rbe1正、反义基因改变籼稻直链淀粉含量的研究

用农杆菌介导法将水稻淀粉分支酶1正、反义基因rbe1分别导入籼稻恢复系明恢81中。PCR和Southern杂交检测表明：rbe1已整合进水稻基因组中。T_0代种子直链淀粉含量测定结果表明：转rbe1正向表达结构的明恢81直链淀粉含量总体上明显下降,转rbe1反向表达结构的明恢81直链淀粉含量总体上明显上升。     

玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子的克隆与特异表达（英文）

[目的]构建玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。[方法]LA-PCR扩增了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子序列,并克隆到pMD18-TVector上。再将启动子克隆到pBI121载体上,构建植物表达载体pBI121-sbeⅡb。把GUS基因连到pBI121-sbeⅡb上构建pSBE-GUS后利用农杆菌介导法转化烟草。分别进行PCR和Southern杂交检测,并对经基因枪轰击和农杆菌介导的烟草种子、根、茎及叶进行GUS组织化学分析和荧光检测。[结果]测序结果与GenBank中发表的玉米sbeⅡb基因启动子同源性达98.52%。共培养和筛选培养后获得4株转pSBE-GUS植株,叶片仅有少量蓝斑出现,而根和茎部未见蓝斑,但烟草种子有大量蓝斑显出,初步推断sbeⅡb基因启动子能启动GUS在种子中特异表达。[结论]成功构建了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。     

玉米淀粉分支酶sbe Ⅱ b基因启动子的克隆与特异表达

[目的]构建玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。[方法]LA-PCR扩增了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子序列,并克隆到pMD18-TVector上。再将启动子克隆到pBI121载体上,构建植物表达载体pBI121-sbeⅡb。把GUS基因连到pBI121-sbeⅡb上构建pSBE-GUS后利用农杆菌介导法转化烟草。分别进行PCR和Southern杂交检测,并对经基因枪轰击和农杆菌介导的烟草种子、根、茎及叶进行GUS组织化学分析和荧光检测。[结果]测序结果与GenBank中发表的玉米sbeⅡb基因启动子同源性达98.52%。共培养和筛选培养后获得4株转pSBE-GUS植株,叶片仅有少量蓝斑出现,而根和茎部未见蓝斑,但烟草种子有大量蓝斑显出,初步推断sbeⅡb基因启动子能启动GUS在种子中特异表达。[结论]成功构建了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因种子特异表达启动子。     

大麦转玉米淀粉分支酶基因的初步研究

以5个大麦品种的由成熟胚再生体系产生的胚性愈伤组织为受体材料，以构建好的Bar基因为选择基因的玉米淀粉分支酶基因表达载体为目的基因，用基因枪法对其进行了转化。在转化的大麦中，5个不同基因型品种的抗性愈伤获得率为10．32％～17．13％，将抗性愈伤组织转移到分化培养基中进行分化，绿苗分化率为0％～14．29％，移栽到小花盆中的再生植株有28株。其中87.3175有11株，87．0053有9株，97．4010有3株，97．6004未分化出苗，208813．509有5株；移栽成活的87．3175有4株，87．0053有5株，208813-509有3株。对10株再生植株进行了PCR检测，其中有7株扩增出0．5kb的Bar基因特异条带，2株扩增出2．4kb的sbe2b基因特异条带，3株扩增出2．5kb的sbel基因特异条带。对PCR扩增的条带回收测序，测序结果与各自的基因序列相符合，说明外源基因已经整合到大麦基因组中。     

高直链淀粉玉米研究进展

综述了高直链淀粉玉米的应用价值，国内外研究现状，淀粉修饰基因的遗传修饰作用，育种中存在的问题以及育种方法，展望了高直链淀粉玉米的发展前景。     

玉米淀粉分支酶sbe2a基因反义载体的构建及其转基因初步研究

应用PCR技术克隆了玉米淀粉分支酶sbe2a基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PER检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对.结果表明:克隆片段长度为562 bp.将该基因反向插入到pWGLL载体Aetin-pro启动子下游,构建高效反义表达载体,通过花粉管通道法将其导入玉米自交系"铁7922",经PCR检测初步证明外源基因已整合到玉米基因组中.     

稻米直链淀粉含量的遗传研究进展

综述了稻米直链淀粉含量的遗传研究进展,简述了不同直链淀粉含量的亲本杂交后代的相关遗传表现,并提出了今后水稻品质改良育种的研究方向。     

稻米直链淀粉含量的遗传研究进展

综述了稻米直链淀粉含量的遗传研究进展,简述了不同直链淀粉含量的亲本杂交后代的相关遗传表现,并提出了今后水稻品质改良育种的研究方向。     

应用农杆菌介导法将淀粉分支酶基因反义表达载体转入玉米自交系的研究

以玉米自交系“综31”和“P12”的胚性愈伤组织为材料，通过愈伤组织对潮霉素的敏感性试验，确定了潮霉素50～70mg／L为愈伤组织适宜选择压。利用农杆菌介导法将玉米淀粉分支酶基因的反义表达栽体导入玉米自交系中，并对农杆菌转化系统的条件进行了研究。结果表明：采用EHA105的菌株振荡20h后，菌液OD值为0．5～0．6时侵染25min为农杆菌转化的最适条件。对转化的愈伤组织进行分化诱导出苗后进行PCR检测，证明外源目的基因已整合到玉米基因组中，转化率最高达到5．3％，并得到了转化植株的种子。     

玉米淀粉分支酶基因启动子的克隆及生物信息学分析

[目的]为了研究不同淀粉含量的启动子之间是否有差异及对直链淀粉合成途径是否有影响.[方法]以常规玉米叶片基因组DNA为模板,利用NCBI网站公布的高直链玉米淀粉分支酶基因(Zea mays starch branching enzyme IIb,SBEIIb)序列设计引物,通过PCR反应扩增出常规玉米淀粉分支酶基因的启动子序列,将该扩增片段与T载体连接后测序,并与高直链玉米淀粉分支酶基因启动子的序列进行比较分析.[结果]结果表明:玉米淀粉分支酶基因启动子与公布的启动子序列同源性高达99.3%,序列差异Pi值为0.007 16,该差异主要是SNP(单核苷酸多态性)和Indel(插入/缺失)造成的,推测该差异可能会影响到淀粉分支酶基因的表达,是造成玉米直链淀粉含量差异的因素之一.[结论]该研究为深入了解玉米直链淀粉合成机理提供了重要依据.     

玉米sbe2a基因RNAi载体的构建及转化玉米的初步研究

采用PCR技术克隆了玉米淀粉分支酶sbe2a基因的cDNA片段,将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并进行序列分析.结果表明:克隆片段长度为562bp,将该基因的正义和反义片段插入到pCAMBIA1301改造过的载体p35-1301的35S启动子下游,构建高效RNAi表达载体,通过花...     

转反义蜡质基因纯合株系间直链淀粉含量与RVA谱关系分析

 【目的】排除以往水稻亚种或品种间RVA谱分析时存在着的遗传背景差异,分析转反义蜡质基因不同直链淀粉含量纯合株系间RVA各特征值的差异,更清楚地揭示直链淀粉含量与RVA谱特征值的关系。【方法】采用根癌农杆菌介导共转化和花药培养相结合的方法,培育含有反义蜡质基因的花培纯系,并对各株系进行直链淀粉含量和RVA谱测定和分析,通过比较RVA谱曲线图形及RVA谱特征值的显著性测定,分析相同遗传背景条件下直链淀粉含量对各RVA谱特征值的作用。【结果】在武运粳7号转基因后代中,获得了只含反义蜡质基因、不含潮霉素抗性标记的花培株系77个,经T1H1和T1H2二代直链淀粉含量测定,有19个株系的直链淀粉含量接近对照（对照16.0%）;有50个株系直链淀粉含量比对照下降1%～5%,其中,直链淀粉含量在11.0%～13.9%有30个株系;另外,有8个株系的籽粒为蜡质状,直链淀粉含量降至3.1%～4.0%。不同直链淀粉含量纯系间RVA谱分析发现存在二种RVA谱曲线图形,直链淀粉含量在3.1%～4.0%株系明显不同其它株系,也不同于常规糯稻;对RVA谱曲线图形相同、直链淀粉含量不同的株系进行分类比较,低直链淀粉含量株系的RVA谱曲线最终表现为曲线逐步上升,但没有超越第1个峰值。对不同直链淀粉含量株系类群的各RVA谱特征值进行显著性测定,3.1%～4.0%株系群有5个特征值与其它二个株系群存在极显著差异;11.0%～13.5%株系群有3个特征值与对照16.0%组存在极显著差异;直链淀粉含量与RVA谱各特征值之间优化数学模型显示：峰值时间和消减值与直链淀粉含量关系较为密切。【结论】导入反义蜡质基因,能导致直链淀粉含量降低;通过花药培养能快速获得纯合株系;直链淀粉含量差异不仅影响到各RVA谱特征值,而且还造成RVA谱曲线不同。     

氮肥施用量对春玉米籽粒淀粉含量及淀粉合成关键酶活性的影响

以不同品种春玉米为试验材料,研究氮肥施用量对春玉米子粒淀粉含量及淀粉合成关键酶活性的影响。结果表明,在一定施氮范围内随氮肥施用量提高,淀粉含量表现增加趋势,品种间存在差异;在吐丝49天之内,SS活性呈单峰曲线变化,到吐丝21天达到高峰,之后缓慢下降,但高氮处理下降速度慢于低氮处理;子粒灌浆期间ADPG焦磷酸化酶活性呈单峰曲线变化,四单19的ADPG焦磷酸化酶活性最高,依次是东农早粘、东农248、东甜4号,氮肥施用量对ADPG焦磷酸化酶活性影响较大;ADPG焦磷酸化酶活性与淀粉含量的关系除吐丝后7天相关未达显著水平,其它均达极显著正相关;SS分解活性与子粒中淀粉含量在吐丝后均呈显著和极显著正相关关系。     

玉米淀粉分支酶基因片段的克隆和植物表达载体的构建

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行了PCR检测和限制性内切酶分析,测定了DNA全序列。结果表明：克隆片段全长为935bp。将反义 正义基因片段插入到pB1121 35S启动子下,构建成表达质粒pCJSBE2b。通过花粉管通道法将其导入玉米自交系,获得了转基因植株。     

直链淀粉含量及淀粉平均聚合度对抗性淀粉含量影响的研究

直链淀粉含量与淀粉平均聚合度对抗性淀粉的形成有着重要的影响,以玉米淀粉、红薯淀粉、豌豆淀粉、绿豆淀粉为原料,采用普鲁兰酶和α-淀粉酶协同制备抗性淀粉,改变淀粉的直链淀粉含量和聚合度,分析淀粉直链淀粉含量及其聚合度与抗性淀粉含量的关系。结果表明,直链淀粉含量与抗性淀粉含量呈明显正相关,平均聚合度在一定范围内有利于提高抗性淀粉的含量。     

Determination of Amylose Content and Its Relationship with RVA Profile Within Genetically Similar Cultivars of Rice (Oryza sativa L.ssp.japonica)

Anther culture pure lines with antisense Wx gene were generated by Agrobacterium tumefaciens-mediated co-transformation followed by anther culture in transgenic rice (Oryza sativa L.ssp.japonica).The antisense Wx transgenic pure lines were used to analyze the differences and the relationship between RVA eigenvalues among the lines with different amylose contents.77 pure lines of anther culture having antisense Wx gene were studied for the amylose content of its offspring cultivar,Wuyunjing 7.It was found that levels of amylose content were similar to the control in 19 lines (16.0%);1-5%lower than control in 50 lines,of which,within 11.0-13.9% in 40 lines;and 3.1-4.0% in 8 lines.The effect of the amylose content on RVA eigenvalue was analyzed through the RVA profile graphic comparison and test of significance for RVA eigenvalues.The analysis of RVA profiles with different amylose contents indicated that there were two kinds of RVA profiles within genetically similar cultivars.The lines with 3.1-4.0% of amylose content were distinctly different from other lines and conventional glutinous rice.The comparison of the similarity curve of RVA profile of the lines with different amylose contents showed that the lines with lower amylose content had a distinguished RVA profile with the curve increasing gradually,but not exceeding the first apex.The test of significance for eigenvalues of the RVA profile in the lines with different amylose contents indicated that there were five eigenvalues remarkably different among the lines with 3.1-4.0% of amylose content compared with other two groups.Further,there were three eigenvalues remarkably different among the lines with 11.0-13.5% of amylose content compared with control group.An optimized mathematical model,which characterizes the relationships between the amylose content and RVA eigenvalue,has been established in this study.From this model,it was clearly indicated that the parameters PeT and SBV were more related to amylose content.It was concluded that the differences in amylose content not only affected the eigenvalues of RVA but also caused different RVA profiles within genetically similar cultivars.The introduction of antisense Wx gene could lead to reduce the amylose content and lay theoretical foundation for quality improvement in rice breeding programs.