雄性毛白杨离体叶片再生及抗虫基因转化

用雄性毛白杨试管植株无菌叶片作外植体，筛选出诱导不定芽分化、增殖和生根培养基。在组培室的光照条件下培养３７ｄ，平均每片叶产生２５个不定芽。已建立雄性毛白杨最佳转化和再生系统。用含有完全改造的Ｂｔ抗虫基因表达载体ｐＢ４８．７和部分改造的Ｂｔ抗虫基因表达载体ｐＢ４８．６转化雄性毛白杨，经在含有卡那霉素的培养基上选择和ＰＣＲ检测，已获得初步确定的转基因植株。     

苹果叶片再生的改进及转抗虫基因植株的获得

用分别含有全部改造和垢Ｂｔ基因植物表达载体ＰＢ４８，７和ＰＢ４８．６的土壤农杆菌转化苹果优良品种（红富士、早生富士、辽伏）的叶片外植体，经过对ＭＳ培养基成分调整，在Ｎ量保持不变的条件下以（ＮＨ４）２ＳＯ４取代ＮＨ４ＮＯ３，使得转化后再生频率大增，现已获得２３２株转化再生植株，这些植株可以在含５０ｍｇ．Ｌ＾－１的卡那霉素培养基上生长，选出部分植株作ＰＣＲ检测，表明Ｂｔ基因已被导入这些苹果品种中。     

导入抗逆基因的转双抗虫基因741杨的获得

为培育更多抗非生物胁迫的转基因杨树,以转双抗虫基因741杨(P.alba×(P.davidaiana×P.sirnonii)×P.tomentosa)为材料,建立了叶片诱导的转双抗虫基因741杨的高频再生体系,并采用根癌农杆菌介导法,探索了影响其遗传转化效率的主要因子。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA;继代培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA,最佳生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L IBA。对影响转化因子的研究结果表明,共培养时间为3 d时,不定芽诱导率最高;共培养培养基加入乙酰丁香酮、pH值调到5.2时,诱导潮霉素抗性芽效果最显著;最佳潮霉素筛选质量浓度为3 mg/L;将抗逆基因AtNDPK2通过农杆菌导入到转基因741杨中,经PCR检测,在抗性植株DNA中扩增出与目的基因大小相同的片断,初步确认目的基因已经整合到转基因741毛白杨基因组中。     

苹果叶片再生的改进及抗虫基因植株的获得

用分别含有全部改造和部分改造的Ｂｔ基因植物表达载体ｐＢ４８．７和ｐＢ４８．６的土壤农杆菌转化苹果优良品种（红富士、早生富士、辽伏）的叶片外植体，经过对ＭＳ培养基成分调整，在Ｎｔ保持不变的条件下以（ＮＨ４）：ＳＯ４取代ＮＨ４ＮＯ３，使得转化后再生频率大增，现已获得２３２株转化再生植株，这些植株可以在合５０ｍｇ·Ｌ－１的卡那霉素培养基上生长，选出部分植株作ＰＣＲ检测，表明Ｂｔ基因已被导入这些苹果品种中。     

转双抗虫基因741杨对杨扇舟蛾幼虫生长发育的抑制规律?

用转基因741杨叶片饲养杨扇舟蛾幼虫,观察记录幼虫的死亡、蜕皮情况以及各龄幼虫的体重,研究转基因741杨对靶标害虫生长发育的抑制规律。研究结果表明：取食转基因741杨后杨扇舟蛾幼虫的生长发育不良,表现为发育进度减慢、发育历期延长、体重增长速率降低。且对不同龄期开始饲养的幼虫和取食不同世代的幼虫抑制作用不同,从低龄开始饲养的幼虫生长发育受到的抑制作用强于从高龄开始饲养的幼虫。对取食2代的幼虫抑制作用强于取食1代的幼虫,转基因741杨对杨扇舟蛾幼虫生长发育的抑制作用具有持续性。     

转基因741杨抗虫性研究

采用群体和单体饲养的方法，用转双抗虫基因741杨叶片饲养舞毒蛾和美国白蛾幼虫，测定其死亡率、各龄期的发育速率、体重增加速率和取食效率。结果表明：4个转双抗虫基因的741杨株系对舞毒蛾和美国白蛾均有明显抗虫效果，主要表现为对低龄幼虫的毒杀作用和对高龄幼虫生长发育的抑制作用。用转抗虫基因杨树叶片饲养的昆虫幼虫死亡率均高于对照，最高可达100％，而且，可导致存活幼虫的不正常的发育，使其发育历期明显延迟，发育速率、体重增加速率和取食增长率均显著降低。     

108杨叶片再生体系的建立

[目的]研究欧美杨108离体叶片再生技术,为遗传转化研究提供科学依据。[方法]研究了外植体的消毒方法和不同激素组合对叶片再生和不定芽生根的诱导效果。[结果]茎段外植体消毒的最佳处理为：75%乙醇溶液消毒10s＋0.1%升汞消毒10min,污染率和褐化率均低,成活率较高;叶片诱导分化培养基以MS＋6-BA0.6mg/L＋NAA0.2mg/L效果最好,诱导率100%,平均不定芽诱导数为26.43个;最佳生根培养基为1/2MS＋IBA0.3mg/L或1/2MS＋IAA0.3mg/L,生根率可达100%,生根数分别为4.83条和5.20条。[结论]以108杨叶片为外植体,建立了108杨的高效再生体系。     

转双抗虫基因741杨不同月份嫩枝扦插苗木质量对比研究

试验对转双抗虫基因741杨在不同月份嫩枝扦插的假植苗的生长指标、水分状况、营养状况、原生质膜透性等方面进行了比较分析。结果表明,5月份扦插的苗木生长最快,但苗木分化较大,苗高变异系数达到33 17%,基茎变异系数达到40 04%。随着时间推移,苗木生长量降低,但变异系数减小,苗木生长也变得较为整齐。在自然状态下,不同月份扦插的苗木保水能力存在差异,扦插越早的苗木保水能力越强,越冬受低温伤害越轻。不同月份扦插的苗木失水后恢复生长能力也存在差异,5月份苗木质量较好,在失水5d后仍具活力。     

激素对转双抗虫基因741杨插穗生根率的影响

[目的]为转双抗虫基因741杨科学繁育、栽培提供依据。[方法]在大田上建设大棚,用沙壤土、河沙做基质,用各浓度吲哚丁酸+2,4-D、吲哚丁酸、ABT 6号处理插穗后进行扦插育苗,调查育苗效果。[结果]浓度100 mg/kg吲哚丁酸+2,4-D、吲哚丁酸、ABT6号处理的转双抗虫基因741杨插穗生根率均达100.0%。[结论]吲哚丁酸+2,4-D、吲哚丁酸处理可明显提高转双抗虫基因741杨插穗生根率。     

中国石竹叶片愈伤组织形成·分化及植株再生

[目的]为了研究中国石竹叶片愈伤组织的诱导及植株的再生。[方法]通过叶片愈伤组织诱导再分化和叶片直接诱导不定芽2种途径获得了石竹的再生植株。[结果]以植株中部带叶基的叶片愈伤组织诱导再分化效果最好。叶片愈伤组织在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L培养基中不定芽分化率最高(50%～60%)。幼叶在MS+NAA 0.3mg/L+6-BA1.0mg/L培养基上培养47d可直接诱导出不定芽。与愈伤组织分化成芽相比,幼叶直接诱导不定芽芽数少,但生长快,苗较高。最佳增殖培养基是MS+6-BA 0.2mg/L+IAA 0.2mg/L,最佳生根培养基是1/2MS+IBA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+0.2%活性碳。[结论]叶片作为外植体具有来源丰富、取材方便、操作简单的优点,探讨植物叶片的再生分化特性具有实际的意义。     

辣椒细胞质雄性不育系离体培养植株再生研究

以辣椒细胞质雄性不育系9704A和8214A为试材,取无菌苗真叶进行培养。研究了不同浓度的IAA,6-BA和GA3对不定芽的诱导和伸长作用,结果表明:MS 6-BA5.0mg/L IAA1.0mg/L有利于不定芽的诱导。MB IAA1.0mg/L 6-BA3.0mg/L GA32.0mg/L AgNO310.0mg/L有利于芽的伸长。将2.0cm以上的芽转入生根培养基诱导不定根发现:1/2Ms IAA0.3~0.5mg/L有利于不定根的诱导。     

Genetic Transformation of Brassica campestris L. ssp.pekinensis via Agrobacterium－ with Bt Gene

By means of Agrobacterium-mediated transformation, 43 kanamycin-resistant buds of Chinese cabbage were got. PCR, PCR-Southern blot and dot blot analysis were used to identify and characterize the putative transgenic plants. 26 plants had the predicted bands of the fragment of npt Ⅱ gene. Insect bioassays of 4 transformants showed that toxic protein had been translated and the translation levels were different among these transformants.     

甜瓜叶片高效再生体系的建立

为了建立高效稳定的甜瓜植株再生体系,为甜瓜的转基因技术提供受体材料,以薄皮甜瓜品种"西甜一号"叶片为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,研究了不同的激素组合、外植体放置方式、暗培养时间等条件对其再生的影响。结果表明,以新梢顶端展开的第2~3片叶在MS 6-BA1.0 mg/L的诱导培养基上,外植体远轴面向下接触培养基,直接转入正常光周期下培养再生频率可达100%,平均每个外植体上可诱导出11株健壮植株。在MS 6-BA 0.05 mg/L不定芽伸长培养基上,分化的不定芽(丛)能够伸长。在1/2MS IAA 0.2 mg/L的生根培养基上无根苗生根,生根率可达100%。     

转基因抗虫水稻的研究进展

本文综述了转基因抗虫水稻国内外研究的最新进展,阐述了利用生物工程技术进行转基因的程序和技术方法,指出了当前国内外转基因抗虫水稻研究存在的问题,提出了转基因抗虫水稻对人类安全性问题、昆虫产生抗性问题,并从基因构建、启动子选用等方面提出了解决途径     

植物基因的遗传转化方法

对现有主要植物基因的遗传转化方法进行分析,拟为植物转基因方法的选择提供借鉴。     

葡萄叶片植株再生及GFLV-CP基因的转化

利用无核白和黑王等12个品种的无病毒葡萄试管苗叶片为外植体,在NN69培养基(Nitsch and Nitsch 1969)试验了不同浓度的IBA和BA对其植株再生的影响.其中无核白、黑王、红地球和红宝石4个品种获得了稳定高频率的再生植株.以GUS基因为报告基因,通过根癌农杆菌介导,建立了葡萄离体叶片外源基因的遗传转化体系,而后将葡萄扇叶病毒外壳蛋白(GFLV-CP)基因转入葡萄叶片,通过卡那霉素筛选和PCR检测证明获得了转葡萄扇叶病毒外壳蛋白(GFLV-CP)基因的无核白葡萄植株.