繁殖的短体线虫类群,进一步通过形态学研究并结合分子生物鉴定,确认该类群为不同于目前所有短体线虫的新种,以其发现地命名为达科他短体线虫(Pratylenchus dakotaensis n.sp)。     

日本进境无花果苗中短颈剑线虫的鉴定

短颈剑线虫Xiphinema brevicollum是我国重要的检疫性线虫, 寄生于植物根部, 影响寄主植物长势并降低产量。本文对青岛口岸进境的日本无花果Ficus carica苗中截获的一种剑线虫进行了形态学特征鉴定和分子序列分析, 为口岸进境植物线虫检疫提供参考依据。通过形态特征观察、测计, 以及18S rDNA、ITS1、28S-D2/D3区和线粒体COXⅠ基因序列系统发育分析的方法, 对截获的日本无花果线虫种群进行鉴定。截获的日本无花果线虫种群形态学和分子生物学特征与短颈剑线虫相似, 其主要形态特征为:虫体体型中等, 热杀死后向腹面弯曲呈开螺旋“C”形, 体长1 713.4～1 910.2 μm, 最大体宽35.8～47.1 μm, 两端渐细。唇区圆, 缢缩明显, 侧器囊漏斗状。齿尖针约为齿托长度的1.5倍, 齿托基部呈凸缘状;导环为双环;阴门位于虫体中部, 横裂, 阴道长度占阴门处体宽的1/3左右。生殖管对生, 均发育完全, 生殖管较短, 卵巢先端回折, 子宫内无特殊分化。尾短圆锥形, 背面弯曲, 腹面直, 尾尖钝圆, 尾长24.0～29.5 μm, 等于或略长于肛门处体宽。基于rDNA ITS1区构建的系统进化树, 该截获种群与短颈剑线虫巴西种群、新西兰种群、比利时种群及南非种群聚类成一个独立分支, 序列相似性达98.5%～98.7%;基于线粒体COXⅠ序列构建的系统进化树, 该截获种群与短颈剑线虫5个日本种群聚类成一个独立分支, 序列相似性达91.6%～93.6%。根据形态学和分子生物学特征分析, 此次截获的日本无花果线虫种群为短颈剑线虫, 并首次确认了无花果为该线虫的自然寄主, 海关检疫此类苗木进境时应重点关注该线虫, 降低传入几率。     

从进境旅客携带物中多次截获短体线虫(非中国种)

2008年4-9日,广州白云机场局检疫人员分别从尼日利亚、塞班、喀麦隆进境旅客携带的芋头香茅和花生黏附的土壤中截获短体线虫.     

进境新西兰苹果中欧洲枝溃疡病菌的分离和鉴定

从新西兰进境苹果的褐腐组织中分离得到1株新丛赤壳属菌株3072,对该菌株进行形态学特征观察、PCR检测、序列比对分析和致病性测定.结果 表明,在PDA培养基上菌落乳白色至黄白色,气生菌丝茂密,边缘规则;在MEA培养基上菌落为白色、平铺生长.菌株为异宗配合.利用欧洲枝溃疡病菌(Neonectria ditissima)特...     

山西省窖藏薯类块茎中2种短体线虫的种类鉴定

本文采用传统形态学与分子生物学相结合的方法,对采自山西省窖藏马铃薯和薯蓣块茎中的短体线虫进行了种类鉴定.结果 表明,从马铃薯块茎中分离出的短体线虫形态学特征与斯克里布纳短体线虫Pratylenchus scrib-neri一致,其SSU序列与P.scribneri美国群体相似性达99.8％.从薯蓣块茎中分离出的短体线虫...     

拟短体线虫属一新种

 甘薯拟短体线虫新种(Pratylenchoides batatae n. sp.)根据采自河北省卢龙县前双庙的甘薯根部及根际土壤中的一个拟短体线虫种群进行描述和作图。新种的主要鉴别特征是:唇区有5个唇环,侧区4条侧线并有网格纹,尾呈圆柱形、有24~26个体环,尾端圆、具粗纵纹。食道腺末端覆盖于肠背面,2个亚腹食道腺核均在背食道腺核之后,一个亚腹食道腺核位于食道-肠瓣门前的腹面、另一个位于食道-肠瓣门稍后。近似种为齿尾拟短体线虫(P. crenicauda),该种与新种的主要区别是:唇区3~4个唇环,侧区有6条侧线、无网纹,亚腹食道腺核一个在背食道腺核前、另一个在背食道腺核后。新种为两性种。模式标本保存于福建农林大学植物保护学院植物线虫学实验室。     

进境木质包装中豆伞滑刃线虫的鉴定

豆伞滑刃线虫由宁波出入境检验检疫局植检室验室于2004年6月首次从台湾的针叶木质包装中截获并报道以来,至今共截获17批次,分别来自韩国（6批次）、中国台湾（4批次）,日本（4批次）,印度（1批次）,马来西亚（1批次）和南非（1批次）.该线虫属松材线虫组,与拟松材线虫、松材线虫等十分接近.其主要鉴定特征是：雌虫尾圆锥形略向腹面弯曲,其腹面的边线较平直,而背面的边线明显呈圆弧形;尾尖长约2～4μm,渐细,有时呈丝状,位于腹面;雄虫交合刺较大（约36～40μm）,中间部分几乎呈直线.该线虫很容易与拟松材线虫等混淆,当形态学鉴定有困难时,ITS-RFLP方法是十分有效的辅助手段.我国大陆尚未有该线虫发生的报道.     

进境美国苜蓿草中截获的菊花滑刃线虫检疫鉴定

2016年,天津口岸检疫人员从美国进境饲用苜蓿草中发现一种滑刃属线虫,通过形态学特征、形态测计值以及核糖体28S r RNA-D2/D3区与ITS区核酸序列比对和系统进化分析,最终确定为我国检疫性有害生物菊花滑刃线虫(Aphelenchoides ritzemabosi)。从进境饲用苜蓿草中截获该线虫为全国口岸首次。     

几种主要短体线虫的鉴别

1988年6月1日,我所截获了昆明植物所某教授从英国引进的一批花卉苗木,共有10个属52个种100株。作者就其是否带有寄生线虫作了严格的检查,结果发现在 Myrtus lechlerana、Oleariacheegmanii、O.floribunda、O.gunniana、O.macrodanta、Rohdodendronpachysanthum和R.razorbiu的根中有多种寄生线虫,包括滑刃属 (Aphelenchoides)、茎属(Ditylenchus)、螺旋属(Helicotylenchus)、狭尾垫刃属     

进境新西兰猕猴桃中猕猴桃果腐病菌的检测与鉴定

对来自新西兰的猕猴桃进行了病原菌的分离培养,结果在果实中分离到2株疑似猕猴桃果腐病菌的菌株Na-3419和Na-4756。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Na-3419和Na-4756在PDA培养基上生长良好,能产生大量的分生孢子;经真菌通用引物(ITS4/ITS5)扩增和测序,菌株Na-3419与Gen Bank中登录号EU482221.1和EU482220.1的菌株序列同源性达到100%,菌株Na-4756与Gen Bank中登录号AY359230.1、AY359226.1和KR859079.1的菌株序列同源性达到100%;病菌接种猕猴桃3 d后开始发病。根据上述试验结果,将分离获得的菌株Na-3419和Na-4756鉴定为猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae)。这是上海口岸首次在进境的猕猴桃果实上截获该有害生物。     

新疆甜菜地落选短体线虫新纪录

从采自新疆伊犁哈萨克自治州新源县那拉提草原和博尔塔拉蒙古自治州博乐市青德里乡甜菜根围的土样中分离到一种短体线虫,通过形态学特征以及基于核糖体28S D2/D3区序列比较,证实其为落选短体线虫(Pratylenchus neglectus(Rensch,1924)FilipjevSchuurmans Stekhoven,1941)。该线虫的主要形态鉴别特征为:唇区有2个唇环;平均V=80.4%～82.7%;后阴子宫囊小于阴门处体宽;口针长17.5～18.3μm;受精囊退化;尾末端通常宽圆,但有时也呈平截状或指状。这是我国新疆首次发现该种线虫。鉴于该种线虫目前已在我国普遍发生,建议将该种线虫确认为中国种。     

从玻利维亚进境红檀木方中截获的天牛

珠海市九洲口岸在南美洲玻利维亚进境的红檀木方中截获3种天牛,分别为多毛驼背天牛(新称)Acyphoderes hirtipes(Klug,1825),红胫毛驼背天牛(新称)Acyphoderes rubrohirsutotibialis Tippmann,1953和四带刺尾虎天牛Placosternus difficilis(Chevrolat,1862).本文对其鉴定特征作了详细描述,并附成虫整体和主要部位的形态特征图.     

进境种苗线虫检疫及风险评估

本文汇总了2003～2008年我国进境种苗(球)的线虫检疫及其截获情况,截获线虫分属15科52属100多种线虫,其中检疫性线虫有13种(属),对主要种类进行了简要的风险分析,并提出限定的非检疫性线虫名单.     

进境木质包装截获线虫分析

近年来 ,随着改革开放的深入 ,广东对外经济交往日益增多 ,独资企业、三资企业如雨后春笋般不断涌现 ,且已呈现出由三角洲向梅州这样的山区腹地发展的趋势。对外经济的发展引发进境货物的增多 ,据不完全统计 ,自 2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 2年 1月 ,在梅州出入境检验检疫局报检的进境木质包装就达 2 2 7批 ,除此还有大量不在梅州局报检但目的地在梅州的木质包装及垫铺材料。除检出双钩异翅长蠹等危险性害虫外 ,还检出有检疫重要性的寄生性线虫 4科 6属共 1 7批次。1　截获线虫情况截获线虫的材料多是木质包装 (包括垫板及植物性垫铺材料 )。有…