大豆热激蛋白Hsp90家族基因鉴定及分析

热激蛋白Hsp90是广泛存在于微生物和动植物体中高度保守蛋白质之一,大量研究发现其参与生物体应答应激反应、信号转导、细胞周期调控、蛋白降解及转运等生理活动,具有重要研究价值,因此在许多物种中热激蛋白Hsp90基因家均被广泛关注和研究.但大豆中Hsp90基因家族详细信息尚不清楚,研究通过生物信息学分析发现共有13个Hsp...     

沙田柚类蛋白激酶基因的鉴定及生物信息学分析

[目的]研究沙田柚类蛋白激酶基因编码的蛋白质序列所包含的生物信息学。[方法]利用高通量测序对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序,通过差异分析得到沙田柚类蛋白激酶基因序列。采用生物信息学方法,对其编码的蛋白质从序列特征、理化性质、跨膜结构域、高级结构以及功能域等方面进行预测和分析。[结果]该基因全长为2 323 bp,开放阅读框(ORF)全长为1 560 bp(Genbank登录号:MG925820),共编码519个氨基酸,分子质量为57.39 kD,等电点PI为8.55。该蛋白质含有1个植物STKc IRAK蛋白家族的保守结构域,为亲水性稳定蛋白。氨基酸序列分析表明,其编码的氨基酸与克莱门柚和甜橙的同源性分别为100%、99%。系统进化树表明沙田柚类蛋白激酶基因与克莱门柚和甜橙亲缘关系很近,属于同一进化分支。[结论]该研究结果可为今后深入研究沙田柚自交不亲和机理提供参考。     

药用植物川续断热激蛋白基因HSP70和HSP90的鉴定与分析

为了解药用植物川续断中热激蛋白基因的分布情况及序列特征,以不同海拔川续断转录组数据库为基础,利用生物信息学方法鉴定和分析川续断HSP70和HSP90基因家族成员。结果表明,川续断中至少包含36个HSP70和18个HSP90基因,各成员在细胞质、细胞核、内质网中均有分布,15类保守基序长度介于15～50个氨基酸之间;系统进化树揭示DaHSP90基因与拟南芥亲缘关系更近。初步筛选了10个响应温度胁迫的热激蛋白基因,为进一步探索川续断HSP基因家族的功能奠定重要理论基础,同时也为研究影响其活性成分川续断皂苷Ⅵ含量因素提供参考。     

沙田柚生长素响应基因SAUR的鉴定及序列分析

[目的]研究沙田柚生长素响应基因SAUR基因编码的蛋白质序列所包含的生物信息学。[方法]以沙田柚自交和异交花柱为材料,通过高通量测序技术进行转录组测序,在差异表达基因中鉴定出SAUR基因。[结果]该基因全长857 bp(登录号为MH281940),开放阅读框(ORF)为381 bp,编码126个氨基酸,编码的蛋白质理论等电点为5.76,相对分子质量为13.74 kD,含有1个与Auxin_inducible superfamily蛋白相同的保守结构域。沙田柚SAUR基因在自交1～3 d花柱中的表达量(RPKM)分别为8.42、56.02、53.45;而在异交1～3 d花柱中的表达量分别为11.98、36.74、8.53。氨基酸序列分析表明,该基因编码的氨基酸与克莱门柚和甜橙SAUR基因编码的氨基酸的同源性分别为100%、99%。系统进化树显示,沙田柚SAUR基因与克莱门柚和甜橙的亲缘关系很近,属同一进化分支。[结论]研究结果可为今后深入研究沙田柚自交不亲和机理提供参考。     

家蚕热休克蛋白HSP90相互作用蛋白的筛选与鉴定

[目的]HSP90是热休克蛋白家族的成员之一,在昆虫的抗逆性和变态发育中发挥重要作用,已有研究表明HSP90能够促进家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinucleopolyhedrovirus,BmNPV)的增殖,但作用机制尚不清楚.本研究通过鉴定BmHSP90的相互作用蛋白,为其促进BmNPV增殖的作用机制解析提...     

大豆热激蛋白基因HSP17.4的耐热功能鉴定

为研究小热激蛋白基因HSP17.4在大豆热生物胁迫耐受过程中的作用,本试验把植物过表达载体p CPB-HSP17.4和RNA干扰表达载体p CPB-HSP17.4-RNAi利用农杆菌介导法将其导入受体大豆JN18中。经PCR检测,获得T0代阳性植株13株;T1代阳性植株26株;T2代阳性植株39株。T1、T2代转基因植株Southern blotting结果显示,目标基因以单拷贝形式整合到基因组中。荧光定量PCR结果显示,HSP17.4基因在转化植株的叶、茎中均有表达。在42℃高温胁迫下,与未转化植株相比,T1、T2转过表达植株叶片中相对表达量分别为未转化植株的813%和793%,转RNAi表达植株叶片中相对表达量分别为未转化植株的49.77%和52.81%。耐高温鉴定结果表明,转过表达HSP17.4基因提高了植株的耐高温能力。     

大豆热激蛋白基因HSP17.4的耐热功能鉴定

为研究小热激蛋白基因HSP17. 4在大豆热生物胁迫耐受过程中的作用,利用农杆菌介导法,将植物过表达载体p CPB-HSP17. 4和RNA干扰表达载体p CPB-HSP17. 4-RNAi导入受体大豆JN18中。经PCR检测,获得T0代阳性植株13株,T1代阳性植株26株,T2代阳性植株39株。T1、T2代转基因植株Southern blotting结果显示,目标基因以单拷贝形式整合到基因组中。荧光定量PCR结果显示,HSP17. 4基因在转化植株的叶、茎中均有表达。在42℃高温胁迫下,与未转化植株相比,T1、T2转过表达植株叶片中相对表达量分别为未转化植株的813%和793%,转RNAi表达植株叶片中相对表达量分别为未转化植株的49. 77%和52. 81%。耐高温鉴定结果表明,转过表达HSP17. 4基因提高了植株的耐高温能力。     

沙田柚F-box蛋白基因的克隆及序列分析

采用生物信息学方法,对沙田柚[Citrus maxima(Burm.)Merr.cv.Shatian Yu.]F-box蛋白基因编码的蛋白质从序列特征、理化性质、跨膜结构域、高级结构及功能域等方面进行了预测和分析。结果表明,该基因全长为1 427 bp(Gen Bank登录号为KR363148),开放阅读框(ORF)全长为1 101 bp,共编码366个氨基酸,编码蛋白质的分子质量43.09 ku,理论等电点5.15。沙田柚F-box蛋白基因编码蛋白含有一个植物F-box蛋白家族的保守结构域,为亲水性非分泌不稳定蛋白,不跨膜运动,共有30个可能的磷酸化位点。氨基酸序列分析表明,其编码的氨基酸与甜橙(Citrus sinensis,KDO71185)和克莱门柚(Citrus clementina,XP_006425495)F-box蛋白的同源性分别为99%、98%。系统进化树表明,沙田柚F-box蛋白基因与与甜橙(Citrus sinensis,KDO71185)和克莱门柚(Citrus clementina,XP_006425495)亲缘关系很近,属于同一进化分支。     

沙田柚乙烯应答因子的鉴定和生物信息学分析

利用高通量测序对沙田柚自交和异交花柱进行转录组测序,通过差异分析得到了沙田柚乙烯应答因子基因序列。采用生物信息学方法,对其编码的蛋白质从序列特征、理化性质、跨膜结构域、高级结构以及功能域等方面进行了预测和分析。该基因全长为1013 bp(Gen Bank登录号为MG905213),开放阅读框(ORF)全长498 bp,编码的蛋白质含166个氨基酸。编码蛋白质的相对分子量为18.45 k Da,理论等电点为7.90。该蛋白质具有一个与AP2 superfamily蛋白相同的保守结构域,为亲水性非分泌不稳定蛋白,不属于跨膜运动,共有24个可能的磷酸化位点。氨基酸序列分析表明,该基因编码的蛋白质与芸香科的甜橙(Citrus sinensis,XP-006467696.1)和克莱门柚(Citrus clementina,XP-006449381.1)的AP2蛋白的同源性分别为100%和98%。系统进化树表明,沙田柚的乙烯应答转录因子与甜橙和克莱门柚亲缘关系很近,属于同一进化分支。     

Bright Yellow 2烤烟热激蛋白90生物信息学分析

[目的]分析Bright Yellow 2烤烟热激蛋白90(HSP90)的生物学信息,为揭示烘烤过程中烟叶的烘烤特性提供理论依据.[方法]从NCBI中获取Bright Yellow 2烤烟HSP90蛋白序列NtHSP-1、NtHSP-2和NtHSP-3(GenBank登录号分别为BAL42333、BAL42332和BAM24708),利用生物信息学软件对各序列进行理化特性、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、二级结构和三级结构预测分析.[结果]Bright Yellow 2烤烟NtHSP-1、NtHSP-2和NtHSP-3的氨基酸数量分别为812、811和699个,均以酸性氨基酸含量较多,其中谷氨酸(Glu)含量最高,理论等电点均小于5.00,二级结构均以α-螺旋(H)和无规则卷曲(C)为主.NtHSP-1和NtHSP-2的亲水性较高,具有较高的稳定性,属于分泌蛋白,具有锚定结构,定位于内质网,其三级结构呈现"r"形,N端内部具有Mg2+结合位点、HATPase_c(ATP酶)和top6b(DNA拓扑异构酶VI)功能域;NtHSP-3为非分泌型蛋白,定位于叶绿体,三级结构呈现"i"形,N端含有Mg2+结合位点和HATPase_c功能域.[结论]NtHSP-1和NtHSP-2可能与烟叶耐烤性有关,而NtHSP-3可能与烟叶易烤性有关.     

不同栽培品种化州柚质量的研究

[目的]探讨不同栽培品种化州柚的质量。[方法]以原植物表型描述法比较不同品种化州柚的外观,采用分光光度法测定其中总黄酮含量,以HPLC法比较其中柚皮苷、野漆树苷含量和指纹图谱,用AFIJP标记分析不同品种化州柚的遗传距离。[结果]不同栽培品种化州柚的表型变异较大;大茶岭和凤尾两个品种的总黄酮和柚皮苷含量显著高于其他栽培品种,大茶岭产化州柚中野漆树苷含量最高。在分子水平上,不同栽培品种化州柚之间的遗传相似系数全部在95％以上。[结论]不同栽培品种化州柚表型的变异已基本形成,但是基因水平的变异尚未形成,大茶岭和凤尾产化州柚的品质最好。     

套袋对新都柚果实糖代谢相关酶活性影响的研究

以新都柚为试材,研究套袋对果实糖含量及蔗糖代谢相关酶活性变化的影响。结果表明,套袋果实与对照果实糖含量变化趋势相似,但积累速率不同步,套袋果的糖含量低于对照果;套袋果的合成酶类活性低于对照,分解酶类高于对照。     

蓝目菊种子发芽与生长开花状况观察

对从加州戴维斯引入的蓝目菊种子，在天津农学院温室和露地进行了播种和栽培试验。经过催芽试验，采取随机抽样法分析了第一片真叶和植株高生长状况，并对其主要生物学特性进行了观察记录。结果表明：蓝目菊有较好的发芽品质和播种品质，植株生长良好，花大而艳丽，有较高的观赏价值。     

套袋对新都柚果实贮藏品质的影响

[目的]为延长柚果实采后贮藏寿命,提高其商品价值提供理论指导。[方法]新都柚果实生长期套纸袋,成熟后采摘,单果塑膜包装,室温贮藏,每20 d取材1次进行相关指标测定。[结果]套袋果实不易失重 贮藏后期,套袋果可滴定酸含量超过对照 套袋果Vc含量一直高于对照 对照果的MDA累积速率很快,且一直高于套袋果 套袋果与对照果的POD活性变化趋势相反,贮藏40 d后,套袋果的POD活性开始上升,并超过对照 采收时CAT活性低于对照,贮藏80 d时测量,虽低于对照,但差异变小。[结论]套袋果较耐贮藏。     

沙田柚多倍体的获得与基因组原位杂交（GISH）分析

【目的】沙田柚是中国特有的柚类名优品种,但种子多,一般100粒左右。为创新三倍体无核品种积累育种材料,本研究通过实生筛选获得不同倍性沙田柚新种质,同时运用基因组原位杂交（GISH）技术分析天然与人工四倍体新种质的染色体组组成。【方法】随机采集沙田柚自然授粉果实,萌发种子检测其染色体数目获得倍性变异植株;以2x母株gDNA为探针,同获得的4x植株中期染色体杂交进行GISH分析。【结果】从6 000粒沙田柚种子中共获得三倍体5株,四倍体9株;对沙田柚天然与人工四倍体新种质的基因组原位杂交（GISH）分析表明,天然四倍体中有7株为异源四倍体,2株为同源四倍体,秋水仙碱诱导获得的人工四倍体4株均为同源四倍体;初步观察显示;与二倍体相比,四倍体植株生长缓慢,树冠较小,枝短而密生,叶片浓绿,宽度变宽,叶形指数减小,叶片厚度增加明显。【结论】多倍体单胚柚新种质的获得为进一步选育无核品种奠定了基础,同时GISH分析证实了沙田柚雌性未减数配子的存在。     

套袋对新都柚果实外观品质的影响

[目的]探讨套袋对果实发育的影响机理,为套袋技术的完善、提高果实品质提供理论依据。[方法]新都柚果实生长期套纸袋,每15 d取材一次进行相关指标测定。[结果]套袋果单果重小于对照,果面光洁,叶绿素含量低,类胡萝卜素含量高,套袋使果实果皮增厚,可食率降低。[结论]套袋使果实外观美观,但对果实大小、可食率等有负面影响。     

化橘红主要钻蛀性害虫调查及其防治

目的:调查广东化州化橘红种植基地主要钻蛀性害虫的种类、发生规律和季节变化动态,为化橘红规范化种植提供理论指导。方法:通过标准地采样及灯诱等方法对化州化橘红种植基地的钻蛀性害虫种类进行调查,并对每种害虫的发生规律、季节变化动态进行探索。结果:共发现化橘红钻蛀性害虫7种,隶属于2目4科,其中主要的钻蛀性害虫为光盾绿天牛、星天牛和褐天牛;每年5~8月为钻蛀性害虫的高发期;并提出了科学的防治措施。结论:研究结果可为化橘红钻蛀性害虫的防治提供参考,为化橘红的绿色生产提供科学保障。     

长寿沙田柚无菌苗培育研究

通过无菌苗的培育,研究了长寿沙田柚苗期的发育生物学特征及培育的关键技术。重点研究了见光时间对苗期生长的影响,即在播种的第5d、6d、7d、8d和9d见光,分别比较了地下部分和地上部分30d内的生长情况,综合分析表明:第6d见光的苗子生长最好;对上述5个处理,分别在播种的第12d、15d、18d、21d、24d和27d进行移栽,通过移栽后生长势的观察比较,播种第18d、21d和24d移栽效果最好,且无显著差异。     

长寿沙田柚不同外植体愈伤组织诱导的研究

[目的]对长寿沙田柚不同外植体愈伤组织的诱导进行研究。[方法]以长寿沙田柚无菌苗为材料,分别采用其上胚轴、下胚轴和子叶节段为外植体,研究不同外源激素对愈伤组织诱导的影响。[结果]诱导长寿沙田柚愈伤组织的外植体以下胚轴为佳,激素组合以1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D的效果最好。[结论]为以后长寿沙田柚高效离体再生体系的建立及其遗传转化研究奠定了基础。     

南平市柚引种观察初报

对引进的6个柚品种（琯溪蜜柚、龙柚二号、楚门文旦、4号文旦、文旦、红囊柚）和2个本地柚品种（青山柚、求兴柚）进行高接观察并测定果实的品质指标,结果表明,龙柚二号、楚门文旦、4号文旦、文旦、青山柚和琯溪蜜柚酸甜适口、品质较优,可在南平市适当种植;求兴柚和红囊柚果皮厚,种子多,品质差,不宜推广。