利用黄瓜花叶病毒M和Fny株系 的假重组体分析致病关键因子

 用RT-PCR扩增黄瓜花叶病毒M株系（CMV-M）全长基因组cDNA,成功构建CMV-M RNA2和RNA3侵染性克隆后,与CMV-Fny基因组RNA交换得到3个假重组型病毒 （F1M2F3、F1F2M3、F1M2M3）。用F1M2F3、F1F2M3、F1M2M3分别侵染白肋烟,产生坏死环斑、轻微绿斑驳、明脉、黄白化和叶尖线性化等症状。根据假重组型病毒和野生型病毒的表观症状,分析引起各种症状的关键因子,初步判定：CP基因是诱导花叶症状的关键因子,CMV-Fny RNA2是诱导叶尖线性化的关键因子,CMV-M RNA2是诱导叶尖坏死斑关键因子。实时荧光定量PCR结果显示：野生株CMV-M、CMV-Fny和假重组体F1M2F3、F1F2M3、F1M2M3侵染烟草后引起的症状差异与病毒基因组RNA累积没有直接关系。     

筛选与黄瓜花叶病毒CP互作的寄主因子

黄瓜花叶病毒外壳蛋白是病毒最重要的致病因子。在病毒的侵染过程中扮演多种角色,尤其是对病毒侵染症状起了决定作用。本研究首先构建了烟草叶片c DNA文库,并将CP构建到酵母双杂交诱饵质粒上,利用酵母双杂交的方法筛选出与CP互作的寄主因子。结果显示,获得了高质量的烟草c DNA文库,并利用该文库筛选到与CP互作的多个潜在因子。     

京郊葫芦科作物花叶病毒的类型初报

从1957到1958年,在北京都区进行了瓜类作物花叶病毒的调查研究。在记述病作物症状的同时,还采集了各类花叶病株的标样,进行了病毒的常规鉴定。西葫芦的花叶病是一个严重的病毒病,鉴定的结果证明其毒原主要为典型的甜瓜花叶病毒(MMV),而且能侵染西瓜而产生系统性花叶症。在南瓜的花叶病标样中分离到的也是甜瓜花叶病毒,但是这个株系不同于典型的甜瓜花叶病毒,因为它们都不侵染西瓜。从黄瓜花叶病标样中分离出来的病毒全属于黄瓜花叶病毒种羣(GMV),其中可能有不同的株系,而秋黄瓜上却分离出了一个毒原,不侵染心叶菸,系统侵染普通菸和毛叶菸,在蔓陀蘿叶上产生局部枯斑而具有较高的致死温度(85℃)。作者认为这可能是一个新单元,称之为秋黄瓜花叶病毒(ACMV)。所有在甜瓜,哈密瓜及绞瓜上分离出来的毒原都是属于典型甜瓜花叶病毒的,但梢瓜(即白瓜)上的毒原都是黄瓜花叶病毒(CMV),没有广州报告的白瓜花叶花病毒。丝瓜花叶病的分离物类似甜瓜花叶病毒,但寄主范围远较狭隘,很可能是一个甜瓜花叶病毒的新株系。     

李痘病毒单克隆抗体及TAS-ELISA试剂盒的研制

将纯化的李痘病毒(Plum pox virus,PPV)制剂免疫BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与经李痘病毒免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选出2株稳定分泌李痘病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株3F1,7A8。用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定分别为IgG1、IgG3。间接ELISA方法测定腹水效价分别为3F1:1.0×106,7A8:1.0×105。以多克隆抗体为包被抗体、单克隆抗体为检测抗体的TAS-ELISA试剂盒与李痘病毒的D株系、M株系的病毒分离物均有反应,与同属的马铃薯A病毒、莴苣花叶病毒、西瓜花叶病毒2号、马铃薯Y病毒坏死株系不发生交叉反应。     

应用细菌磁颗粒RT-PCR检测3种植物病毒

根据细菌磁颗粒对植物病毒颗粒的非特异性吸附作用,建立了一种新的提取植物病毒RNA的方法。利用细菌磁颗粒收集黄瓜绿斑驳花叶病毒、黄瓜花叶病毒和百合无症病毒等3种病毒颗粒,富集分离后,通过高温使其裂解释放出病毒RNA,进行RT-PCR检测。与利用Trizol试剂提取这3种植物病毒的RNA相比,具有操作简单、无毒性,能够显著缩短提取时间。对黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测灵敏度验证表明:BMPs-RT-PCR与Trizol-RT-PCR的检测灵敏度相同,均为105倍的植物叶片组织稀释液。     

地高辛标记的cDNA探针检测烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒及马铃薯Y病毒

 根据已发表的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,分别以提取的TMV、CMV和PVY侵染的病叶总RNA为模板,反转录PCR进行体外扩增,分别得到长度为0.44、0.77、0.80 kb的目的片段,并克隆到pGEM-T easy质粒载体上,以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高辛标记的双链DNA探针。以合成的探针通过斑点杂交技术检测烟草病叶总RNA和烟草病叶汁液。TMV、CMV和PVY的3种地高辛探针检测各自感染的烟草病叶总RNA的稀释低限分别为1:1000、1:10000、1:320,检测各自侵染烟草病汁液的最大稀释倍数分别为1:100、1:100、1:10,而每种探针与健康烟草和其它2种病毒的反应均为阴性。     

马来西亚某些蔬菜作物病毒病的发生情况

马来西亚辣椒、甜椒、番茄、茄子、菠菜和黄瓜病毒病发生情况调查表明:80%以上的辣椒感染花叶病,并导致辣椒减产。鉴定了9个辣椒病株标样,其中3个标样由辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,CVMV)单独侵染,其余为两种病毒复合侵染,CVMV 和黄瓜花叶病毒普通株系(CMV—O)、CVMV 和烟草花叶病毒番茄株系(TMV-t)、CVMV 和 CMV 的辣椒株系(CMV-C)复合侵染分别占标样数的2,2,1,1。甜椒病毒病的发生率低于辣椒(由于绝大部分甜椒在塑料大棚栽培的缘故),鉴定     

油菜花叶病毒Wh株系的鉴定

依据病毒的寄主植物反应、血清学性质和RNA 3'末端含cp和mp基因1554 bp cDNA片段序列分析,明确一个侵染油菜的烟草花叶病毒属Tobamovirus病毒分离物是油菜花叶病毒(Oileed rape mosaic virus,ORMV)的一个株系,定名为Wh株系.ORMV-Wh侵染油菜、白菜和大白菜等十字花科的作物,初期产生典型明脉症状,对辣椒、番茄和烟草等茄科植物致病性弱;血清学与烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)有明显差异.ORMV-Wh mp、cp基因和3'UTR区段大小分别为798、474和235个核苷酸,mp和cp基因有77个核苷酸重叠;与TMV序列同源性在60%以下,与侵染十字花科Tobamovirus属病毒株系序列同源性在80%以上;其中与ORMV的不同株系RMV-CAB、RMV-Sh、YoMV、YoMV-Cg和CTMV-W的同源性在90%以上.     

雀麦花叶病毒核酸特性的研究

 对用两相酚法提取的雀麦花叶病毒E株系和G株系的RNAs进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳,其结果进一步证明RNA3a是BMVG株系中的一个新RNA组份。在昆诺藜上进行核酸侵染性测定,也再次证明其核酸的侵染需要RNA₁、RNA₂、RNA₃。而RNA3a和RNA₄对其症状表现也有一定的强作用。分别用BMV-E-RNAs和RNA3a做模板,合成其互补DNA（C-DNA）.采用NorthernBlot杂交分析法分别和E株系、G株系的RNA组份进行分子杂交实验,发现RNA3a和RNA3的核苷酸序列有同源性.这说明RNA3a属于RNA₃的亚基组份.而不是原来推测的卫星RNA.     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清制备

黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）是雀麦花叶病毒科Bromoviridae黄瓜花叶病毒属Cucumovirus的典型种。该病毒寄主范围广泛，能侵染85科365属1000多种植物。CMV除能单独侵染寄主植物外，还经常与TMV、PVY等复合侵染，给病害的田间调查和防治造成了困难。作者从山东青州的发病烟草植株上分离到了一个CMV青州分离物（命名为CMV-QZ），利用RT-PCR的方法克隆到了其外壳蛋白（coat protein，CP）基因，利用原核表达的CMV CP制备了抗血清，以期为CMV的准确快速检测提供依据。     

甘肃省18种药用植物病毒病调查及2种病毒病的鉴定

2012年6月至2013年9月对甘肃省宕昌县、漳县、岷县、渭源县、陇西县、临洮县等地区种植的具有疑似病毒病症状的半夏等18种药用植物进行调查及采样。采用黄瓜花叶病毒(CMV)、苜蓿花叶病毒(AMV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯X病毒(PVX)、芜菁花叶病毒(TuMV)等7种双抗体夹心免疫酶联检测(DAS-ELISA)试剂盒初检, 并对CMV和ToMV采用反转录PCR(RT-PCR)方法复检, 结果表明, 半夏、掌叶大黄和红花3种药用植物受到黄瓜花叶病毒(CMV)侵染; 马兜铃、土贝母及当归3种植物受到番茄花叶病毒(ToMV)侵染; 样品中未检测到上述其他病毒种类, 其余12种病毒样品的病原尚未确定。本研究为国内首次报道CMV病毒侵染掌叶大黄、红花, ToMV病毒侵染马兜铃、当归和土贝母。此研究为防治上述病毒病提供了依据。     

黄瓜花叶病毒两个甜瓜分离物的基因组及其侵染性克隆

为明确黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）甜瓜分离物的分子变异情况及其侵染性,对2个甜瓜分离物CH99和XH18的基因组进行克隆、测序和分析,并通过构建全长cDNA克隆分析其侵染性。结果显示,黄瓜花叶病毒甜瓜CH99分离物3条RNA长度分别为3 356、3 049和2 211 nt,甜瓜XH18分离物3条RNA长度分别为3 381、3 048和2 217 nt。分离物CH99与XH18的核苷酸序列一致性为89.40%～95.80%,氨基酸序列一致性为90.00%～97.80%,CH99分离物与其他CMV分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性平均值分别为79.23%～89.29%和73.52%～93.90%,XH18分离物与其他CMV分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性平均值分别为79.81%～89.83%和74.02%～95.14%。遗传发育分析显示,这2个分离物均属于亚组IB成员。接种试验结果显示,分离物CH99和XH18的侵染性克隆构建成功,这2个分离物均能系统侵染本生烟、甜瓜和黄瓜,并在本生烟和甜瓜上引起较严重的症状,在黄瓜上引起的症状较弱,而二者均不能侵染西...     

观赏百合感染黄瓜花叶病毒后的超微病变研究

 黄瓜花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CMV)是雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)的典型成员,寄主范围极其广泛,能侵染1000多种的单、双子叶植物.该病毒可经75种蚜虫传播,有些分离物还可通过种子传播,是寄主植物最多、分布最广、最具经济重要性的植物病毒之一^[1].     

携带eGFP的ZYMV侵染性克隆的构建及其侵染性

 小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)是瓜类作物主要病毒之一,严重威胁瓜类产业的可持续发展。本研究在ZYMV 甜瓜分离物CH-87侵染性克隆基础上,利用同源重组策略在NIb和CP编码序列之间插入了eGFP,命名为pXT1-ZYMV-eGFP。将pXT1-ZYMV-eGFP转化农杆菌并接种西瓜和甜瓜,结果发现pXT1-ZYMV-eGFP可以系统侵染西瓜和甜瓜,引起典型的花叶症状,在紫外灯下发病植株呈现绿色荧光。经摩擦接种证实,该克隆接种后所产生的病毒子代可以稳定的传播繁殖。研究表明携带eGFP的ZYMV侵染性克隆成功构建,可用于该病毒致病性及病毒与寄主互作的相关研究。     

芝麻坏死花叶病毒的鉴定

 自武昌芝麻坏死花叶病株得到1个病毒分离物,根据该分离物生物学特性、粒体形状、血清学性质、外壳蛋白分子量和核酸组分、大小,明确为自然侵染芝麻的一种新病毒,定名为芝麻坏死花叶病毒(Sesame necrotic mosaic virus,SNMV)。在人工接种7科38种植物中,SNMV侵染6科23种;体外稳定性状:稀释限点10^-4~10^-5,致死温度80~85℃,体外存活期限40d;病毒可通过土壤和接触传播。SNMV病毒粒体球状,表面有粒状突起,直径约32nm。制备病毒抗血清用琼脂双扩散方法测定效价为1:128。SNMV和红三叶草坏死花叶病毒(RCNMV)、甜三叶草坏死花叶病毒(SCNMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和花生矮化病毒(PSV)抗血清没有反应。病毒外壳蛋白亚基分子量为38 100道尔顿;核酸1个组分,大小约4700nt,另含RNA片段,大小约600nt,可能为卫星RNA。依据上述病毒特性,SNMV可能归属于番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)。     

北京地区辣椒病毒病毒原种类及黄瓜花叶病毒株系鉴定

近十年来,经鉴定,明确了北京地区辣椒病毒病毒原有7种,即黄瓜花叶病毒(CMV)占病株样品的55％,烟草花叶病毒(TMV)占26％,马铃薯Y病毒(PXY)占13.2％,烟草蚀纹病毒(TEV)占11.8％,马铃薯X病毒(PVX)占10.4％,苜蓿花叶病毒(AMV)占2％,及蚕豆萎蔫病毒(BBWV)占1.4％。其中CMV可划分为4个株系,即重花叶株系,坏死株系,轻花叶株系和带状株系。     

郁金香和百合主要病害、病原及鉴定方法

郁金香和百合是最重要的百合科球根花卉。病害是制约郁金香和百合产业健康发展的重要因素。本文介绍了国内为害郁金香和百合的主要病害和病原。国内为害郁金香和百合的主要病原真菌有镰刀菌、灰霉和炭疽菌;主要病原细菌有萎蔫短小杆菌、果胶杆菌属和迪基氏属软腐细菌;主要病毒有郁金香碎色病毒、百合斑驳病毒、百合无症病毒和黄瓜花叶病毒等RNA病毒。主要植物病原线虫有短体线虫、茎线虫和滑刃线虫。线虫取食伤害郁金香和百合的根、鳞茎和芽,促进病原真菌和细菌对植物的复合侵染;毛刺属和拟毛刺属线虫除侵害郁金香和百合,还作为介体向植物传播烟草脆裂病毒。为害郁金香和百合的线虫,南芥菜花叶病毒、草莓潜隐环斑病毒和番茄环斑病毒等RNA病毒是与郁金香和百合相关的主要进境检疫性有害生物。本文也介绍了鉴定这些病原的常规方法和新方法,为建立郁金香和百合主要病原的检测检疫体系提供技术理论支持。     

北京地区辣椒病毒病毒原种类及黄瓜花叶病毒株系鉴定

近十年来,经鉴定,明确了北京地区辣椒病毒病毒原有7种,即黄瓜花叶病毒(CMV)占病株样品的55％,烟草花叶病毒(TMV)占26％,马铃薯Y病毒(PXY)占13.2％,烟草蚀纹病毒(TEV)占11.8％,马铃薯X病毒(PVX)占10.4％,苜蓿花叶病毒(AMV)占2％,及蚕豆萎蔫病毒(BBWV)占1.4％。其中CMV可划分为4个株系,即重花叶株系,坏死株系,轻花叶株系和带状株系。     

系统侵染的番茄植株中黄瓜花叶病毒的时序变化

 采用实时荧光定量PCR (FQ-PCR)和DAS-ELISA方法,研究了22~26℃温室条件下番茄幼苗中黄瓜花叶病毒CNA株系(CMV-CNA)各基因组RNA组分及其外壳蛋白(CP)含量的动态变化,同时结合同期感病植株症状发展和病情指数,分析并探讨CMV各基因组RNA、CP以及病症显示程度之间的时间效应及其相关性。以18S rRNA为内参照,FQ-PCR相对定量分析结果显示:接种后5~30 d,CMV三分体基因组RNA在系统侵染的番茄组织中负荷量变化趋势大体一致,但是不同时期含量差异显著,均经历对数增长期、稳定期和回落期。其中,以RNA2负荷量变化情况最为平缓。DAS-ELISA检测结果显示:CP含量随接种时间延长而持续升高,但其对数增长趋势相对滞后于基因组RNA。番茄幼苗发病症状与CMV基因组RNA及CP负荷量的变化趋势大体一致,但症状表现时间相对滞后。CMV-CNA株系在番茄幼苗中以基因组RNA、CP以及病症显示先后次序出现高峰期,显示病毒基因组RNA及其CP在植物组织内负荷量的变化与植株症状表现并不同步。其动态变化规律将为研究CMV侵染机制,病毒与寄主互作及防病控病提供量化依据。