蒙药成分复方对乳房炎模型小鼠治疗作用的研究

旨在探讨蒙药成分复方对乳房炎模型小鼠的治疗作用。利用乳腺内注射大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合菌悬液的方法制备小鼠乳房炎病理模型;模型制备24 h后,阳性对照组、阴性对照组、蒙药成分复方组分别灌胃环丙沙星、生理盐水、蒙药成分复方水溶液,连续给药3 d,每天1次;于注射菌液后24 h(治疗前)和给药后72 h(治疗后),观察各组小鼠的临床症状、组织病理学变化,测定母鼠乳腺组织匀浆中的TNF-α、IL-6含量和乳腺内菌落数。结果表明,蒙药成分复方可以修复由大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染所造成的乳腺组织损伤,显著降低乳房炎模型小鼠乳腺组织中的TNF-α、IL-6含量和乳腺菌落数(P0.05)。蒙药成分复方可以治疗由大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合感染引起的小鼠乳房炎。     

金黄色葡萄球菌感染小鼠乳房炎模型的建立

取25只分娩8～10d的昆明系小鼠随机分成5组(n=5),分别为阴性对照、生理盐水(pss)组和不同剂量金黄色葡萄球菌(1.0×102cfu/50μL、1.0×103cfu/50μL、5.0×103cfu/50μL)试验组,经乳头导管对第4对乳腺50μL/只注射,24h后观察结果,一侧乳腺甲醛固定制作切片观察组织病理变化,另一侧冰上研磨后取匀浆用高盐甘露醇鉴别培养基进行细菌计数,检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示,试验组随着注射细菌数量的增加,病理变化加重,分离到的金黄色葡萄球菌数量显著增加,乳腺匀浆中TNF-α含量明显升高。结果表明,注射1.0×103cfu组可以引起较典型的小鼠乳房炎,且病理变化适中,适合用来建立金黄色葡萄球菌小鼠乳房炎模型。     

雪白睡莲花总黄酮提取工艺优化及其对金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型的治疗效果

为探索响应面法结合超声辅助提取雪白睡莲花总黄酮的最优工艺条件。本试验以雪白睡莲花为材料,在单因素试验的基础上,采用响应面法考察乙醇浓度、超声功率、提取时间对雪白睡莲花总黄酮得率的影响;采用牛津杯法结合倍比稀释法测定抑菌圈、最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC),研究雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌在体外的抑制效果;同时,构建金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型,定期检测各试验组小鼠乳腺组织中金黄色葡萄球菌的数量、TNF-α及IL-6的含量,观察小鼠乳腺组织病理学变化,研究雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型的体内治疗效果。结果显示,雪白睡莲花总黄酮最佳提取工艺条件为：乙醇浓度81%,超声功率60%,提取时间20 min,料液比1∶30 kg/L,提取温度60℃。在此条件下,雪白睡莲花总黄酮得率达到12.00%,与预测值11.99%相近。与小鼠乳腺炎模型组对比,雪白睡莲花总黄酮组小鼠乳腺组织中金黄色葡萄球菌的数量、TNF-α及IL-6的含量均显著降低(P<0.01),乳腺组织中的炎症细胞和红细胞明显减少。结果表明,采用响应面法对雪白睡莲花总黄酮提取条件进行优化合理可行...     

牛源金黄色葡萄球菌单链抗体治疗小鼠乳腺炎效果评价

引起奶牛乳腺炎的原因复杂多样,金黄色葡萄球菌是其中重要的病原之一。为探寻治疗奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂,本研究利用建立的小鼠金黄色葡萄球菌感染乳腺炎模型,将针对金黄色葡萄球菌牛源性单链抗体(scFv)的真核表达质粒pcDNA3.1-scFv33和pcDNA3.1-scFv73经第4对乳腺导管注入到处于泌乳期的乳腺炎模型小鼠的乳腺中,以通过scFv在小鼠乳腺内的表达来抑制细菌对乳腺上皮细胞的黏附从而达到防治乳腺炎的目的。结果显示,两个scFv治疗组乳腺内的细菌数量分别为4.52±0.37、4.38±0.32(lgcfu·mg-1),TNF-α的含量分别为29.55和42.29 pg/mg,IL-6的含量分别为48.38和21.74 pg/mg。与阴性对照组相比,scFvs治疗组乳腺内的细菌数量显著减少(P0.05),乳腺组织较完整,减少了炎性细胞的浸润,且TNF-α和IL-6的含量均显著降低(P0.05)。表明pcDNA3.1-scFvs对小鼠乳腺炎可能具有一定程度的保护作用,为进一步研究防治奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂探索了新途径。     

复方桉叶注射剂对金黄色葡萄球菌型小鼠乳腺炎的影响

奶牛乳腺炎是造成奶牛业经济损失最大的一种疾病.本试验利用金黄色葡萄球菌人工诱发小鼠乳腺炎,研究复方桉叶注射剂对实验性乳腺炎的治疗作用.与模型组相比,在接种后24h给药组小鼠乳腺组织内细菌数均显著降低(P<0.05),给药组小鼠血清中AKP、NAGase活力显著升高(P<0.05).在接种后24h,给药组小鼠乳腺组织中AKP活力、NAGase活性、LPO活力显著降低(P<0.05),IL-2显著增高(P<0.05).本试验表明复方桉叶注射剂能抑制金黄色葡萄球菌在乳腺内的繁殖,降低其对乳腺组织的损伤,发挥对乳腺的保护作用,同时能阻止炎症时中性粒细胞的迁徙,通过刺激IL-2的产生来缓解金黄色葡萄球菌感染引起的免疫抑制,减少乳腺组织的细菌数量,减弱炎症介质对细胞和血-乳屏障完整性的损伤.     

金黄色葡萄球菌ClfA基因表达产物在小鼠的免疫原性分析

为分析原核表达的金黄色葡萄球菌ClfA部分基因表达产物的免疫原性,作者采用PCR方法从奶牛乳房炎病例中分离的金黄色葡萄球菌中克隆出ClfA基因的部分片段,测序后用DNAman软件进行抗原位点分析。构建原核表达质粒ClfA-pET-28a+,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达。用His-bind柱纯化表达蛋白,加弗氏佐剂混匀后免疫小鼠。小鼠分娩后乳腺内攻菌,检查乳腺组织病理变化,乳腺组织中金葡菌数量和TNF-α水平来评价原核表达蛋白的免疫保护效果。结果显示转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导可以表达ClfA蛋白。原核表达蛋白抗原免疫小鼠可以显著降低乳腺组织内金葡菌数量,TNF-α水平也显著低于对照组和全菌蛋白抗原组,提示原核表达的ClfA蛋白免疫小鼠可以减少乳腺内金葡菌定植的数量,减轻乳腺内感染造成炎症的严重程度。本研究表明原核表达金黄色葡萄球菌ClfA蛋白有一定的免疫保护效果,为奶牛乳房炎疫苗的研究提供科学依据。     

金黄色葡萄球菌小菌落突变株感染小鼠乳房炎模型的建立

为了建立由金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony variants,SCVs)诱发感染乳房炎动物模型,本试验取40只分娩6~8 d的BALB/c小鼠,随机分成8组(n=5),分别为阴性对照、生理盐水组和不同剂量金黄色葡萄球菌SCVs及金黄色葡萄球菌质控菌株(1.0×10³、1.0×10⁴、1.0×10⁵ CFU/mL)试验组,对生理盐水组及各试验组小鼠第4对乳腺注射生理盐水和对应剂量的菌液(50 mL/只),注射后24 h解剖观察病理变化,一侧乳头制作石蜡切片,另一侧研磨后用ELISA检测试剂盒检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示,注射菌液的试验组,小鼠均出现不同程度的临床症状,乳腺出现不同程度的炎性症状和病理变化。同一注射剂量下,金黄色葡萄球菌质控菌株较金黄色葡萄球菌 SCVs病理变化严重,通过SPSS等软件对试验数据进行统计分析后得出,高浓度处理组金黄色葡萄球菌质控菌株的TNF-α表达量极显著高于金黄色葡萄球菌SCVs(P<0.01)。结果表明,金黄色葡萄球菌及其SCVs均可用来建立小鼠乳房炎模型,且金黄色葡萄球菌SCVs引起的情况较其正常株轻微,这一结果为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究提供了新的材料和有益的探索,为SCVs与慢性乳房炎更深层次关系的研究奠定基础。     

奶牛乳房炎多联菌苗预防小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎试验

为评价奶牛乳房炎多联菌苗对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎的防治效果,构建了金黄色葡萄球菌性乳腺炎小鼠模型,确定使试验小鼠100%发病的最小剂量。采用奶牛乳房炎多联菌苗免疫雌性小鼠,共免疫2次,首末免疫间隔14 d,首免后第7天免疫组雌鼠与雄鼠合笼,分娩后第10天对免疫组雌鼠进行攻菌试验,24 h后观察雌鼠体征和乳区外观变化,进行乳腺内细菌计数,测定发病率。结果表明,奶牛乳房炎多联菌苗免疫后可使小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎发病率降低83.3%。     

奶牛乳房炎多联菌苗预防小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎试验

为评价奶牛乳房炎多联菌苗对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎的防治效果，构建了金黄色葡萄球菌性乳腺炎小鼠模型，确定使试验小鼠100％发病的最小剂量。采用奶牛乳房炎多联菌苗免疫雌性小鼠，共免疫2次，首末免疫间隔14d，首免后第7天免疫组雌鼠与雄鼠合笼，分娩后第10天对免疫组雌鼠进行攻菌试验，24h后观察雌鼠体征和乳区外观变化，进行乳腺内细菌计数，测定发病率。结果表明，奶牛乳房炎多联菌苗免疫后可使小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎发病率降低83．3％。     

小鼠乳腺炎模型的建立及肿瘤坏死因子变化的研究

<正>乳腺炎是奶牛最常见的产科疾病之一,已成为影响奶牛养殖业发展的最严重疾病之一,不仅危害奶牛健康,降低产奶量,影响奶的品质,而且还降低奶牛的繁殖性能。引起奶牛乳腺炎的最主要的病原菌是金黄色葡萄球菌和无乳链球菌,其中金黄色葡萄球菌危害最严重。本试验用从乳腺炎病牛奶样中分离的金黄色葡萄球菌人工诱发小鼠乳腺炎,建立小鼠乳腺炎模型,通过ELISA法测定乳腺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化研究动物体乳腺感染情     

脂磷壁酸对小鼠乳腺紧密连接蛋白Occludin的影响

为了研究由金黄色葡萄球菌引起的乳房炎中紧密连接蛋白Occludin的变化,试验以脂磷壁酸(lipoteichic acid,LTA)刺激小鼠乳腺,通过H.E.染色观察小鼠乳腺的病理变化,Western-blot检测小鼠乳腺中Occludin的变化。结果表明:LTA刺激小鼠乳腺,使乳腺组织出现炎性反应。随着LTA刺激量的增加,进入乳腺腺泡内的炎性细胞数量增加,且紧密连接蛋白Occludin的表达量下降。说明乳腺炎发生早期泌乳量的减少和屏障功能减弱可能与紧密连接蛋白Occludin相关。     

活性己糖相关化合物对硫酸头孢喹诺预防和治疗乳腺炎模型小鼠的增强作用

为了提高硫酸头孢喹诺对小鼠乳房炎模型的防治效果,试验通过小鼠乳腺炎模型研究活性己糖相关化合物(AHCC)对硫酸头孢喹诺杀菌活性的影响,制订了预防性试验和治疗性试验两种方案。预防试验即在建立小鼠乳腺炎模型前给小鼠灌服AHCC 7 d,模型建立后连续3 d肌肉注射硫酸头孢喹诺(5组);治疗试验即在建立小鼠乳腺炎模型后连续3 d同时灌服AHCC和肌肉注射硫酸头孢喹诺(5组)。设空白对照组(1组)、阴性对照组(2组)及只灌服AHCC和硫酸头孢喹诺的3组和4组。结果表明:预防试验和治疗试验中,与1组比较,3组和5组的CD_4~+ T细胞和γ/δT细胞含量都能极显著增加(P0.001),并且局部乳腺组织含菌量降低,乳腺组织结构恢复完整。对比两种方案发现,AHCC的预防效果远优于治疗效果。说明AHCC联合硫酸头孢喹诺对金黄色葡萄球菌引起的小鼠乳腺炎的预防具有非常好的增强作用。     

NOD1/NOD2介导的信号通路在小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的作用

为研究NOD1/NOD2介导的信号通路在金黄色葡萄球菌(S.aureus)引发小鼠乳腺炎中的作用,本实验通过人工接种不同剂量的S.aureus复制小鼠乳腺炎模型,利用组织切片法观察小鼠乳腺病理变化,采用荧光定量PCR方法检测乳腺组织中NOD1、NOD2、下游的受体作用蛋白2(RIP2)、核转录因子κB(NF-κB)以及炎性细胞因子TNF-α、IL-6的m RNA转录水平。结果显示,接种S.aureus的小鼠乳腺组织中炎性细胞增多,NOD1、NOD2、RIP2、NF-κB、IL-6、TNF-α的m RNA转录水平比未接种对照组均显著升高(p0.05),TNF-α、IL-6的m RNA转录水平变化与NOD1/NOD2相一致。以上结果表明NOD1/NOD2受体及其介导的炎性信号通路参与了S.aureus感染小鼠乳腺的免疫反应。     

家兔临床型乳腺炎病理模型的制备

为建立家兔乳腺炎模型,本试验将从乳房炎患牛奶样中分离出的金黄色葡萄球菌制成104CFU/mL细菌悬液,并分别注入选取的16只3～4 kg健康泌乳家兔的第3对乳池内(1 mL/乳区),诱发乳腺发炎。观察临床表现,乳腺组织形态学病理变化,并于造模后72 h采集乳腺组织匀浆液进行回归试验。结果显示:①造模后动物出现急性炎症反应,表现为饮食欲降低,甚至废绝;体温、心率和呼吸频率显著升高;造模乳区严重肿胀。②造模乳区的乳腺组织镜检发现有炎性细胞浸润、组织结构破坏等现象。③回归试验全部呈阳性,其生长菌落为金黄色葡萄球菌。结果表明,金黄色葡萄球菌诱发家兔临床型乳腺炎模型与炎症的病理过程和炎性反应一致,可用作病理模型使用。     

S.aureus诱导的小鼠亚临床型乳房炎乳腺病理变化试验

乳房炎是奶牛最常见和危害最大的传染病之一,乳房炎动物模型和系统性的乳房炎病理变化研究是深入研究乳房炎的基础。本研究以分娩后7~12 d的C57BL/6小鼠为模型动物,将从隐性乳房炎的奶牛乳汁分离的金黄色葡萄球菌(S.aureus)50μL(1×107CFU)或等量的无菌生理盐水通过乳导管将缓慢注入小鼠第4、5对乳腺,分别于感染后2、4、8、12、18、24、36、48、60 h和72 h处死小鼠,对乳腺的病理变化进行了系统性的观察。结果显示,对照小鼠乳腺结构完整,连接紧密,腺泡腔充满乳汁,而试验组小鼠2 h即有免疫细胞出现,而且随着时间的推移乳腺内的免疫细胞数量逐渐增加,60 h时小鼠乳腺组织开始脂肪化退变。本研究结果,对奶牛乳房炎乳腺病理变化的研究具有参考意义,也为进一步进行乳腺免疫机制研究奠定了模型基础。     

金黄色葡萄球菌诱发建立乳房炎小鼠病理模型

为了建立小鼠乳房炎模型,将30只昆明小鼠随机分成3组,分别经第4对乳腺注入50μL的生理盐水、1.0×105CFU/mL和2.0×105CFU/mL的金黄色葡萄球菌,观察乳腺组织的外形和组织切片的变化;结果表明,注菌后24 h,小鼠出现明显的临床症状,乳腺出现不同程度的炎性症状,组织病理学显示腺泡腔内有大量嗜中性粒细胞浸润,泡腔间隔增宽。说明金黄色葡萄球菌能够诱发试验性乳房炎。     

中草药对乳牛乳腺炎主要病原菌的体外抗菌活性试验

采用试管二倍稀释法，测定了金银花、连翘和蒲公英等12种中草药及其复方制剂对乳牛乳腺炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌)的体外抗菌活性(MIC和MBC)。试验结果表明，金银花、连翘和蒲公英及其复方制剂对这4种病原菌均具有较强的体外抗菌活性。     

瓜蒌提取物对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎的保护作用和机制

乳腺炎是危害奶牛产业的重要疾病,其中金黄色葡萄球菌是诱发奶牛乳腺炎最常见、最重要的病原之一,一些研究表明瓜蒌具有很好的抑菌抗炎作用,本试验的目的是发现瓜蒌对金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎的抗炎作用并阐明机制,通过给小鼠灌服瓜蒌提取物7 d,乳腺注射金黄色葡萄球菌建立乳腺炎模型。结果表明,瓜蒌提取物对金黄色葡萄球菌引起的小鼠乳腺炎模型的抗炎作用可能是通过抑制了TLR4介导的NF-κB信号通路,瓜蒌提取物可能是预防乳腺炎的一种前景药物。     

金黄色葡萄球菌诱发小鼠乳腺炎模型的建立

近年来,国内外开始选用小鼠建立乳腺炎病理模型,成功解决了使用奶牛或奶山羊等动物成本太高或操作不便以及无法进行标准化管理的问题[1-2].但其在诱发小鼠乳腺炎的操作中对小鼠乳腺组织易造成人为的损伤,不能真实模拟奶牛乳腺炎的自然发病机制[3].本试验用乳腺炎病牛奶样中分离到的金黄色葡萄球菌人工诱发小鼠乳腺炎,成功建立了小鼠乳腺炎模型,为研究乳腺的免疫学、病理学、药动学、药效学和临床治疗等提供了试验平台,报道如下.     

17味中药及其复方对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验研究

[目的]探索17味中药及其复方对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果。[方法]本试验以山东省某奶牛场患乳房炎奶牛乳样中分离和保存的金黄色葡萄球菌作为研究对象,采用药敏试验和试管二倍稀释法,分别确定金黄葡萄球菌对17味中药的药物敏感性,测定最低抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,以此选取对金黄色葡萄球菌高度敏感的中药两两组合制成双联中药复方,并采用微量肉汤稀释棋盘法测定双联中药复方对金黄色葡萄球菌的MIC,计算双联中药复方的分级抑菌浓度（FIC）。[结果]黄芩、连翘和五倍子3味中药对金黄色葡萄球菌的抑菌表现为高度敏感;黄芩对金黄色葡萄球菌MIC和MBC的检测结果分别为7.813 mg/mL和15.625 mg/mL;连翘和五倍子2味中药对金黄色葡萄球菌MIC和MBC的检测结果分别为15.625 mg/mL和31.25 mg/mL;黄芩+连翘、黄芩+五倍子、连翘+五倍子3种双联中药复方对金黄色葡萄球菌MIC的检测结果均为15.625 mg/mL,且双联中药间均表现无关作用。[结论]对奶牛乳房炎金黄色葡萄球抑菌效果较好的单味中药组成复方后,其抑菌效果未必增强。