显微荧光测定法对牛边虫病的诊断

由于特异性的问题,在诊断边虫病中,间接荧光抗体试验(IFA)还没有得到广泛的应用。用IFA与补体结合试验(CF)和卡片凝集试验(CA)进行比较时发现,IFA对鉴定已知感染牛最敏感,即假阴性很少,但对检验已知阴性血清特异性最低。在鉴定慢性感染动物时,IFA优于CF试验。     

J-亚群禽白血病病毒中国广东野毒株的分离与鉴定

通过接种鸡胚成纤维细胞、间接荧光抗体试验(IFA)和聚合酶链式反应(PCR)从疑似J-亚群白血病的病鸡中,分离鉴定出J-亚群白血病病毒。抗J-亚群白血病病毒gp85单克隆抗体JE9的IFA试验和PCR试验均证明病鸡被J-亚群白血病病毒感染。     

J-亚群禽白血病病毒中国广东野毒株的分离与鉴定

通过接种鸡胚成纤维细胞、间接荧光抗体试验(IFA)和聚合酶链式反应(PCR)从疑似J-亚群白血病的病鸡中,分离鉴定出J-亚群白血病病毒.抗J-亚群白血病病毒gp85单克隆抗体JE9的IFA试验和PCR试验均证明病鸡被J-亚群白血病病毒感染.     

姜黄素对罗曼蛋鸡产蛋性能、卵泡发育和抗氧化功能的影响

为了解姜黄素对罗曼蛋鸡产蛋性能、卵泡发育和抗氧化功能的影响，试验将健康的26周龄生产性能相近的144只雌性罗曼蛋鸡随机分为4组，分别为对照组(NC组)、NT1组、NT2组和NT3组，每组6个重复，每个重复6只。NC组饲喂不含姜黄素的基础日粮，NT1组、NT2组和NT3组分别饲喂添加50,150,250 mg/kg姜黄素的基础日粮，预试期7 d,正试期63 d。正试期每天统计各组产蛋性能指标。试验结束后测定各级卵泡数量，通过ELISA法测定血清生殖激素水平及抗氧化指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)],运用实时荧光定量PCR法测定卵巢FSH受体(FSHR)、LH受体(LHR)、E₂受体(ER)和P₄受体(PR)的mRNA相对表达量。结果表明：NT2组的产蛋率和小白卵泡(SWF)数量显著高于NC组和NT1组(P<0.05);NT2组和NT3组的FSH、LH、E₂及P₄水平显著高于NC组和NT1组(P<0.05),其中NT2...     

鸡肿瘤病料中马立克氏病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒共感染的研究

采用细胞培养、间接荧光抗体试验(IFA)、聚合酶链式反应(PCR)和斑点杂交(Dotblot)的方法从我国不同地区发生肿瘤的病料中同时进行MDV和REV的分离和鉴定。在分离到的13株MDV野毒株中，有4株培养物既能在IFA中与REV的单抗反应，又可以用PCR扩增出REV的LTR；另有4株培养物能扩增出REV的LTR，但在IFA中却不与REV的单抗反应。结果表明我国MD肿瘤中存在着REV的共感染，且我国MDV某些野毒株的基因组中有可能已经整合进了REV的LTR序列。     

纳他霉素对饲料防霉效果和营养价值的影响

采用饲料强化防霉和常规防霉的方法,探讨纳他霉素对饲料的防霉效果。试验选用自配饲料,分成7组,每组6个重复,每个重复2个平行。对照组不添加防霉剂,处理组分别添加500mg/kg丙酸钙、2.5、5、10、20和30mg/kg纳他霉素。结果表明:(1)饲料强化防霉试验外观结果表明,饲料中添加2.5~20mg/kg NT能够在储存期间缓解饲料霉变。饲料常规防霉试验外观结果表明,饲料中添加5~30mg/kg NT能够缓解饲料霉变,延长饲料的储存期。(2)饲料强化防霉试验中,与对照组相比,添加NT显著降低了5d和10d的饲料霉菌数(P0.05);15d时,添加2.5、5和10mg/kg NT组霉菌数量显著低于对照组(P0.05);20d时,与对照组和丙酸钙组相比,添加5mg/kg NT组饲料中霉菌数显著降低(P0.05)。饲料常规防霉试验中,0~15d时,各组饲料霉菌数量均无显著差异(P0.05);30d时,与对照组相比,10、20mg/kg和30mg/kg NT组饲料霉菌数显著降低(P0.05);45d时,添加20mg和30mg/kg NT组霉菌数量显著低于对照组(P0.05);60d时,各组饲料霉菌数无显著差异(P0.05)。(3)饲料强化防霉试验营养成分测定中,10mg/kg NT组饲料在5d、15d和20d时的粗脂肪含量均显著高于对照组(P0.05),其他组间差异不显著(P0.05)。饲料常规防霉试验营养成分测定中,在45d时,20 mg/kg NT组饲料水分显著低于对照组(P0.05),10mg/kg NT组饲料粗脂肪含量显著高于其他组(P0.05);60d时,5和10mg/kg NT组粗脂肪含量显著高于对照组(P0.05)。结论:综合各项指标,本试验建议纳他霉素在饲料中的适宜添加量为5~20mg/kg。     

鸡马立克氏病病毒(MDV)单克隆抗体(McAb)的研究——Ⅰ.抗血清Ⅰ型MDV-McAb的制备及其主要特性的研究

将MDV京-1株强毒高温致弱毒株(B-1/at)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物经冻融、超声波裂解和差速离心制成粗提高毒抗原,免疫6～8周龄雌性BALB/C小鼠。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,融合率为66％。用间接免疫荧光(IFA)法和间接ELISA法进行筛选,结果阳性率为25％,特异性阳性率为10.7％。通过有限稀释法克隆出D_(11)~3、D_(12)~3、和H_9~3三个分泌抗血清Ⅰ型MDV的McAb杂交瘤细胞株,其核内染色体数D_(11)~3为103±6条,D_(12)~3为96±6条,分泌的抗体均为IgG_1,k链。琼脂扩散试验(AGP)表明,无论有无聚乙二醇(PEG6000)存在,这些McAb均不产生特异性沉淀线,其IFA阳性反应能被特异性阳性血清阻断,经IFA、ELISA试验、IFA吸收试验和IFA、ELISA阻断试验等证明,这些McAb只与血清Ⅰ型MDV反应,不能与血清Ⅱ型MDV、血清Ⅲ型HVT和鸡的多种其它病毒发生交叉反应,也不与猪伪狂犬病病毒(Prv)双城株发生交叉反应,D_(12)~2株McAb有较明显的中和活性。经体内、外连续传代和冻存、复苏,两株细胞的分泌抗体能力稳定,     

间接荧光抗体试验诊断马骡伊氏锥虫病的研究

以人工感染伊氏锥虫的小鼠血液涂片为抗原,建立了IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体的方法,并对伊氏锥虫病马、同群马、健康马、非伊氏锥虫病马血清作了检测。伊氏锥虫病马和无症状同群马的抗体阳性率分别为97％(33/34)和12％(18/150);25匹健康马血清伊氏锥虫抗体均为阴性;84份非伊氏锥虫病马血清的IFA试验均为阴性,未出现交叉反应。多数病马发病一周内的血清IFA试验即为阳性。3匹病马血清抗体消长动态观察结果表明,病马于治疗后110天,血清IFA试验仍为阳性。本试验表明,IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体,敏感性高、特异性强,对无症状的感染马也能检出,可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B基因原核细胞表达产物单克隆抗体的制备

用大肠杆菌 BL2 1表达了马立克氏病病毒 (MDV)强毒 GA株的囊膜糖蛋白 B(g B)基因 ,通过 SDS- PAGE电泳分离表达蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过 EL ISA和间接免疫荧光试验 (IFA) ,得到 1株阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株 7C8。该单抗腹水的 EL ISA效价为 1∶ 2 1 2 ,IFA效价为 1∶ 80 0 ,与 MDV不同致病型毒株CVI988、GA、RB1B、MD11、6 48A株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)均呈 IFA阳性。1∶ 10 0稀释时与 GA株感染的 CEF在斑点酶联免疫吸附试验 (dot- EL ISA)中呈阳性。     

用直接凝集试验与间接荧光抗体试验检测弓形虫的比较研究

为了评价新建立的弓形虫直接凝集试验(DAT)，对DAT和常规的间接荧光抗体试验(IFA)作了比较研究。用两种方法平行检测了41份商品兔血清、76份人工感染的兔血清和271份人血清。定性和定量比较的结果显示；DAT与IFA有很高的符合率(93．4～95．9％)，DAT较IFA敏感，前者的几何平均滴度高于后者，在检测感染兔血清时，DAT远较IFA敏感。通过出较，作者认为DAT更适用于弓形虫感染的大规模筛选和血清流行病学研究。     

免疫荧光间接染色法与酶联免疫吸附试验、补体结合试验对马鼻疽诊断的比较

马鼻疽的血清学诊断,过去一直采用补体结合试验(cF)。近几年来,我们又相继建立了微量间接血凝试验、乳胶凝集试验、免疫荧光间接染色法(IFA)及酶联免疫吸附试验(ELISA)等比较敏感的检测方法。为了比较IFA、ELISA、cF三种方法对鼻疽马检测的敏感性,我们对31匹鼻疽马及10匹经病理学确诊的鼻疽马进行了检测,现将结果报道如下。     

猪蓝耳病活疫苗中猪瘟外源病毒检测

试验采用IFA法对2批随机抽样的PRRS活疫苗(每批4瓶)、阳性对照(CSFV)、阴性对照(未被CSFV污染的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV))和特异性试验检测病毒(猪圆环病毒2型(porcine circo virus 2 type,PCV-2))接种于生长良好的PK-15细胞进行间接免疫荧光染色检测CSFV,以期建立快速、准确的间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)调查猪蓝耳病活疫苗中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的污染情况;在不同时间、相同试验条件下,相同批次的疫苗被重复检测了3次。试验结果表明:阳性对照接种的PK-15细胞出现特异性黄绿色荧光,阴性对照、PCV-2和待检样品接种的PK-15细胞均未出现特异性黄绿色荧光,即待检2批PRRS活疫苗未被CSFV污染;通过3次重复操作,最终的检测结果一致,说明IFA检测猪瘟病毒包涵体的特异性强、敏感性高。     

猪瘟兔化弱毒间接免疫荧光鉴定方法的建立

为快速有效测定猪瘟疫苗病毒含量,建立了猪瘟兔化弱毒(HCLV)间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与兔体定型热试验方法进行了初步比较。试验结果表明,以冷甲醇固定ST细胞,将所选猪瘟活疫苗检验用阳性血清1:40倍稀释、荧光二抗1:32倍稀释时,IFA检测HCLV感染的ST细胞清晰、特异,检测猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒感染细胞阴性。对不同猪瘟疫苗半成品的检测结果显示,IFA测定半数组织感染量(TCID50)与兔体定型热试验测定兔体感染量(RID)具有较好的相关性,其拟合曲线为RID/m L=2.783TCID50/m L+110107.213。     

IFA和IPMA方法测定猪瘟兔化弱毒病毒含量

本研究使用间接免疫荧光方法(IFA)和过氧化物酶单层试验(IPMA)测定猪瘟兔化弱毒的组织半数感染量(TCID50)。优化了两种方法的一抗使用浓度;筛选了IPMA方法中敏感、易辨识的酶作用底物。优化后的IFA和IPMA方法测定猪瘟兔化弱毒疫苗半成品和成品的TCID50,可以作为兔体感染量(RID)和猪体半数保护量(PD50)效力检验标准的补充,应用到猪瘟兔化弱毒活疫苗生产中,加强质检、质控力度。     

单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立

以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。     

猪胸膜炎放线杆菌重组外膜蛋白LOLA诱导小鼠产生免疫保护力的研究

为筛选出具有广谱抗猪传染性胸膜肺炎作用的疫苗候选分子,本研究利用PCR技术从血清1型猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(App)基因组克隆外膜蛋白(Omp)lola基因。经生物信息学分析显示,App lola基因由633 bp组成,编码210个氨基酸,不同的血清型之间具有很高的同源性。将App lola克隆至pET-32a(+),转化大肠杆菌,表达重组蛋白rLOLA。取4周龄小鼠60只,随机分为6组,分别于0、2、4周经皮下免疫:弗氏不完全佐剂(IFA)+10μg rLOLA(低剂量组)、IFA+30μg rLOLA(中剂量组)、IFA+50μg rLOLA(高剂量组)、30μg rLOLA(rLOLA组)、IFA(对照组)和生理盐水(对照组)。ELISA检测结果显示,第3次免疫接种后相较于对照组(IFA组和生理盐水组),实验组小鼠血清IgG水平均明显升高,尤以高剂量组小鼠(IFA+50μg rLOLA)更显著(p0.01)。于第3次免疫后2周,利用10×LD50 App对小鼠腹腔注射攻毒,5 d后对照组小鼠全部死亡,30μg rLOLA、IFA+50μg rLOLA、IFA+30μg rLOLA、IFA+10μg rLOLA免疫组小鼠存活率分别为20%、40%、20%和10%。上述结果表明,IFA+rLOLA可以诱导部分抗App攻击感染的免疫保护作用。本研究为进一步研究广谱抗猪传染性胸膜肺炎疫苗积累了基础资料。     

猪断奶后多系统衰竭综合征诊断方法的系列研究

本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断奶后多系统衰竭综合征的诊断.     

不同方法对网状内皮组织增殖病病毒的检测

从山东、江苏、上海等地的鸡场中，收集疑为网状内皮组织增殖病病毒（REV）感染鸡的脾脏、肝脏56份，分别通过聚合酶链式反应（PCR）、斑点杂交试验（Dot-blot)和间接免疫荧光试验（IFA）对其进行REV检测。结果有21份呈PCR阳性，20份呈Dot-blot阳性，15份呈IFA阳性，且所有IFA阳性样品，PCR和Dot-blot检测都呈阳性，20份Dot-blot阳性样品中有19份呈PCR阳性。研究表明，PCR检测REV较其他方法敏感，可作为REV的常规检测方法之一。     

猪旋毛虫病实验室诊断技术

旋毛形线虫是英国人Peacock 1828年首次于人体中发现,由Owen(1835)定名的,简称为旋毛虫.旋毛虫病(Trichinellosis)是由旋毛虫引起的一种人畜共患的严重寄生虫病.该病不仅严重威胁人畜健康和公共卫生事业,而且给畜牧业生产造成严重的经济损失.目前诊断旋毛虫病的方法很多,现将压片镜检法(TSM)、肌肉消化法(BDM)、间接血凝试验(IHA)、间接荧光抗体试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)叙述如下.     

基因C型鸭甲肝病毒间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

为建立基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)间接免疫荧光检测技术(IFA),本研究以纯化的DHAV-C单克隆抗体(MAb)为一抗,FITC标记的兔抗鼠Ig G(Ig G-FITC)为二抗,建立了DHAV-C IFA检测方法。该方法仅对感染DHAV-C的肝组织触片检测为阳性,而对分别感染基因A型鸭甲肝病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭圆环病毒、鸭源金黄色葡萄球菌、鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌的SPF鸭肝组织触片检测为阴性,表明该方法特异性好;重复性试验表明,该方法批内和批间重复性好。一抗和二抗在-20℃至少能保存7个月。实验感染SPF雏鸭IFA和RT-PCR检测符合率100%。本研究建立的DHAV-C IFA方法特异性好,可以用于该病毒感染肝组织的快速检测。