棉花枯萎病生防菌的筛选及其抑菌机理初探

为获得能够防治棉花枯萎病的生防菌株,本试验从发生棉花枯萎病的棉田中筛选抑菌效果较好的生防菌株;通过形态学特征、生理生化特征与分子生物学方法对其进行菌种鉴定,并通过平板对峙法检测生防菌株粗提物对尖孢镰刀菌的防治效果及稳定性.结果筛选到一株抑菌效果较好的菌株JNJX-2,经鉴定为多粘类芽孢杆菌.该菌株的抑菌谱较广泛,对灰葡...     

枯草芽孢杆菌菌株Czk1挥发性物质的抑菌活性及其组分分析

【目的】明确橡胶树内生枯草芽孢杆菌菌株Czk1挥发性物质的抑菌活性及其组分,为橡胶树病害的生物防治提供参考。【方法】以橡胶树红根病菌GP010为指示菌,分别以5种不同培养基LB、TSB-YE、TSB、NB和PDA为营养来源,利用双皿对扣法和菌丝生长速率法评定不同营养条件下Czk1挥发性物质对病原菌的作用活性强弱,筛选产抑菌挥发性物质的最优培养基;通过双皿对扣法测定Czk1挥发性物质对橡胶树5种根病菌(红根病菌、褐根病菌、白根病菌、紫根病菌和臭根病菌)和橡胶树炭疽病菌的抑菌活性,并利用顶空固相微萃取—气相色谱—质谱法(HSSPME-GC-MS)鉴定Czk1的挥发性物质组分。【结果】在LB培养基中,Czk1在不同浓度下的抑菌活性均优于其他培养基,是Czk1产抑菌挥发性物质的最优培养基。Czk1挥发性物质对6种参试病原菌均表现出良好的抑制作用,Czk1菌液浓度为105CFU/mL时抑制率均在50.00%以上,Czk1菌液浓度为108CFU/mL时抑制率在90.00%以上;Czk1挥发性物质可抑制紫根病菌、炭疽病菌和臭根病菌色素的产生,促进褐根病菌产生色素,并导致紫根病菌、褐根病菌和炭疽病菌菌丝生长畸形;其对橡胶树炭疽病菌孢子萌发抑制率为71.30%;其在土壤中对橡胶树红根病菌和褐根病菌仍具有较好的抑菌效果,抑制率分别为63.37%和54.57%。利用HS-SPME-GC-MS对Czk1所产挥发性物质组分进行分析,共分离鉴定获得包括碳氢化合物、胺类、醇类、烯类、酚类、酯类、吡嗪类、醛类、酮类及其他类等33种挥发性物质。【结论】Czk1所产挥发性物质可作为生防资源应用于橡胶树病害防治。     

生防菌HY-19的鉴定及其抑菌物质研究

[目的]明确HY-19的抑菌物质特性及其分类地位。[方法]以苹果褐斑病等为靶标采用平板对峙法分析其拮抗谱,对HY-19进行形态观察、生理生化测定和分子鉴定及其抑菌物质特性研究。[结果]菌株HY-19拮抗活性强且抑菌谱广,综合形态、生理生化及系统发育树分析,确定HY-19为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)。HY-19无菌滤液对病原指示菌有拮抗活性,且酸碱稳定性、蛋白酶、抗紫外辐射表现良好。HY-19含有丰原素等4种抑菌代谢产物合成基因,表明该菌株可能产生抗菌肽类物质,从而达到抑菌效果。[结论]该研究为苹果病原真菌的生防制剂开发与利用提供科学依据。     

防治棉花黄萎病生防菌的筛选及其防治效果评价

研究采用平皿对峙和促生实验相结合的筛选方法,从棉花根际土壤中分离到282株细菌,加上实验室筛选获得的对番茄有防病促生作用的21株细菌进行抑菌活性测定,共获得对棉花黄萎病菌有拮抗作用并能够有效促进棉花发芽和生长的菌株10株.通过盆栽和小区试验筛选,获得了5株对棉花黄萎病有良好防治效果的拮抗细菌,分别为S44、S258、S128、S37、S171,对棉花黄萎病的田间相对防效分别为38.53;、60.29;、39.58;、32.75;和37.02;,而化学农药福多甲的防治效果仅为28.34;.同时5株生防菌均能促进棉花生物量的增加.     

人参土传病害生防菌株的筛选及抑菌活性研究

[目的]筛选获得对人参土传病害具较好防治作用的生防菌株。[方法]采用稀释平板法和平板对峙培养法从患病人参根际土中分离筛选生防菌,并对菌株进行形态学、生理生化特征和16S rDNA鉴定。[结果]以立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、尖镰孢菌（Fusari-um oxysporum）和腐皮镰孢菌（Fusarium solani）为指示菌株,从黑龙江铁力农场患病人参根际土中筛选获得2株具较强拮抗作用的生防菌株B59和X1,鉴定为枯草芽孢杆菌。2株生防菌对8种不同真菌的抑菌率平均达90%以上,初步研究表明B59和X1菌株可分泌抗菌活性物质。[结论]2株生防枯草芽孢杆菌B59和X1菌株对人参土传病原菌具较强的拮抗作用,具有一定的开发应用潜力。     

茄子黄萎病生防内生细菌Jaas ed1产生的抑菌物质特性初步分析

为充分挖掘利用茄子黄萎病生防内生枯草芽孢杆菌Jaas edl,对其产生的抑菌物质特性进行了初步研究.结果表明枯草芽孢杆菌Jaas ed1产生的挥发性物质对茄子黄萎病菌菌丝生长具有较强的抑制作用.另外,该菌株还具有产嗜铁素活性.对其抗生素生物合成基因进行PCR检测和序列分析,结果显示,枯草芽孢杆菌Jaas ed1内可检测到Bacillomycin D的部分合成基因bamD和bamC,Bacilysin bacD的部分合成基因bacAB(引物:BACAB-F1,BACAB-R1),序列与GenBank已登录的基因相似性分别高达98%、98%和99%.     

枯草芽孢杆菌BAB-1产脂肽类及挥发性物质的分离和鉴定

【目的】对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株BAB-1产生的脂肽类物质和挥发性物质进行分离鉴定和抑菌活性研究。【方法】采用HPLC和MALDI-TOF-MS对脂肽类物质进行分离纯化和鉴定;采用GC-MS对挥发性物质进行鉴定。【结果】HPLC分析表明,菌株BAB-1产生的脂肽类物质由LP-1、LP-2、LP-3三类组分组成,其中LP-2起主要抑菌作用。MALDI-TOF-MS质谱分析表明,LP-1为surfactin(C13—C15),LP-2为fengycin A(C14—C15)和fengycin B(C14—C18),LP-3成分未能确定。GC-MS结果表明,菌株BAB-1产生的挥发性物质由多种成分组成,主要为醇类、酮类、酸类、胺类和烷烃类等。【结论】枯草芽孢杆菌菌株BAB-1能够产生脂肽类物质和挥发性物质,并且这两类物质都具有较强的抑菌活性。     

人工合成抗菌肽对棉花黄萎病菌的抑菌效果

大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)是引起棉花黄萎病的真菌病害,广泛存在于中国的产棉区,使棉花产量和品质大幅下降。虽然,人们长期以来一直在寻找抗病基因,但很难在陆地棉中发现。为了寻找对棉花黄萎病菌有强抑制作用的抗菌肽或基因,人工设计和合成了20条抗菌肽(简称"人工肽"),通过抑菌圈法从中筛选到3条最有潜力的人工肽(D4E1、D51和D28),并与2条天然抗菌肽(Decoralin和Pseudin,简称"天然肽")进行对比,用于鉴定其对棉花黄萎病菌的抑菌活性。结果表明,D4E1和D51这2条人工肽的抑菌活性最强,在多肽质量浓度为20μg/mL时,几乎能100%地抑制黄萎病菌的菌丝生长和孢子萌发,显示出高抗特性。同时,实验采用生物信息学软件和反相高效液相色谱法测定了抗菌肽疏水活性,结果表明反相高效液相色谱保留时间可以更有效地表示抗菌肽的疏水活性,从而能更准确推测抗菌肽的抑菌活性。上述研究结果说明:1)如果有一个好的人工设计,人工肽对黄萎病菌的抑制效果会比天然肽更佳;2)人工肽的氨基酸序列可推导出核苷酸序列,作为抗棉花黄萎病的候选基因,用转基因育种技术可获得抗病新品种。     

雪松挥发性物质的抑菌效果研究

以雪松为试验材料,采用固相微萃取法和菌类恒温培养法研究雪松的主要挥发性物质以及其抑菌效果。结果表明,雪松的挥发性物质主要包括萜烯类、醇类、酯类、醛类等,且因月份不同挥发性物质的组成呈现出不同的规律,雪松对细菌的抑制效果最强,平均抑制率为70%以上,对放线菌的抑制效果次之,平均抑制率为29%,雪松挥发性物质对真菌没有抑制效果反而有一定程度的促进作用,平均促进率为37%,蒎烯是雪松影响菌类生长的最主要活性成分。     

棉花内生菌筛选纯化及抑菌效果研究

内生菌是一类新的微生物资源,能够产生多种生物活性物质,具有重要的研究价值,开发前景广阔[8]。本文对新疆地区健康棉花根部[7-9]幼叶进行表面消毒灭菌、分离、纯化、鉴定的研究,初步了解棉花内90%的内生菌都为芽孢杆菌[1]。参照《常见细菌鉴定手册》对菌株的属种及其形态、培养性状和生理生化特性进行鉴定,试验得出芽孢杆菌的分离频率最高,为优势种群。平板对峙试验表明,芽孢杆菌对两种植物病原真菌有抑制作用。     

棉花黄萎病内生拮抗细菌L 4 2的鉴定及定殖

从棉花健株茎内分离筛选到一株棉花黄萎病内生拮抗细菌L-4-2,通过形态特征观察、生理生化试验及16S rDNA同源性序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique aciens).通过逐步提高药物质量浓度的方法,获得能在含利福平100 mg/L NA培养基中生长并对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae Kleb)拮抗活性稳定的L-4-2抗性菌株,测定L-4-2在棉花根、茎内的定殖能力.结果表明,拮抗菌L-4-2能在棉花根、茎内很好地定殖和传导;接种第7天根内的定殖数量达到最大,为2.3×105 cfu/g;接种第14天茎内定殖数量达到最大,为1.6×105 cfu/g;随后在根、茎内的定殖数量有所下降;接种35 d后在棉花根、茎内仍有很强的定殖能力,定殖数量分别为9.6×103 cfu/g和3.24×104 cfu/g.     

棉花枯萎病拮抗细菌的筛选

棉花枯萎病严重影响棉花的生产,为解决棉花枯萎病防治问题,本研究从棉花枯萎病病田土壤中筛选出对棉花枯萎病菌抑菌效果较好的细菌2株,分别为菌株BH1和菌株BH2,拮抗菌无菌发酵液对棉花枯萎病菌孢子萌发和菌丝生长都有一定抑制作用,可以推迟病原菌孢子萌发时间,使芽管顶端膨大,原生质外渗,病原菌菌丝顶端出现囊泡、菌丝体溶解及原生质体外渗等现象。     

不同棉花品种(系)的黄萎病抗性及其与经济性状的相关性

研究了若干棉花品种(系)及不同组合棉花杂交群体的经济性状,分析经济性状与病情指数的相关性。结果显示:①海陆杂交群体的抗性比陆陆杂交群体的抗性普遍偏高;②陆地棉品种(系)病情指数与有效果枝、有效铃数呈显著负相关;③陆陆杂交群体M44株系的相对病指与有效果枝、铃数、有效铃数呈显著负相关;④海岛棉品种(系)相对病指和株高呈显著负相关;⑤海陆杂交群体M37株系的相对病指与株高和始节高呈显著负相关;⑥有效果枝和有效铃数可以作为对黄萎病抗性间接鉴定的指标。⑦海陆杂交后代中,与抗病性共同遗传的为株高,因此可将株高作为分子标记辅助抗病育种的参考。     

2009-2015年陕西棉花品种抗病性鉴定及分析

通过对陕西省2009-2015年棉花区域试验及生产试验160个陆地棉棉花品种（系）的抗枯黄萎病的鉴定结果分析,未发现对枯萎病和黄萎病均免疫的品种。对枯萎病呈高抗的品种有71个,占测试品种的38.1%;未发现对黄萎病高抗的品种,达到抗性水平的品种有77个,占测试品种的48.1%。从7 a测试结果来看,对枯萎病抗性水平总体呈下降趋势,对黄萎病抗性水平总体呈增强趋势,但未见对黄萎病抗性水平达到高抗及以上的品种。共筛选出7个品种（系）对枯黄萎病表现突出的兼抗性。     

棉花品种资源黄萎病田间抗性鉴定和评价

通过田间抗病性鉴定和分析,掌握种质抗病性分布状况,筛选抗黄萎病核心资源,经遗传改良,定向选育与新疆棉花产业需求相吻合的抗病品种,并探讨病害治理策略。以收集的396份陆地棉品种资源为鉴定对象,2018-2019年,通过自然病田小区试验,在6月底(蕾期)和8月底(铃期),采用5级分级法,对品种资源进行黄萎病抗病性鉴定和评价。供试陆地棉种质具备丰富的抗病遗传多样性,种质间黄萎病变异系数高,可选择抗病种质加以利用。年度间各材料发病程度差异大,2018年发病明显重于2019年,但材料间发病趋势基本相同;蕾期发病较轻,铃期发生重。两年自然病田鉴定平均73.3%的材料蕾期未发病;铃期相对病指超过20的材料占比46.0%,相对病指为0.1～20.0的占比50.4%,未发病的占3.6%。铃期发病最重材料的发病率达100%,病指高达75.0;2018年铃期参加鉴定材料平均发病率和病指分别达38.8%、19.2,比2019年分别高19.0个百分点和8.7。发病率与病指间存在极显著正相关,相关系数>0.93;蕾期发病率和病指比铃期变异系数大,蕾期与铃期存在极显著正相关,平均相关系数分别为0.28、0.3...     

紫荆黄萎病病原菌研究

在紫荆树上发现1种紫荆新病害 紫荆黄萎病,病叶症状有2种类型：一种为灰绿色干枯型,主要表现为叶片从边缘开始失水萎蔫,逐渐向叶片中心扩展,后期整个叶片皱缩卷曲、质地较脆,呈现灰绿色焦枯状;另一种为黄色萎蔫型,前期叶片从边缘开始变黄萎蔫,逐渐向内部扩展,病健交界处有明显界限,后期叶片皱缩,颜色呈现淡黄色到淡橘黄色。发病枝条的维管束呈浅橘红色或褐色,病叶不脱落。依据Koch’s准则证明,分离物CC001是引起该病害的病原菌。对CC001菌株的rDNA ITS区段进行PCR扩增和测序,并结合形态学特征鉴定为大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）。寄主范围测定结果表明,该病菌还可以侵染马铃薯和棉花。该研究是国内关于紫荆黄萎病的首次报道。     

西瓜枯萎病拮抗细菌的筛选

采用梯度稀释法对23份土样进行筛选,共获得114株不同类型且长势良好的细菌,其中8株细菌对西瓜枯萎病病菌的拮抗性能较好。对此8株细菌进行革兰氏染色,有7株为革兰氏阳性菌;进行芽孢染色,其中6株细菌产生芽孢。     

棉花黄萎病生防芽孢杆菌S12产芽孢培养基的响应面优化

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)S12是分离自新疆棉田根际土壤的一株广谱抑菌菌株,尤其对棉花黄萎病大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)孢子萌发和菌丝生长具有较强的抑制作用。为了提高菌株S12发酵液中芽孢产量,对其发酵培养基组分及配比进行优化。首先通过单因素试验分别分析6种不同碳源、氮源和无机盐对菌株S12芽孢产量的影响,随后采用Plackett-Burman试验设计确定影响芽孢产量的主要因子,并利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法优化确定主要影响因子的最佳配比。最终获得菌株S12产芽孢培养基的优化配比组合为:玉米粉1.30%、大豆蛋白胨1.51%、CaCO30.08%、NaH2PO4·2H2O0.2%、Na2HPO4·2H2O 0.4%。优化后芽孢产量达到7.46×108 mL-1,与初始培养基相比提高了387.58%。可见,通过优化培养基组分,提高发酵液中芽孢产量,降低生产原料成本,为其进一步生防菌剂的工业化生产奠定基础。     

水分散粒剂H14对棉花黄萎病发生及土壤细菌群落的影响

试验设置水分散粒剂(H14)、商业可湿性粉剂(SY)和空白对照(CK)3组处理,在棉花花铃期调查黄萎病发生状况,并通过高通量测序分析不同处理中细菌群落多样性。结果显示同CK处理相比,H14和SY处理中棉花黄萎病发病率分别显著下降42.35%和39.25%,病情指数分别显著下降52.41%和48.78%;大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)相对丰度分别显著下降45.73%和24.47%。3组处理样品测序后共获得517 453个优质序列,基于97%的序列相似度进行聚类分析,获得可操作分类单元(OTUs)24 353个,经鉴定属于细菌的54个门、244个科和571个属。其中变形菌门(Proteobacteria)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、放线菌门(Actinobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)和绿弯菌门(Chloroflexi)为各处理样品的优势菌群。H14、SY处理中Chao1和ACE指数相较于CK处理分别增加16.27%和14.71%、13.84%和12.90%;Shannon和Simpson指数相较于CK处理...     

XQ生防菌防治烟草青枯病研究

为了研究XQ生防菌对烟草青枯病的防治效果,以云烟87为供试烤烟品种,通过大田试验探讨了喷施XQ生防菌对烤烟农艺性状、烟草青枯病防效、烟叶物理特性、化学成分及经济效益的影响。结果表明:施用XQ生防菌后烤烟的长势旺盛,烤烟青枯病发病率降低、病情指数降低,移栽120 d后相对防效为81.87%;烤后烟叶物理特性较好,烟叶内部化学成分更趋协调,中上等烟比例和均价有所提升;同时,烤烟的产量和产值分别比对照高258.71 kg/hm~2和13 094.69元/hm~2,经济效益得到显著提高。这说明XQ生防菌制剂对烤烟青枯病的防治效果较好。