鸡传染性法氏囊病诊断

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease IBD)是由传染性法氏囊病毒(IBDV)引起的禽的一种淋巴组织坏死为特征的急性、接触性传染病.目前IBD在世界范围内呈广泛流行.近几年来在新疆地区时有流行,波及乌鲁木齐、昌吉、玛纳斯、克拉玛依、库尔勒、吐鲁番等地.1992年春,阿拉尔垦区某鸡场的小鸡突然大批发病,经临床症状、病理学、细菌学、病毒学等检查确诊为鸡传染性法氏囊病.1 发病情况及临床症状发病鸡大多在1月龄,个别鸡群1个半月龄.垦区13团某鸡场养殖40日龄鸡1100多只.发病300多只,发病率27%,死亡110只,死亡率10%,病鸡羽毛杂乱、蓬松、口渴、眼闭或半闭、战粟、脱水、眼窝凹陷,采食减少,精神萎顿.下痢,排水样稀粪.     

PCR引物设计方法综述

为了获得PCR引物设计的理想方法,笔者运用NCBI等数据库与引物设计软件Primer Premier 5.0等工具,结合引物设计的原则,完成目的基因的引物设计,并对设计后的引物进行BLAST比对、综合评价和基因的重新检测等分析,据此对PCR反应条件进行优化研究。结果表明,通过这些数据库和软件所设计的引物能基本满足后续的RT-PCR反应,可以进行进一步的分子生物学研究。     

牛CD18编码全基因特异引物设计与PCR扩增

为了获得牛整合素CDl8亚单位编码全基因序列以进行牛白细胞粘附缺陷病(BLAD)相关研究,采用DNAstar引物设计软件对网上牛CDl8mRNA编码全基因序列及其限制性内切酶酶切位点进行分析,设计一对PCR扩增引物,经PCR扩增条件优化后,获得含有CD18编码全基因序列的2350bpPCR产物。     

鸡传染性法氏囊病毒的分离、纯化与抗血清的制备

采用鸡胚尿囊液培养传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）。将培养病毒的鸡胚尿囊液经高速离心，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀、蔗糖垫底超速离心、ＮａＢｒ密度梯度离心，可获得纯化的鸡传染性法氏囊病毒带。通过透射电子显微镜观察，表明ＩＢＤＶ颗粒呈六角形，直径约６０ｎｍ，无囊膜，其浮力密度为１．３０～１．３６ｇ／ｍｌ。实验所分离的病毒粒子的平均含量为１．７２ｍｇ／ｍｌ。用这种病毒免疫健康家兔制备抗ＩＢＤＶ的血清，获得了效价在１∶３２以上的抗血清，抗血清有较高的纯度和专一性     

一株鸡传染性法氏囊病病毒基因组测序及其分子特征

[目的]测定一株鸡传染性法氏囊病病毒基因组序列及其分子特征。[方法]分离出一株具有特殊分子特征的鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）超强毒株（vvIBDV）HLJ-0504,并对其基因组进行了克隆和测序。[结果]序列分析显示,HLJ-0504的基因组A节段属于超强毒株,而其B节段则来源于另外一个独特的祖先。动物实验表明,HLJ-0504对SPF雏鸡的致病率和致死率分别为100%和86.7%。[结论]具有独特基因组B节段的vvIBDV仍在我国流行,我国IBDV的进化特征存在多样性。IBDV的毒力不是由基因组的A或B单独决定的。     

斑点免疫金银染色技术检测鸡传染性法氏囊病毒的研究

本研究成功建立了检测鸡传染的氏囊病毒抗原的斑点－免疫金银染色技术，并确定了操作流程的最佳试验条件。应用该法对纯化ＩＢＤＶ抗原的最低检出量为０．１９５３ｎｇ／点，其敏感性为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的８倍。特异性阻试验和交反应试验证明Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ具有较特异性。     

鸡传染性法氏囊病病毒dsRNA的提纯与应用

用传染性法氏囊病病毒（IBDV）攻击4周龄的非免疫鸡，以超速离心法从感染鸡法氏囊组织中分离、纯化IBDV，应用蛋白酶K消化和Trizol（异硫氰酸胍－酚－氯仿法）处理2种方法从纯化的IBDV中抽提dsRNA。通过低熔点琼脂糖割胶－酚－氯仿抽提可获得纯化的dsRNA，研究发现应用蛋白酶K消化获得的纯化RNA产量高，用其作模板进行RT－PCR可扩增IBDV基因组全长cDNA A片段和B片段、VP2基因和VP2－4－3基因。     

鸡传染性法氏囊病病毒福建株的分离与初步鉴定

从临床表现胸腿肌出血、法氏囊肿大出血为主要特征的病死鸡肝脾和法氏囊中分离到1株病毒（IBDV—FJ）。结果表明,该分离病毒无血凝性,在琼脂扩散试验中能与抗IBDV特异性血清出现1条清晰的白色沉淀线;人工感染28日龄雏鸡出现与临床一致的病变。并回收到病毒;应用针对IBDVVp3基因的特异性引物进行RT—PCR,能扩增到长度为1041bp的特异性目的片段;序列分析发现分离毒vp3基因与IBDv超强毒和经典毒株的核苷酸同源性分别为97．7%-98．2％和95．2％。初步鉴定该分离毒为鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株。     

鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定

从湖北省某鸡场疑似传染性法氏囊病的病鸡法氏囊内分离到一株病毒,根据临床症状、病理变化、病毒分离、动物回归、血清学检测及病毒核酸提取和部分序列的测定与分析结果,证明分离物为传染性法氏囊病病毒(IBDV),并且该病毒具有超强毒株的特征。     

家蚕表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的免疫原性初步研究(英文)

在家蚕培养细胞及幼蚕中表达传染性法氏囊病病毒（IBDV）主要宿主保护性抗原VP2蛋白的基础上,初步研究了该表达产物的免疫原性。Western免疫印迹和ELISA均检测到春蚕和秋蚕中的VP2蛋白活性。含VP2的春蚕蚕血制成的注射疫苗皮下注射18日龄非免疫鸡,两周后二免;含VP2的秋蚕蚕血冻干制成口服疫苗,隔天喂服18日龄非免疫鸡。于首免后第10,13,21,28,37日分别采血,第37日攻毒。病毒血清中和试验显示注射组及口服组的中和抗体滴度最高可达1∶4211.3和1∶3118.9,攻毒结果显示它们对IBDV中国标准强毒株BC6/85的攻击保护率为100%和80%。以上研究表明家蚕表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,从而为开发实用化低成本的疫苗打下了扎实基础。IBDV亚单位疫苗的口服免疫有效是一个重要发现。     

Effect of Astragalus polysaccharides on Erythrocyte Immune Adherence of Chickens Inoculated with Infectious Bursal Disease Virus

Two hundred and forty specific pathogen free leghorn chickens were randomly divided into four groups and reared in isolated pens. The tested chickens were negative to infectious bursal disease virus （IBDV） at 25 d old. Group 1 was treated with saline, whereas Groups 2, 3, and 4 were inoculated with 0.3 mL IBDV suspension intranasally the next day. Groups 3 and 4 were also administered with Astragalus polysaccharides （APS） intramuscularly twice daily at 5 or 10 mg kg-1 BW, respectively, until 31 d old. The erythrocyte-C3b receptor rosette rate （E-C3bRR） and the erythrocyte-C3b immune complex rosette rate （E-ICRR） were measured at 25, 29, 32, 35, and 38 d old. The results showed that IBDV significantly reduced E-C3bRR and E-ICRR when compared with the control group （P 〈 0.05）, while simultaneous administration of APS with 1BDV maintained E-C3bRR at similar levels to the control group （P 〉 0.05） and increased E-ICRR when compared with the control group and the group non-treated with APS （P 〈 0.05）. APS treatment reduced the morbidity and mortality of chickens inoculated with IBDV （P 〈 0.05）. The results suggest that APS may enhance the immune adherence of chickens erythrocytes by affecting the activity and/or the number of complement receptors on the erythrocyte membrane. These findings can be beneficial in providing an understanding of the basic mechanisms required for the rational application of APS in modern medicine.     

传染性法氏囊病毒HN株的分离鉴定及应用免疫荧光检测IBDV

河南郑州地区某养鸡场的三黄肉鸡出现精神沉郁,拉水样白色粪便,剖检可见法氏囊水肿、出血;肾脏出血肿大,有尿酸盐沉淀,呈花斑状;腿肌、胸肌有出血斑点;腺胃与肌胃交界处出血。经病毒分离、鸡胚接种、琼脂扩散试验和细胞接种试验,最后确诊为传染性法氏囊病。同时,采集病料,制备冰冻切片,建立一种检测病料中的IBDV免疫荧光检测方法。     

Study on Propagation of Chicken Infectious Bursal Disease Virus on Vero Cells Using Microcarriers in Fermentor

It was in flask optimization tests proved that 2% serum, pH 7.0, 5:10 000 inoculation concentration of infectious bursal disease virus (IBDV) and 108 hours cultivation for IBDV harvest after its inoculation were the optimal conditions when IBDV was propagated on Vero cells. 250 mi self-made spinner bottle and 5 L stirring fermentor tests proved that IBDV could maintain higher titers for a long time and the highest titers of IBDV in a spinner bottle and a fermentor were 8. 875 and 8.58 ( - lgTCID50/0.1 ml) respectively when IBDV was proliferated on Vero cells using 2 g/L microcarriers in a spinner bottle and a fermentor and was cultivated under the optimum conditions obtained from flask tests after Vero cells had developed a confluent monolayer on microcarriers, which were at least one titer higher than the highest titer in the traditional rolling bottle. All these results suggested that this technology could be applied to large scale production for IBDV.     

传染性囊病病毒VP2蛋白诱导细胞凋亡的研究

在体外分别构建了3种重组表达质粒，含传染性囊病病毒GZ911株VP2基因的pGVP2、含HK46株VP2基因的pHVP2以及含HK46株5‘-端序列（包括非编码区，VP5和VP2基因）的pHVP2 5用不同的重组质粒转染质代鸡胚成纤维细胞（CEF），在转染后0、14、38h，收集对照组和转染组细胞，用酶联免疫吸附试验检测CEF中降解DNA量，结果，在14和38h，各组细胞中测得的Dλ值均为转染pHVP2 5组最大，其次为转染pHVP2,pCVP2的组，并都大于其他对照组，表明2个IBDV毒株的VP2蛋白在CEF中表达后都能诱导CEF发生凋亡，但不同毒株的VP2蛋白诱导CEF凋亡的能力不则；VP5蛋白可增强VP2蛋白诱导CEF凋亡的作用。     

用ELISA检测传染性囊病病毒诱导的细胞凋亡

用５株传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）分别感染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测,试验结果显示,接毒组与对照组细胞的ＤＮＡ在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测各组细胞中降解ＤＮＡ量,发现感染ＩＢＤＶ７ｈ后,接毒组细胞降解ＤＮＡ量比对照组明显增加,且各接毒组间降解ＤＮＡ量有一定的差异,试验结果表明：各株ＩＢＤＶ均诱导ＣＥＦ发生细胞