大白菜-花椰菜异源多倍体的形态、细胞及分子鉴定

 应用形态学、解剖学、细胞学及分子标记的方法对大白菜与花椰菜的异源四倍体和异源三倍体进行倍性鉴定。结果表明,异源多倍体在植株叶片、花器官和气孔等性状上较其二倍体双亲均表现出巨大性,而气孔密度和结实率则降低,其中异源四倍体比异源三倍体表现更明显。SRAP 分子标记分析表明,异源多倍体中包含了双亲的遗传信息,是双亲间真杂种。细胞学观察显示,异源四倍体的染色体数为2n = 4x = 38,异源三倍体的染色体数为2n = 3x = 29。异源多倍体的获得及鉴定为进一步创制大白菜新种质提供了材料。     

美味猕猴桃海沃德与毛花猕猴桃种间杂交及优株的选育

对美味猕猴桃海沃德(2n=6x=174)和毛花猕猴桃(2n=2x=58)进行种间杂交的试验结果表明,两种间杂交有一定程度的亲和性,杂种F1实生苗的形态特征,除个别性状倾向双亲一方外,其余均介于双亲之间,其中花瓣颜色尤为明显:全部杂种雌株的花为白色,与母本的相同,雄株有白色、桃红色和桃、白两色相间的3种类型。从杂种胚培养的实生苗中选出一株优良雌株,染色体数接近4倍体;过氧化物同工酶谱介于双亲之间。并就杂交双亲的倍性和其杂交亲和程度进行了讨论。     

西瓜杂种及其亲本同工酶分析

以西瓜的10个杂种及其16个亲本为试材分析了干种子、发芽期、子叶期的根及子叶的过氧化物酶(POD)同工酶和酯酶(EST)同工酶。结果表明西瓜POD同工酶和EST同工酶酶谱在不同时期,不同部位不尽相同。发芽期及子叶期POD同工酶和子叶期EST同工酶存在着杂种与亲本差异,杂种酶谱表现为父本相同、母本相同、双亲相同、出现“杂种酶”带及缺少双亲某些酶带五种类型。其中POD同工酶与其父本相同和EST同工酶与其母本或父本相同的杂种多表现较强的杂种优势。     

栽培茄与野生茄种间杂交研究

 以茄子栽培种（Solanum melongena）自交系‘E-35’、‘E-38’、‘E-8’、‘E-30’与野生种水茄（Solanum torvum）为亲本进行种间杂交,获得了E-35×Solanum torvum的种间杂种。对F1杂种进行形态学、RAPD、GISH分析以及抗病性鉴定。结果表明:种间F1多数形态性状居中,花粉具有较高的活力,具有可稔性。RAPD以及GISH分析表明,F1植株不仅包含双亲带型,而且产生新的特征带,含有栽培茄与野生茄染色体,染色体数为2n=24,表明所得的F1杂种为真正的种间杂种。杂种经过人工接种及田间发病鉴定,表现高抗青枯病,其抗青枯病性状可能由两对显性基因控制。该种质可以作为茄子抗病育种的一个新抗源。     

用α─淀粉酶同工酶分析测定中椒6号种子的品种纯度

本文研究了微辣型辣椒中椒６号及其双亲幼苗的α─淀粉酶同工酶，发现母本具有一条快带，父本具有一条慢带，其杂种同时具有双亲的两条酶带，此模式可用来鉴别真假杂种。对田间纯度鉴定和同工酶纯度鉴定结果进行相关分析，其相关系数达极显著水平，表明两种不同的纯度分析方法所获结果基本一致。幼苗α─淀粉酶同工酶分析，方法简捷、可靠，完全可以用于中椒６号种子纯度的快速鉴定。     

柑桔RAPD技术体系建立与体细胞杂种鉴定

通过优化反应条件,建立起柑桔ＲＡＰＤ分析技术体系,并成功地应用于体细胞杂种鉴定。柑桔ＲＡＰＤ以Ｍｇ２＋为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、〔ｄＮＴＰｓ〕为１００μｍｏｌ／Ｌ时扩增稳定,效果良好。用１６个引物扩增〔哈姆林甜橙（＋）粗柠檬〕融合植株,体细胞杂种表现为双亲谱带之和。结合染色体计数,可将〔Ｐａｇｅ桔柚（＋）粗柠檬〕融合再生的体细胞杂种（异源四倍体）、叶肉亲本类型及同源融合植株区别开来。     

用α—淀粉酶同工酶分析测定中椒6号种子的品种纯度

本文研究了微辣型辣椒中椒６号及其双亲幼苗的α－淀粉酶同工酶，发现母本具有一条快带，父本具有一条慢带，其杂种同时具有双亲的两条酶带，此中用来鉴别别真假杂种。对田间纯度鉴定和同工酶纯度鉴定结果进行相关分析，其相关系数在显著水平，表明两种不同的纯度分析方法所获结果基本一致。幼苗α－淀粉酶同工酶分析，方法简捷，可靠，完全可以用于中椒６号种子纯度的快速鉴定。     

菜薹杂交种ISSR和SRAP的指纹图谱构建

利用ISSR和SRAP两种分子标记技术,对1份菜薹杂交组合进行分析。结果表明,3个ISSR引物和3对SRAP引物可扩增出供试材料双亲的互补特征带,将双亲及杂种F1区分开;另有2个ISSR引物也可有效鉴别双亲及杂种F1。从而建立了由ISSR和SRAP两种标记技术组成的鉴定该杂交组合的分子指纹图谱,并转化为数字指纹图谱,为菜薹种子纯度的鉴定开辟了新的技术途径,为菜薹新品种知识产权的保护提供了重要手段。     

白凤和寿星桃及其杂交后代儿茶酚氧化酶同工酶酶谱分析

本试验采用水平淀粉凝胶电泳,对白凤和寿星桃及其杂交后代的儿茶酚氧化酶同工酶酶谱进行测定。白凤出现一条慢带,寿星桃出现一条快带,全部杂种一代均同时出现双亲的酶带,呈互补酶谱,在杂种一代自然授粉的后代中,酶谱发生分离。结果表明,同工酶酶带是受特定基因位点所控制。互补酶谱可用来进行杂种的早期鉴定。     

应用原生质体融合技术获得茄子种间体细胞杂种

 应用原生质体电融合技术, 获得了茄子近缘野生种Solanum torvum、S. aethiopicum 与栽培种S.melongena (六叶茄, Dourga) 的种间体细胞融合四倍体再生植株。染色体检测表明该植株为四倍体(2n =4x = 48) , 荧光免疫检测证明为种间体细胞杂种, 青枯病抗性鉴定表明带有抗病基因, 田间生长表现为倾向野生亲本的中间类型。     

柑桔同源及异源四倍体花粉育性研究

对８个柑桔同源四倍体及通过原生质体融合得到的２个异源四倍体的花粉育性和花粉粒大小进行了测定。结果显示，同源四倍体柑桔花粉育性平均为３６％，约为二倍体（６２％）的６０％。‘伏今夏’甜橙由于是异质结合的染色体易位突变体，其同源四倍体花粉育性比二倍体（２３％）高出５０％。权（Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ）与甜橙（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）属间以及来檬（Ｃ．ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）与甜橙种间四倍体体细胞杂种花粉育性介于其双亲之间，花粉育性分别为各自高值亲本的９９％和７５％。同源及异源四倍体花粉粒体积平均为二倍体的２倍或双亲之和。本结果说明，柑桔体细胞杂种可作为杂交亲本进一步被利用。     

柑桔体细胞杂种植物学性状、生长特性及其扦插繁殖研究

采用宜昌橙和伏令夏橙、金柑和伏令夏橙、哈姆林和粗柠檬融合的3个体细胞杂种,进行高接和扦插繁殖,并以亲本或枳作比较。试验结果表明：体细胞杂种之间的生长量存在显著差异,并均受亲本影响;杂种的叶子植物学性状,与亲本相比,叶形指数变小;杂种的刺生长并不与两亲本均值成正相关;杂种扦插成活率偏向高值亲本,其中两个杂种具有与枳扦插应用一样的潜力。即使两亲本的扦插成活率均为0,而杂种仍有部分扦插成活。     

柑橘种间体细胞杂种的核质遗传研究

为了解柑橘体细胞杂种的核质遗传组成,采用流式细胞仪(FCM)、简单序列重复(SSR)、相关序列扩增多态性(SRAP)以及酶切扩增多态性序列(CAPS)对此前通过对称融合获得的2株种间体细胞杂种进行了分析。结果表明,在丹西红橘+红江橙种间组合中,分析的2株植株中1株为二倍体非对称体细胞杂种,其核DNA具有双亲的部分DNA,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙(叶肉亲本);而另1株则是异源四倍体体细胞杂种,其核DNA来源于双亲,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙。     

马铃薯栽培种与野生种叶肉细胞融合及体细胞杂种鉴定

 以马铃薯栽培种Solanum tuberosum ‘中薯二号’的无性系3 # 、8 # (2n = 48) 和二倍体野生种Solanum chacoense (2n = 24) 的无菌苗为原生质体来源, 比较了PEG (聚乙二醇) 融合和电融合两种方式马铃薯原生质体融合效果的影响。结果显示, 两种融合方式对细胞的融合率没有显著差异, 但电融合的细胞植板效率和愈伤组织分化能力均显著高于PEG融合法。在早期挑选的生长旺盛的愈伤组织再生的100个株系中, 经RAPD 标记检测有97 个系为体细胞杂种。杂种植株经流式细胞仪倍性分析表明, 52.6 %为六倍体, 14.4 %为八倍体, 14.4 %为非整倍体, 18.6 %为混倍体。叶绿体SSR 引物NTCP29 用于细胞质重组检测, 结果显示, 体细胞杂种中叶绿体具有偏亲现象, 大多数杂种只含有单一亲本的叶绿体类型, 只有16.5 %株系为叶绿体重组的杂种植株。     

柑橘体细胞杂种有性后代叶形态遗传变异研究

对柑橘体细胞杂种有性后代叶形态遗传变异研究表明,有性后代群体叶长、叶宽、叶面积平均值低于双亲,叶厚与双亲接近,而气孔长、宽与密度平均值介于双亲之间;不同有性后代植株叶长、叶宽、叶面积、叶厚及气孔长、宽与密度变化范围与杂交双亲对应的参数呈交叉现象,二倍体与三倍体群体间没有明显分组。有性后代除叶厚变异范围较小外,其它参数变异范围都较大。经次数资料的适合性测验即χ2测验,叶形、叶尖缺刻的有无及翼叶形状分离符合1∶1的分离规律,二倍体组群与三倍体组群的叶长差异极显著、叶宽差异显著、叶厚没有差异,气孔长与密度差异极显著,而气孔宽差异显著。     

柑桔体细胞杂种扦插繁殖及其有关性状研究

对３个由原生质体融合产生的柑桔体细胞杂种繁殖特性的研究表明，金柑与甜橙属间体细胞杂种扦插生根成活率较低。甜橙＋宜昌橙以及甜橙＋粗柠檬种间体细胞杂种扦插萌发和生根能力与权及粗柠檬没有显著差异；插条发根平均为２．０条和１．８条，一年生植株根系总长分别为１２２．２ｃｍ和８０．７ｃｍ，与积和粗柠檬均无显著差异；粗柠檬＋甜橙杂种的须根数为３９条，株－１，与权（５４．５条·株－１）差异显著，而宜昌橙＋甜橙种间杂种（４７．７条·株－１）与积差异不显著；体细胞杂种的抗寒性有介于双亲之间的趋势     

柑桔体细胞融合再生9个组合的二倍体叶肉亲本类型植株

电场诱导９个柑桔种间及体内体细胞融合,各组合均再生叶肉原生质体亲本类型植株。这些植株经形态学和细胞学检查证明为二倍体（２ｎ＝２ｘ＝１８）。对其中５个组合进行ＲＡＰＤ分析表明,４个组合植株的谱带在所分析的引物上均表现为与叶肉细胞亲本谱带一致,另１个组合,即Ｐａｇｅ柑柚＋粗柠檬,个别植株除含有叶肉亲本的所有谱带外,还扩增出了悬浮系亲本的部分特征带,为杂种类型。探讨了这类植株的产生原因及潜在价值。     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间。其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向高值亲本；种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％－１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空。脐橙与红桔的体细胞杂种不产生花粉。墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异；粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性繁殖后代之间，花粉育性无显著差异。     

东北草莓×凤梨草莓种间杂种一代的细胞遗传学观察与RAPD分析

以利用我国原产草莓二倍体野生种东北草莓与八倍体栽培种凤梨草莓栽培品种‘圣星’杂交, 通过胚拯救获得的种间杂种为试材, 经体细胞鉴定种间杂交后代为五倍体, 育性差。叶柄茸毛和花梗茸毛与野生种母本东北草莓相近; 花序着生高度部分与母本一致, 部分与父本一致, 各占一半; 植株高度多数介于双亲之间, 趋向于栽培品种。杂交F1代的花粉母细胞减数分裂观察表明, 染色体构型为6.1Ⅰ +10.6Ⅱ + 2.1Ⅲ + 0.35Ⅳ, 后期出现少量畸形多分孢子。RAPD分析表明, 杂种后代具有亲本扩增片段, 后代个体间存在遗传异质性。     

RAPD技术在木耳属杂交种及原生质体融合子鉴定分析中的应用

本研究以ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）技术为主，比较分析食用菌木耳属（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）种内杂交种．种间原生质体融合子与其亲本菌株的ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒｓｅＣｈａｉｈＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增的ＤＮＡ片段之间差异，并辅以其它手段，如核相及核数目观察，同功酶鉴别，以期建立完整有效的检测技术系列，确证其杂交种融合子的真实性及可靠性。在ＲＡＰＤ分析中，用于测试的１０种随机引物仅有４种引物与供试菌株的ＤＮＡ模板具有较好的结合能力，其中１种引物可用于检测杂交种及其亲本，另外３种引物可用于检测融合子反亲本。检测结果显示：３个供试杂交种中有２个为真杂合子，１个为假杂合子；２个供试融合子均为非稳定杂合子。与常规方法鉴定结果比较基本相符。因此，ＲＡＰＤ技术提供了一种快速、简便、准确的杂交种及融合子的鉴别方法。