马立克氏病毒Z_4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ＿４毒株第１０代（Ｚ＿４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代全第３０代（Ｚ＿４－３０），Ｚ＿４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化。分别以Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０，Ｚ＿４－２５和Ｚ＿４－３０细胞结合毒作单价疫苗，将Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０和Ｚ＿４－３０细胞结合毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒ＧＡ株攻击，进行免疫效力试验。结果表明，Ｚ＿４毒株４个代次单价苗之间以及３个代次毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）毒株组成的二价疫苗之间免疫效力无显著差异。表明Ｚ＿４毒株在ＣＥＦ单层上从第１０代连续传至第３０代，仍然保持其原有的培养特性和免疫原性。     

马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒，而且成功地将ｇＤ基因与病毒前ＤＮＡ一起整合在ＣＥＦＤＮＡ中     

不同犊牛血清配制PBS培养液培养小白鼠胚胎的效果

不同犊牛血清配制ＰＢＳ培养液培养小白鼠胚胎的效果王文英，马世援，仲跻峰，宋杰，刘云波（山东省农业科学院畜牧兽医研究所济南２５０１００）（山东省医学科学院实验动物中心）在体外培养条件下，犊牛血清对维持早期胚胎的生活力是非常重要的。因此在胚胎移植实践中，...     

鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚肾细胞和气管环培养中的适应性…

将６株鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分别接种鸡胚肾细胞（ＣＥＫＣ）和气管环培养（ＴＯＣ）。６株病毒无论是否已经适应于鸡胚，都在气环培养中能引起病变。病毒适应于ＣＥＫＣ，是与病毒在鸡胚和细胞培养上的传代次数有关。分别用ＳＰＦ鸡胚、非免疫鸡胚和普通鸡胚制备在ＴＯＣＩＢＶ－Ｍ４１株的ＩＣ５０，结果用于ＳＰＦ鸡胚和非免疫鸡胚制的ＴＯＣ测定的ＩＤ５０都获得较镐滴度，而在普通鸡胚制备的ＴＯＣ中ＩＣ５０明显低。     

马立克氏病毒Z4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ４毒株第１０代（Ｚ４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代至第３０代（Ｚ４－３０），Ｚ４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化，分别以Ｚ４－１１，Ｚ４－２５和Ｚ４－３０细胞结合毒作单介疫苗，将Ｚ４－１１，Ｚ４－２０和Ｚ４－３０细胞结合毒分别与ＦＣ１２６细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒     

鸭胚肝细胞培养的研究

取１５日龄左右的鸭胚肝脏，经清洗、剪碎后，加入最终浓度为０．１２５％的胰酶，３７℃消化１５～２０分钟，以含犊牛血清的１９９培养基为营养液，置含５％ＣＯ＿２培养箱内培养７２小时，可制成鸭胚肝细胞单层培养物，若向培养基中加入１０％的鸭胚尿囊液，能促进细胞的生长，接种鸭肝炎病毒后，感染细胞可在４８小时出现ＣＰＥ，９６小时形成空斑。     

鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚肾细胞和气管环培养中的适应性比较

将６株鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分别接种鸡胚肾细胞（ＣＥＫＣ）和气管环培养（ＴＯＣ）。６株病毒无论是否已经适应于鸡胚，都在气管环培养中能引起病变。病毒适应于ＣＥＫＣ，是与病毒在鸡胚和细胞培养上的传代次数有关。分别用ＳＰＦ鸡胚、非免疫鸡胚和普通鸡胚制备的ＴＯＣ测定ＩＢＶ－Ｍ４１株的ＩＤ５０，结果用ＳＰＦ鸡胚和非免疫鸡胚制备的ＴＯＣ测定的ＩＤ５０都获得较高滴度，而在普通鸡胚制备的ＴＯＣ中ＩＤ５０明显低。     

猪流行性腹泻病毒的分离培养与鉴定

上海市农业科学院畜牧兽医研究所在上海郊区分离到一株猪流行腹泻病毒，以人工攻毒发病猪的小肠粘膜无菌处理后接种已长成单层的ＶＥＲＯ传代细胞，并在维持液中加入胰酶５０μｇ／ｍＬ和２％的小牛血清。     

传染性囊病病毒CJ801VP2基因cDNA的序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０，ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７．４％，９７．６％和９６．９％，与变异株，Ａ，Ｅ，ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６．５％，９６．３和９６．７％。     

添加物对小鼠腔前卵泡体外培养的影响

为探讨培养添加物对小鼠腔前卵泡生长成熟的影响,在培养液中分别加入不同体积分数的犊牛血清（ＦＣＳ）,牛卵泡液或添加促性腺激素,对小鼠腔前卵泡进行了培养。结果表明,５％以上犊牛血清明显提高腔前卵泡存活率,而１０％以上犊牛血清能明显促进卵泡的生长发育,２０％以上牛卵泡液可抑制卵母细胞的体外自发成熟分裂,并能促进腔前卵泡的生长发育,在不含犊牛血清的培养液中加入促卵泡素（ＦＳＨ）,促黄体素（ＬＨ）或ＦＳＨ＋     

鸡肾变型传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从上海地区具有肾变型临床特征的鸡群中分离到３株传染性支气管炎病毒（ＩｎｆｅｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＩＢＶ），分别取名为ＳＴ株、ＳＪ株、ＳＣ株。３株病毒通过鸡胚２～５代后，引起半数以上的健康鸡胚发育受阻，蜷缩或死亡，并随传代代次增加而强化；分离株对乙醚敏感，无血凝性，５６℃作用６０ｍｉｎ失去对鸡胚的感染力；１１日龄鸡胚ＣＥＩＤ５０为１０－５．５～１０－６．５；分别用ＳＴ、ＳＪ、和ＳＣ株的第４代培养物攻击１日龄雏鸡，４８～７２ｈ出现肾脏肿大，拉白色稀粪等特征性症状，５～７天全部死亡。ＳＴ株电镜观察病毒有典型的冠状结构，有纤突。     

蚜虫传毒专化性与病毒附着蛋白的关系

用免疫荧光标记研究发现,桃蚜下颚口针有非持久性病毒ＷＭＭＶ－２和ＴＥＶ的病毒附羊位点,距口针尖端４５～６０μｍ,结合区全长约４５～５５μｍ,病毒随着蛋白含有α－Ｄ－甘露糖残基。用０．２％ＤＯＣ溶液处理１ｈ可破坏病毒附着位点。用０．２％ＤＯＣ处理蚜虫后,分别饲取ＰＡＶ和ＧＰＶ,结果禾谷缢管蚜传播ＧＰＶ和ＰＡＶ的能力显著降低,麦长管蚜和麦二叉蚜则不能传播ＧＰＶ和ＰＡＶ。从禾谷缢管蚜虫体提取的ＲＰ１和Ｒ     

鸭病毒性肝炎发病机理的研究 Ⅲ．实验感染雏鸭血清生化指标的测定

鸭病毒性肝炎发病机理的研究Ⅲ．实验感染雏鸭血清生化指标的测定胡薛英，程国富，周诗其，熊道焕（华中农业大学畜牧兽医学院，武汉４３００７０）关键词鸭病毒性肝炎，发病机理，血清生化指标ＴＨＥＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥＰＡＴＨＯＧＥＮＥＳＩＳＯＦＤＵＣＫＬＩＮＧＶ...     

鸭源新城疫病毒和减蛋综合征病毒在同一鸭胚中增殖的观察

用鸭源新城疫病毒（ＮＤ）Ｄ１０株和减蛋综合征（ＥＤＳ—７６）病毒ＧＣ２株同时在同一鸭胚中复制增殖．结果表明：（１）两种病毒同时感染同一鸭胚后，鸭胚平均死亡时间（ＭＤＴ）７３．６ｈ，死亡率８８．２％（１５／１７）．胚体皮肤出血、淤血，绒毛尿囊膜水肿、增厚，尿囊液能凝集人和鸡红细胞．（２）尿囊液感染鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞，致细胞病变（ＣＰＥ），证实尿囊液中存在ＮＤＶ．用间接法Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ—７６病毒抗原，结果为阳性．（３）电镜观察经提纯浓缩后的尿囊液，可见到两种病毒粒子：ＮＤＶ形态不一，多数直径约１２０～１３０ｎｍ或更大．有囊膜；ＥＤＳ—７６病毒呈圆形，直径约７０ｎｍ，有囊膜．（４）用血凝试验（ＨＡ）测定两种病毒．其生长规律与单独接种时一致．（５）接种灭活的含毒尿囊液的雏鸡，在血清中出现抗两种病毒的ＨＩ抗体及抗ＥＤＳ－７６病毒的中和抗体，对ＮＤＶ强毒攻击有坚强的免疫力。     

浙江地区传染性法氏囊病毒野毒株鉴定及理化特性

将浙江省六个地市的７株鸡传染性法氏囊病的法氏囊组织处理后,直接在鸡胚上接种于成纤维细胞盲传２－１５代,均能不同程度产生特征性细胞病变效应（ＣＰＥ）,并通过病毒血清中和试验、动物回归试验、电镜观察、琼脂免疫扩张试验、理化特性测定等证实分离的７株病原为传染性法氏囊病病毒。     

牛血清中6种外源性病毒的液相芯片检测方法建立

为建立牛血清中6种外源性病毒(BVDV、BPV、BTV、REOV、BPyV、RABV)的液相芯片检测方法,根据6种病毒的高度保守区域设计引物和探针,通过杂交偶联检测,利用Luminex检测仪检测荧光信号,建立了牛血清中6种外源性病毒的快速检测方法。结果表明,该试验建立的检测体系具有良好的特异性和敏感性,其检测灵敏度可达50拷贝/反应。该研究初步建立了同时检测牛血清中6种外源性病毒的液相芯片检测方法,为牛血清的质量把关提供了技术支持。     

浙江地区传染性法氏囊病毒野毒株鉴定及理化特性

将浙江省六个地市的７株鸡传染性法氏囊病的法氏囊组织处理后,直接在鸡胚上接种于成纤维细胞盲传２～１５代,均能不同程度产生特征性细胞病变效应（ＣＰＥ）,并通过病毒血清中和试验、动物回归试验、电镜观察、琼脂免疫扩散试验、理化特性测定等证实所分离的７株病原为传染性法氏囊病病毒。     

天津地区辣椒病毒种群鉴定与分析

用ＡＰ－白蛋白ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法对危害本市郊县辣椒生产的４种主要病毒进行了检测,并分析了病毒种群的消长规律。检测结果表明,８０～９０年代的１０余年间ＣＭＶ侵染率明显下降,而ＴＭＶ、ＰＶＸ、ＰＶＹ则明显上升,４种病毒检出率排序由８０年代的ＣＭＶ－ＴＭＶ－ＰＶＸ－ＰＶＹ变成ＴＭＶ－ＰＶＸ－ＰＶＹ－ＣＭＶ。早春至盛夏ＴＭＶ、ＰＶＸ检出率急剧上升并保持较高水平,应作为主要的抗病育种的目标和防治的对象。ＣＭＶ、ＰＶＹ的侵染高峰出现较晚并主要以与ＴＭＶ、ＰＶＸ复合侵染形式出现,构不成主要的威胁,可作为次要的抗病育种目标和防治对象。     

鸡传染性法氏囊病毒的分离、纯化与抗血清的制备

采用鸡胚尿囊液培养传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）。将培养病毒的鸡胚尿囊液经高速离心，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀、蔗糖垫底超速离心、ＮａＢｒ密度梯度离心，可获得纯化的鸡传染性法氏囊病毒带。通过透射电子显微镜观察，表明ＩＢＤＶ颗粒呈六角形，直径约６０ｎｍ，无囊膜，其浮力密度为１．３０～１．３６ｇ／ｍｌ。实验所分离的病毒粒子的平均含量为１．７２ｍｇ／ｍｌ。用这种病毒免疫健康家兔制备抗ＩＢＤＶ的血清，获得了效价在１∶３２以上的抗血清，抗血清有较高的纯度和专一性     

转化CMV—cp基因番茄对CMV病毒抗性鉴定

苗期人工接种，对转化ＣＭＶ－ｃｐ基因的番茄品种８８０５Ｒ１－Ｒ４代进行接种ＣＭＶ病毒试验。结果表明：黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因在番茄中的表达，对抑制ＣＭＶ病毒症状的表现及延迟其发展均起到一定作用。８８０５Ｒ３代对ＣＭＶ的抗性明显高于Ｒ１代，Ｒ４代抗性已基本稳定。当高浓度的ＣＭＶ病毒侵染Ｒ４代植株时，也会出现１００％的发病率，但它们的新生枝叶能正常生长并开花结果。利用半叶法测定８８０５Ｒ４（ｃｐ＋）及