大豆疫霉根腐病菌游动孢子的产生因素

 本文对影响大豆疫霉根腐病菌游动孢子的产生因素进行了研究。8 d的菌丝体经蒸馏水浸泡,在25℃下培养72 h可以获得高浓度的游动孢子悬浮液,菌龄越短游动孢子浓度越大,偏酸性的环境有利于游动孢子产生,温度是影响游动孢子形成的重要因素,在0、35℃下均无游动孢子产生,游动孢子产生的适宜温度范围是20~30℃,最佳温度为25℃。     

玉米根系分泌物中关键抑菌物质对大豆疫霉的抑菌活性

间作是控制作物土传病害的有效手段,根系分泌物对病原菌生长的影响是间作具备控病效果的重要原因。本文研究了玉米根系对大豆疫霉游动孢子行为特征的影响,鉴定了玉米根组织中的关键抑菌活性物质,测定其对大豆疫霉菌丝生长和游动孢子行为的影响。结果表明,大豆与玉米间作能够显著降低大豆疫霉根腐病的发生,玉米根系和根系分泌物能够显著减弱根际大豆疫霉游动孢子的游动和根际大豆疫霉休止孢的萌发能力。通过HPLC对玉米根组织进行分析,发现玉米根组织中存在门布和苯并噻唑这两种抑菌物质,两者能显著抑制大豆疫霉游动孢子的游动和其休止孢的萌发能力;在浓度为500μg/mL时,其游动抑制率均达到100%;而萌发抑制率分别为100%和81%。同时,门布和苯并噻唑都能显著抑制大豆疫霉的菌丝生长。在浓度为500μg/mL时,其抑制率分别为100%和62.49%。综上所述,玉米根系组织中产生和分泌的门布和苯并噻唑对大豆疫霉具有抑菌活性,生产上可以利用玉米/大豆间作降低大豆疫病的危害。     

大豆疫霉和大豆疫病

大豆疫霉和大豆疫病彭金火谭红赵改萍（大连动植物检疫局大连１１６００１）（国家动植物检疫局北京）由疫霉引起的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）根腐和茎腐病（大豆疫病）于１９４８年最先见于美国的印第安纳州,公开报道则在１９５５年。Ｋａｕｆｍａｎｎ＆Ｇｅｒｄ...     

大豆疫霉根腐病

 大豆疫霉根腐病是毁灭性病害之一,在我国近年有加重发展趋势。美国、澳大利亚和加拿大对Phytophthora sojae及大豆抗性研究较多,目前已建立了完善的生理小种体系,分离了30多个生理小种,最新定名小种为38和39号。RFLP研究表明,P.sojae的多数变异都可在小种1,7,17和19号中表现出来,因而推测其它小种可能是从这4个小种杂交派生而来,澳大利亚的P.sojae由美国传入。抗、耐病筛选方法有田间筛选法、接种体薄层法、斜板法、下胚轴接种法和豆荚接种法等。选出不少抗病材料,通过遗传研究定名了抗性基因Rps1、Rps-b、Rps-c、Rps1-d、Rps1-k、Rps2、Rps3、Rps3-b、Rps3-c、Rps4、Rps5、Rps6和Rps7等。Rps1-k是目前应用较广的抗性基因,它能抗20多个生理小种。抗性基因Rps1和Rps1-c从被利用到丧失抗性大约是8~10年的时间,按此推算几年之内Rps1-k基因也将丧失抗性,因此主张抗病基因和耐病基因结合使用,不同抗性基因结合使用。     

四种作物根系分泌物对烟草疫霉的抑菌活性分析

通过分析玉米、大蒜、茴香和油菜4种作物根系分泌物对烟草疫霉的抑菌活性,发现这4种作物根系表现出很强的化感作用,根系分泌物能在短时间内迅速地杀死烟草疫霉的游动孢子,抑制其萌发。其中,玉米根系分泌物在最高浓度2.59mg/mL时,对疫霉休止孢萌发的抑制率高达100%;大蒜根系分泌物浓度为0.1 mg/mL时,20min内能完全抑制游动孢子的游动。分析4种作物根系对游动孢子的趋化作用发现,茴香、油菜对疫霉游动孢子的吸引活性最强,T0最高分别为76.3、68.7,玉米、大蒜次之。以上结果为建立"以生物多样性为基础,克服烟草土传病害连作障碍"的病害防治新模式提供有力的理论支撑。     

大豆疫霉卵孢子致死温度的测定

大豆疫霉根腐病是由大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)侵染引起的、危害极其严重的最具毁灭性的大豆病害之一.病原菌以卵孢子在土壤中越冬,在条件适宜时导致下一年大豆发生根茎腐烂.病原菌卵孢子也可以存在于患病种皮内,但其在病害循环中的作用还不清楚.卵孢子是大豆疫霉的主要传播方式.本研究中对大豆疫霉卵孢子的致死条件进行了筛选.结果表明,使用60℃湿热处理大豆疫霉卵孢子20min或80℃干热处理大豆疫霉卵孢子20min,其萌发率为0,且死亡率为100%.     

防治大豆疫霉根腐病的药剂筛选

在离体条件下测定了 8种内吸性杀菌剂对大豆疫霉菌菌丝生长的抑制作用。甲霜灵、甲霜灵锰锌、安克锰锌、杀毒矾、霜脲锰锌、克露和加瑞农为有效杀菌剂 ,霜霉威不具有抑菌效果。甲霜灵的 EC50 值为0 .4 870 μg/ m L,抑菌效果最好 ,安克锰锌、甲霜灵锰锌的 EC50 值分别为 1.4 2 6 1μg/ m L和 1.76 97μg/ m L,效果次之。在活体条件下 ,甲霜灵和甲霜灵锰锌能完全抑制大豆疫霉菌对感病大豆品种的侵入 ,并具有较长的药效期 ,安克锰锌、杀毒矾和霜霉威虽然具有明显的防治效果但药效期很短。大豆疫霉菌菌株间对甲霜灵锰锌的敏感性存在差异 ,但这种差异与菌株来源没有相关性 ,EC50 平均值为 1.830 2μg/ m L ,没有发现耐药性菌株。在我国黑龙江省目前缺乏有效抗病品种的情况下 ,建议应用甲霜灵锰锌防治大豆疫霉根腐病。     

进口大豆中大豆疫霉的检测及检疫监管

大豆疫霉Phytophthora megasperma f.sp.glycinea是典型的土传病害.周肇慧等(1996)证实,大豆疫病可以种子带菌,并以卵孢子和菌丝体存在于种子的种皮、胚种子叶里,且卵孢子只产生于种皮.它可以通过种子及病残体传播,也可以通过混杂在种子中的病土颗粒传播.     

植物对卵菌的非寄主抗病性

 卵菌是多分枝的群体,包括60多种疫霉菌、多个活体营养的霜霉菌和100多种腐霉菌,其中许多是植物病原菌。     

辣椒疫霉游动孢子在不同基因型辣椒根表侵入活动的初步研究

 辣椒疫病是为害辣椒的世界性、毁灭性病害。70年代以来,我国的新疆、甘肃、吉林、北京及江苏等地辣椒疫病逐年加重,造成的损失愈来愈大。     

大豆疫霉细胞凋亡相关基因的鉴定与表达分析

为探讨大豆疫霉Phytophthora sojae细胞凋亡潜在的调控机制,根据已知的细胞凋亡蛋白,利用在线工具BLASTP、pFAM和SMART在大豆疫霉蛋白组数据库中鉴定细胞凋亡同源蛋白并构建其进化树,通过转录组数据和实时荧光定量PCR技术分析细胞凋亡相关基因在大豆疫霉生长、发育及侵染不同时期的表达情况。结果显示:在大豆疫霉中共鉴定到13个细胞凋亡同源蛋白,包括核酸内切酶G(PsNUC1)、细胞色素c(PsCYCS)、凋亡诱导因子(PsAIF)、丝氨酸蛋白酶(PsHtrA-1、PsHtrA-2和PsHtrA-3)、多聚ADP核糖聚合酶(PsPARP-1、PsPARP-2和PsPARP-3)和TatD核酸酶(PsTatD1、PsTatD2、PsTatD3和PsTatD4)。在进化上,PsNUC1、PsCYCS、PsAIF、PsHtrA-1、PsPARP-1、PsPARP-2、PsPARP-3、PsTatD1和PsTatD2与人及秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans的同源蛋白亲缘关系较近,而与真菌相关蛋白亲缘关系较远,PsHtrA-2、PsHtrA-3、PsTatD3和PsTatD4与酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae相关蛋白相似度更高,说明大豆疫霉细胞凋亡蛋白在进化中发生了较大变异。大豆疫霉细胞凋亡相关基因PsHtrA-1和PsRARP-1在孢子囊阶段诱导表达,PsHtrA-2和PsRARP-2在游动孢子阶段上调表达,PsAIF、PsHtrA-3、PsRARP-1和PsRARP-2在侵染阶段明显诱导表达,PsCYCS在侵染阶段下调表达。细胞凋亡相关基因在大豆疫霉不同阶段的表达模式有较大差异,说明细胞凋亡在大豆疫霉生长、发育及致病过程中具有重要作用。     

土壤环境对大豆疫霉Phytophthora sojae卵孢子萌动的影响

为明确土壤环境对大豆疫霉Phytophthora sojae卵孢子萌动的影响,将增强型绿色荧光蛋白标记的大豆疫霉卵孢子以2 500个卵孢子/g干土的比例接种于无菌黑土中,荧光显微镜下计数卵孢子的萌动率以明确其最适宜的土壤温度和含水量;在此基础上,从5种类型土壤和5种轮作体系土壤中筛选适宜卵孢子萌动的土壤环境。结果表明,25℃土壤温度和30%土壤含水量最适合大豆疫霉卵孢子萌动,萌动率为95.78%;黑土和盐碱土分别是最适合和最不适合卵孢子萌动的土壤类型,萌动率分别为94.94%和14.67%;卵孢子萌动率与土壤有机质含量、p H值和Ca2+含量间无明显相关性。大豆连作田和玉米连作田土壤适合卵孢子萌动,萌动率为96.33%和95.00%,小麦连作田土壤不适合卵孢子萌动,萌动率仅为39.33%。     

大豆中疫霉诱导性GmDRRP基因启动子的克隆与功能分析

本研究根据大豆与疫霉互作的基因芯片数据,筛选了一个受疫霉诱导表达的大豆抗病相关基因(Gm DRRP,glycine max disease resistance response protein),并对其启动子响应疫霉侵染的功能进行了研究。序列分析表明该基因编码一个大豆抗病相关蛋白。分别用SA、Me JA、ABA、ETH和GA3五种激素处理后,发现该基因的表达受激素的抑制。克隆其转录起始位点上游1 590 bp的启动子区,生物信息学分析发现该区域包含多个已知与逆境响应相关的顺式元件。进一步将启动子构建在融合Gus报告基因的植物表达载体上,分别瞬时转化烟草和稳定转化大豆根毛,并检测了Gus报告基因的表达情况。结果表明,Gm DRRP启动子均能在两种体系中不同程度的受疫霉诱导,其表达模式为接种后0.5 h被快速诱导,并在2 h时显著提高。根据生物信息学对顺式元件的预测结果,对启动子进行了分段分析,获得了一个222 bp的小片段,其疫霉诱导表达能力是全长启动子的34%。以上结果表明大豆的Gm DRRP启动子能被疫霉快速诱导。     

山苍子精油对辣椒疫霉生长发育的影响及对辣椒疫病的防效

为明确山苍子精油防治植物疫病的应用前景,在室内离体条件下测定其对辣椒疫霉Phytophthora capsici菌丝生长、孢子囊形成与萌发、游动孢子萌发的毒力,观测经山苍子精油处理后菌丝生长量及形态结构、细胞膜通透性和可溶性蛋白含量的变化;采用离体叶片法和灌根法分别测定山苍子精油对辣椒疫病的预防效果和治疗效果。结果表明,山苍子精油对辣椒疫霉的菌丝生长、孢子囊形成与萌发以及游动孢子萌发的有效中浓度EC_(50)分别为161.49、29.68、231.80、90.68 mg/L;EC_(50)和EC_(75)的山苍子精油处理显著降低了辣椒疫霉菌丝的鲜重和干重,抑制率均在49.71%以上,亦可显著降低菌丝中可溶性蛋白含量,抑制率分别为10.77%和18.47%;用山苍子精油处理菌丝后,其顶端生长受到抑制,分枝明显增多、间距缩短;细胞膜通透性增大。1 000 mg/L山苍子精油对辣椒疫病的预防效果达63.33%(离体叶片法),2 000 mg/L精油对辣椒疫病的预防效果和治疗效果分别达80.00%和68.00%(灌根法,7 d),均显著高于对照药剂嘧菌酯。表明山苍子精油是辣椒疫霉的有效抑制剂,在辣椒疫病综合治理中具有较大的应用潜力。     

温度对烟草黑胫病菌致病力及代谢表型的影响

为揭示温度对烟草黑胫病菌Phytophthora nicotianae致病力及代谢表型的影响,采用菌丝生长速率法和离体叶片法分别测定不同温度下烟草黑胫病菌的生长速率和致病力,同时采用Biolog代谢表型技术测定其在20、27、30和35℃下的渗透压和pH代谢表型。结果表明,烟草黑胫病菌在21~35℃范围内生长良好且具致病力,30℃时生长速率最快,为17.72 mm/d,30℃和35℃时致病力较强,叶片接种烟草黑胫病菌后24 h内便出现病斑,随温度升高病害的潜伏期缩短。温度影响烟草黑胫病菌的渗透压和pH适应性;27℃和30℃时烟草黑胫病菌的渗透压适应范围最广,其次为21℃,35℃时烟草黑胫病菌渗透压适应范围最窄;在20、27和30℃时,烟草黑胫病菌在pH 5.0~10.0范围内可正常代谢,在35℃时pH代谢范围为5.5~10.0。     

安徽省大豆疫霉根腐病菌的鉴定及rDNA-ITS序列分析

为明确安徽省夏大豆疫霉根腐病的病原菌种类,对采集自涡阳、怀远、固镇3个县的夏大豆病株及土样分离纯化后获得28株菌株,选取6株代表性菌株,通过形态学观察及核糖体DNA-ITS序列分析对其进行鉴定,并测定了其致病型。结果表明,6株菌株在利马豆培养基上菌落白色,质地均匀;菌丝无隔,致密,具近直角分枝;在10%V8C培养液中,游动孢子囊顶生,不脱落,卵形至椭圆形,无明显乳突,有内层出现象,长宽比大于1.6∶1;同宗配合,在利马豆培养基上单株培养产生大量卵孢子,藏卵器球形,雄器大多侧生;接种合丰35大豆品种后出现典型的大豆疫霉根腐病症状。r DNA-ITS序列分析表明,6株菌株与Gen Bank中大豆疫霉Phytophthora sojae的ITS序列同源性高达100%;菌株GY4、GY8、HY11、HY16、GZ10、GZ21的毒力公式分别为1b,2,3a,3b,4,5,6,7;1b,1d,3a,3b;1d,3a,3b,3c,4,5,6,7;2,3c,4,5,6,7;1b,3a,3c,5,8;3a,3b,5,6,7,8;属于6个不同的致病型。研究表明,这6株菌株均为大豆疫霉。     

大豆疫霉Phytophthora sojae卵孢子在黑龙江省土壤中的越冬存活率

为探究大豆疫霉Phytophthora sojae卵孢子在黑龙江省土壤中的越冬存活率及其与所处土壤深度和媒介的相关性,以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,将培养基及病残体中的大豆疫霉卵孢子分别接种到试验田框栽土壤表层下不同深处,检测其卵孢子的越冬存活率,同时在框栽中定量播种不含任何已知抗疫霉根腐病基因的大豆品种Sloan(rps),苗期调查其发病率。结果表明,大豆疫霉卵孢子在黑龙江省土壤中的适生性较强,可在5~15 cm深度土壤中安全越冬,越冬存活率高达81.67%~96.33%。卵孢子越冬存活率与其所处的越冬媒介关系不大,而与土壤深度有关。在5~15 cm范围内,随着土壤深度的增加,卵孢子越冬存活率增加。处于深层土壤中的卵孢子更容易打破休眠,进入萌发前的萌动状态。各处理间卵孢子越冬存活率的显著性差异并未在发病率上表现出来,说明除了土壤深度外,还有其它因素影响发病率。     

棉隆对辣椒疫霉病的防效及对土壤微生物群落的影响

为明确不同剂量棉隆对辣椒疫霉的防效及对土壤微生物群落的影响,在温室大棚条件下采用密封熏蒸法测定了不同剂量(300、450、600和750 kg/hm2)棉隆土壤熏蒸对土壤疫霉病菌的抑制率及田间防效,并采用Biolog法研究了其对土壤微生物功能多样性的影响。结果表明,不同剂量棉隆在熏蒸后揭膜当天(0)、80、140 d对辣椒疫霉病菌的抑制率分别为86.84%~100%、75.26%~96.37%和73.24%~95.46%;且80、140 d时对辣椒疫霉病的防效分别为77.19%~96.49%和70.00%~93.33%;在棉隆熏蒸揭膜当天各剂量处理下微生物对碳源的利用(用平均每孔颜色变化率表示)以及微生物多样性指数中的丰富度指数、均匀度指数及Mc Intosh指数均显著低于对照,而Simpson指数显著高于对照,随着试验时间的延长,各剂量对其影响逐渐减小,但高剂量尤其是750kg/hm2处理在140 d时仍与对照差异显著。表明棉隆剂量越高对辣椒疫霉病的防效越显著,对微生物活性影响越大,高剂量处理能明显抑制土壤微生物的活性,降低土壤微生物的多样性。     

马铃薯晚疫病菌对甲霜灵抗性的快速检测方法

为快速检测马铃薯晚疫病菌——致病疫霉Phytophthora infestans对甲霜灵的抗性,基于已知致病疫霉RPA190基因的T1145A变异引起的F382Y氨基酸点突变与甲霜灵抗性有关,通过设计4对特异性引物F382Y-F1/F382Y-R、F382Y-F2/F382Y-R、F382Y-F3/F382Y-R和F382Y-F4/F382Y-R建立等位基因特异性PCR(allele specific-polymerase chain reaction,AS-PCR)快速分子检测法,其中F382Y-R引物在4对引物里保持不变,并分析所建分子检测法的特异性和灵敏度。结果表明,正向特异性引物F382Y-F2、F382Y-F3和F382Y-F4的3''末端在致病疫霉抗甲霜灵菌株原有核苷酸突变位点1145A(对应引物为F382Y-F1)的基础上,再人工引入第1144位的核苷酸突变,将1144T分别突变成1144G、1144C和1144A,并优化退火温度和特异性引物与内参引物ITS1/ITS4比例,最终确定最适退火温度分别为54、60和58℃,特异性引物与内参引物最适浓度比例均为5∶1。以该3条引物对应的3对特异性引物和内参引物ITS1/ITS4组成的3组多重AS-PCR引物对甲霜灵敏感和抗性菌株具有良好的特异性,敏感菌株的扩增产物含1条879bp的内参片段,抗性菌株的扩增产物为1条879bp的内参片段和1条461bp的目的片段。3组AS-PCR检测体系均具有较高的灵敏度,其中引物F382Y-F4/F382Y-R对致病疫霉DNA的检测灵敏度达0.4pg/μL,引物F382Y-F2/F382Y-R和F382YF3/F382Y-R的检测灵敏度达4pg/μL。     

Pathogenicity and RAPD analysis of Phytophthora nicotianae pathogenic to pepper in Tunisia

Nine isolates of Phtophthora nicotianae were isolated from infected pepper plants. Their pathogenicity was studied in Capsicum annuum in comparison with P. nicotianae isolates from tomato and tobacco. The pathogenicity test showed that pepper isolates of P. nicotianae are adapted to their host. Banding patterns obtained by RAPD analysis with six oligonucleotide primers revealed polymorphism that grouped the isolates independently of the plant host. The polygenic dendrogram showed that pepper isolates were more similar to tomato isolates than to tobacco isolates. The RAPD bands of 1300 and 1500 bp, detected with primers OPD-01 and OPD-10, respectively, appeared specific to the most pathogenic pepper isolates. The OPK-08-1950 seems specific to the isolates of P. nicotianae from tomato. These results suggest that host specified might occur in P. nicotianae and that may be due to interspecific hybridization events resulting in novel pathogenic behavior.