一种快速的木本植物倍性检测方法

利用流式细胞仪对泡桐、悬铃木、刺槐三种木本植物进行了DNA含量测定和倍性分析，通过对3种木本植物的样本检测和分析结果．研究认为流式细胞仪在检测木本植物DNA含量和倍性分析上结果比较稳定一致，通过对大量样本的保存，处理方法及上样量对其检测结果影响的研究。得出流式细胞仪在木本植物DNA含量和倍性综合高效快速检测方法，从而为木本植物的遗传育种．倍性快速鉴定等方面提供理论依据。     

流式细胞术在蔬菜倍性鉴定中的应用

倍性鉴定一直是蔬菜育种研究的重要内容之一,而流式细胞术(FCM)是一种快速准确鉴定蔬菜倍性的方法。综述了流式细胞术倍性鉴定的原理、操作步骤、优缺点及其在蔬菜作物上的应用进展。     

流式细胞术鉴定苹果花药培养再生植株倍性的方法

苹果花药培养再生获得的纯合基因型植株倍性各异。为了进一步在育种和遗传分析中应用这些株系,需要准确鉴定其倍性,而流式细胞术测定植物细胞DNA含量是一种简单、快速、精确的倍性鉴定方法。试验用4种不同的解离液对苹果花药培养再生植株的叶片样品进行解离,并进行了DNA含量检测。结果表明,WPB解离液解离样品后上机检测,主峰高且明显。利用WPB解离液对苹果花药培养再生植株叶片进行解离,解离后不经过离心,直接染色,是用流式细胞术鉴定苹果花药培养再生植株倍性的最佳方法。     

抱子甘蓝花培苗倍性的快速鉴定

采用花药培养获得加倍单倍体 (DH)是甘蓝类蔬菜自交不亲和系选育的主要方法之一 .然而 ,花药培养后代是倍性水平不同的混合群体 ,及早鉴定出真正的 DH具有重要的意义 .本文阐述 DNA流式细胞仪测定法和形态学鉴定法在花培苗倍性鉴定上的应用 ,并以抱子甘蓝的花培苗群体为材料 ,采用这两种方法鉴定其倍性组成 .结果表明 ,DNA流式细胞仪测定法可以鉴别群体的各种倍性水平 ,而形态学鉴别法可以把群体中的二倍体与单倍体、四倍体及其它倍体分开 .若以 DNA流式细胞仪测定法的鉴定结果为标准 ,苗期形态学鉴定的准确率可达 94.2 % .与 DNA流式细胞仪测定法相比 ,形态学鉴定方法具有更快速、简便和实用性强等特点     

菊花染色体倍性鉴定研究

[目的]综述菊花染色体倍性鉴定的常用方法及其在育种中的应用。[方法]重点介绍了染色体计数法和流式细胞术法,简要介绍了染色体倍性鉴定在菊花品种鉴定和育种中的应用情况。[结果]染色体计数法一般分为取材、预处理、固定、解离、染色、制片、镜检和制作永久玻片等步骤。流式细胞术鉴定法目前已成为倍性鉴定的主要方法,尤其适合大量样品的染色体倍性分析。介绍了流式细胞仪的结构与工作原理、使用方法与操作步骤。染色体倍性鉴定方法在菊花品种鉴定和育种中的应用主要在品种鉴定、杂交组合的选配、杂交后代材料的提前筛选和亲缘关系的鉴定4个方面。[结论]染色体计数法和流式细胞术法2种方法的结合有利于提高染色体倍性鉴定的效率和准确性。     

2种鉴定黄颡鱼三倍体个体方法的比较

采用流式细胞仪(Becton Dickinson FACs calilbur)测量DNA相对含量和染色体计数2种方法,对随机选出的黄颡鱼鱼苗样本进行三倍体个体的鉴定和筛选.第1种方法是采取黄颡鱼血样,经PI染色,用流式细胞仪测定其倍性,结果14尾中有8尾黄颡鱼的DNA相对含量约是对照样本(二倍体)的1.5倍,证明为三倍体个体.染色体计数采用体内注射PHA短期培养法,经鉴定,相同样本中有8尾是三倍体,此结果验证了用流式细胞仪所测定的结果.通过比较得出.在多倍体育种工作中,尤其是诱导率不高的情况下.采集血样用流式细胞仪测定鱼体倍性是一种准确、迅速的方法,同时能够避免杀死鱼体,可以用来批量筛选多倍体鱼苗.     

非洲菊大孢子再生植株倍性的快速鉴定方法

以非洲菊大孢子再生植株群体为材料进行倍性鉴定,并以染色体计数法的鉴定结果为依据,研究利用DNA流式细胞仪测定法、气孔保卫细胞叶绿体计数法和形态学特征鉴定非洲菊大孢子再生植株倍性的可靠性。结果表明,非洲菊大孢子再生植株是倍性水平不同的混合群体,倍性分布为单倍体、二倍体和混倍体,但不同基因型各倍性植株所占比例不同;根尖染色体计数法直观、准确,但因非洲菊染色体小且数目较多而导致计数困难;DNA流式细胞仪鉴定法的准确率达95%以上,可用于再生植株群体倍性的快速鉴定;气孔保卫细胞叶绿体计数法的准确性还有待进一步探讨;植株形态鉴定法受培养条件及评定标准的影响较大,准确率偏低。     

利用流式细胞仪检测草莓倍性方法的优化

[目的]建立一套利用流式细胞仪快速鉴定草莓倍性的方法,为草莓新品种选育提供技术支持.[方法]以二倍体森林草莓、四倍体东方草莓、六倍体智利草莓和八倍体凤梨草莓为试材,通过改良提取液、增加离心和过滤次数等,应用流式细胞仪对大田生长的草莓植株根尖、茎尖和幼叶进行倍性检定.[结果]不同部位材料检测峰值有所不同,其中匍匐茎茎尖和根尖的细胞检测效果优于幼叶;在提取液中加入巯基乙醇,可使荧光通道值峰形更饱满;增加离心次数和上机前再过滤,可使峰值更清晰.[结论]利用流式细胞仪检测草莓倍性的优化条件为:采用匍匐茎茎尖或根尖的细胞为检测试材,在常规提取液中添加巯基乙醇来制备DNA悬浮液,DNA悬浮液离心漂洗3次后经300目尼龙网过滤再上机检测.     

辣椒花药培养再生植株的倍性鉴定

为指导辣椒单倍体育种技术在实践中的应用,对辣椒8024花药培养再生植株的染色体倍性进行鉴定,以DNA流式细胞仪测定法的鉴定结果为依据,研究利用染色体压片计数法和花药培养再生植株形态及坐果情况鉴定辣椒花药培养再生植株倍性的可靠性。结果表明,花药培养再生植株是倍性水平不同的混倍群体,但各倍性植株所占的比例不同,DNA流式细胞仪测定法和染色体计数法的吻合度达93%,与坐果鉴定结果一致。鉴定结果可直接决定其结籽情况。     

刀鲚不同组织的乳酸脱氢酶同工酶及DNA含量研究

采用同工酶技术和流式细胞术研究了刀鲚肝脏、眼睛、肾脏、肌肉、鳃和血清6个组织的乳酸脱氢酶(LDH)及尾鳍、鳃、肌肉、性腺和肝脏5个组织的细胞核DNA含量,旨在为刀鲚遗传背景和种质标准的建立提供技术参数。结果显示:(1)刀鲚不同组织的LDH同工酶呈现一定的组织特异性,眼睛是LDH表达较为典型的组织;除肌肉和血清没有LDH2条带外,其余组织均出现了5条同工酶酶带,并且相对迁移率一致,各组织中均未见LDH-c基因的表达。(2)刀鲚鳃、肌肉和肝脏3个组织的细胞核DNA含量不存在显著差异(P0.05),但都显著低于尾鳍、卵巢细胞DNA含量(P0.05);测定的鳃、肌肉和肝脏组织细胞核的DNA含量与单倍体的精子细胞的比值依次为2.16、2.19和2.22,即刀鲚为二倍体鱼类。此外,肝脏细胞容易从组织上脱落,较易制成单细胞悬液,是用流式细胞仪进行倍性分析的适宜试材;如果要保持生物体健康存活状态,则剪取小部分尾鳍进行倍性分析为宜。研究亮点:首次报道了刀鲚的乳酸脱氢酶同工酶酶带相对迁移率、组织分布、活性扫描及细胞核DNA含量。研究发现,刀鲚眼睛是LDH表达较为典型的组织;刀鲚是二倍体鱼类,肝脏细胞是进行倍性分析的适宜试材,这为刀鲚遗传背景和种质标准的建立提供了科学依据。     

利用流式细胞术检测甜菜染色体倍性和DNAC-值

[目的]研究流式细胞技术快速、准确、方便测定甜菜体内染色体倍性和DNAC-值,为甜菜染色体倍性、分子生物学领域的相关研究提供参考依据.[方法]以二倍体M39-8-4嫩叶为材料,以已知基因组的新疆野杏洛浦洪待克为外标,建立适合于甜菜染色体倍性和基因组的流式细胞术测定方法.[结果]经7种常用细胞解离液筛选,Marie's为...     

流式细胞光度术用于草莓倍性鉴定的研究

利用流式细胞光度术对草莓３个二倍体、１个五倍体、２个八倍体试管苗的细胞核ＤＮＡ的相对含量进行测定。结果表明,随着倍性水平的增加,细胞核ＤＮＡ相对含量随之成倍增加,说明可利用流式细胞光度术测定细胞核ＤＮＡ含量来进行倍性鉴定;利用这一技术对草莓几个杂交后代及诱变植株的倍性水平进行了鉴定,发现一诱变植株存在两群核ＤＮＡ相对含量相差近一倍的细胞,初步认为这一诱变植株为倍性嵌合体,该结果进一步证明这种方法的可靠性。     

Detection of DNA sequences in nuclei in suspension by in situ hybridization and dual beam flow cytometry

This report describes the fluorescence hybridization of DNA sequence probes to interphase nuclei in suspension and the quantification of bound probe by dual beam flow cytometry. Nuclear proteins were first cross-linked with dimethylsuberimidate to prevent disintegration of the nuclei during denaturation and hybridization. To demonstrate that in situ hybridization can be performed in suspension, stabilized mouse thymocyte nuclei were hybridized with a probe for mouse satellite DNA sequences. The DNA probes were labeled with 2-acetylaminofluorene. After hybridization, an indirect immunofluorescent labeling procedure was used to visualize the target sequences. With dual beam flow cytometry, both the amount of hybridized probe and the DNA content of individual nuclei were determined. Thus, the specificity of DNA hybridization can be combined with the speed and quantitative analysis provided by flow cytometry.     

食管癌前病变与食管腺癌细胞DNA倍体变化分析

目的探讨慢性炎症-癌前病变-食管腺癌不同阶段的食管黏膜细胞DNA含量及倍体变化,从细胞代谢水平揭示食管癌的发展过程．方法用流式细胞术对15例检查未见器质性病变者的正常组织,27例胃食管反流病患者（GERD）、25例Barrett食管患者和31例食管腺癌患者的病变组织细胞DNA含量进行了检测,并对四组的DNA倍体类型、D...     

流式细胞术检测4种提取沙棘核DNA方法的比较

采用4种不同提取细胞核的方法,测定了6个不同沙棘品种的核DNA含量,比较了4种不同提取方法测得的CV值的差异.结果表明:4种提取沙棘核DNA的方法所测得的内标CV值为2.49%～11.31%,待测样CV值为2.53%～12.08%.当Tris.MgCl2法测定时,细胞核全部破碎,故未得到流式图;用Otto's法测得的CV值最小,内标与待测样CV值分别为2.49%～3.35%,2.53%～3.56%.因此,Otto's法为最适宜提取沙棘细胞核DNA的方法.