山羊MMP-9基因cDNA的克隆及生物信息学分析

为了克隆山羊基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因的cDNA片段,分析其基因序列,试验于无菌条件下采集泌乳期奶山羊乳腺组织并提取总RNA。根据已知其他物种的MMP-9基因保守性区域设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增MMP-9基因的CDS区,测序后对核苷酸和推导的氨基酸序列进行分析,并对8个物种进行聚类分析。结果表明:得到长度为2 245 bp的MMP-9基因cD-NA片段(GenBank登录号为JQ670877),其中包含2 130 bp的CDS全长;核酸序列分析结果显示,该基因编码709个氨基酸,与人、小鼠和牛的核苷酸序列进行比对,相似性分别为84%、80%、96%,氨基酸相似性分别为79%、73%、94%。     

马急性滑膜炎模型关节液中MMP-3和MMP-13含量变化的研究

关节滑膜炎是骨关节疾病发病的基本病理过程,试验通过研究马急性滑膜炎关节液中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)含量的变化,进而研究马滑膜炎机理。试验选用8匹马,在马右侧中间腕关节内注入0.5 ng大肠杆菌脂多糖(LPS)诱导滑膜炎,同时在对侧关节内注入等量的PBS作为对照,于注射药物前和注射药物后的8、24 h和168 h,采马关节液.用ELISA检测马关节液中MMP-3和MMP-13的含量。结果注入LPS的关节液中MMP-3和MMP-13的量在注射后的24 h内持续升高,在24 h达到最大量10.01 ng/mL和6.08 ng/mL,与对照组比较差异性显著,24 h后开始下降,168 h时含量恢复到对照水平。试验结果表明,12'S诱导的滑膜炎模型为一过性的.在急性滑膜炎过程中,MMP-3和MMP-13的表达和释放增加,并且这两种酶在滑膜炎过程中起到重要作用。     

猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9在猪肌肉和脑组织的表达分布

应用免疫组化分析猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.用猪带绦虫卵1 mL(8万个/mL)灌胃20 d龄健康乳猪6头,于感染后40、80、120 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及脑组织制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及脑组织的猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9的表达.结果显...     

基质金属蛋白酶-9表达与早产胎膜早破的关系研究

目的 :探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与早产胎膜早破(PPROM)的关系。方法 :采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测早产胎膜早破组58例、足月胎膜早破组46例、对照组31例孕妇的血清基质金属蛋白酶-9的水平,结果早产胎膜早破孕妇的基质金属蛋白酶-9水平明显高于足月胎膜早破者,而且胎膜早破孕妇的血清中基质金属蛋白酶-9水平亦高于对照组(P<0.01)。结论:检测孕妇血清的MMP-9水平可作为早产胎膜早破良好的预测指标,测定孕妇血清的MMP-9水平还有助于胎膜早破的早期诊断。     

肌抑素对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响

本研究旨在揭示肌抑素（MSTN）与基质金属蛋白酶（MMPs）的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响。对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系：单等位基因敲除的PK3108细胞系和双等位基因敲除的L18细胞系,通过实时荧光定量PCR和Wesrern blotting分别检测PK15、PK3108和L18细胞系中MSTN、MMP-2/7/9基因的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,与野生型猪相比,MSTN单等位基因敲除猪背膘组织转录因子C/EBPδ、MMP-2/7基因mRNA表达量均极显著下调（P < 0.01）;细胞外基质中纤连蛋白（FN）和层连接蛋白（LN）含量均极显著增加（P < 0.01）。复苏的PK3108和L18细胞呈现绿色荧光。实时荧光定量PCR结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的mRNA表达量均极显著低于PK15细胞（P < 0.01）;Western blotting结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的蛋白表达量均明显低于PK15细胞。本研究结果表明,在MSTN基因敲除的PK15细胞中,MSTN功能缺失能显著降低MMP-2/7/9的表达,且MMP-2/7/9蛋白表达降低的趋势与MSTN蛋白表达的趋势相一致。     

妊娠母猪MMP-2、-9基因组织表达特性的研究

以妊娠母猪为研究材料,采用RT-PCR半定量方法对猪基质金属蛋白酶(MMP)-2、-9基因组织表达特点进行研究。结果表明:在检测的19种组织中,MMP-2除在心脏、大脑和下丘脑中无表达外,在其他16种组织中表达量由高到低依次为子宫内膜-附植点间>子宫颈>子宫内膜-附植点>胚泡>子宫体>骨骼肌>背膘>垂体>卵巢>小脑>脾脏>膀胱>脊髓>肾脏>肾上腺>输卵管;MMP-9除在脾脏、膀胱、大脑、小脑、垂体和下丘脑中无表达外,在其他13种组织中表达量由高到低依次为子宫内膜-附植点间>子宫内膜-附植点>肾脏>胚泡>脊髓>子宫体>输卵管>卵巢>背膘>子宫颈>心脏>肾上腺>骨骼肌。2个基因均在子宫及胚泡组织中表达较高,提示它们在母猪妊娠过程中发挥重要作用。     

喂食原花青素对产后奶牛血浆抗氧化指标的影响

高产奶牛产后启动泌乳,也将面临氧化应激状况。原花青素(Procyanidins,PC)是一种从植物中提取的天然高活性多酚类抗氧化剂,能清除代谢自由基,但未见把PC应用于产后奶牛的报道。本研究选24头产后奶牛,平均分为对照组(C)和试验组(PC),分别喂食0和20mg/kg体重,检测PC对血浆中的总抗氧化能力(TAC)含量的影响。结果表明,PC可显著提高奶牛产后血浆抗氧化水平。     

原花青素对猪精液常温保存效果的影响

为探究常温保存稀释液中添加原花青素(OPC)对猪精液保存效果的影响,本实验在经典猪精液稀释液BTS中添加0、10、20、30、40、50、60、70μg/mL OPC,检测17℃保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整性、总抗氧化能力(T-AOC)及精液丙二醛(MDA)含量等指标。结果表明:在经典猪精液稀释液BTS中添加OPC,随着添加浓度的增大,其对精子的保护作用呈先上升后下降的趋势,且添加浓度达50μg/mL时,效果最佳,可显著提高常温保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整率(P0.05);当保存至第5天时,精子活率仍为61.63%、质膜完整率为41.88%、顶体完整率为75.88%、T-AOC浓度为1.43 U/mL、MDA含量为2.37 nmol/mL。因此,在经典猪精液稀释液BTS中添加50μg/mLOPC能够提高猪精液常温保存效果,延长精液保存时间。     

葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响

为提高精液低温保存质量,在山羊精液低温保存基础稀释液中分别添加浓度为0、10、30、50、70 mg/L葡萄籽原花青素,检测精液保存过程中各组之间的精子活率、顶体完整性、质膜完整性、线粒体活性、T-AOC、MDA等精子质量评定指标,探讨葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响及最适添加浓度。结果表明:一定浓度葡萄籽原花青素可提高精液保存质量,且最适添加浓度30 mg/L。在30 mg/L处理组中,精液各项指标(MDA除外)在保存期间均最高,且5 d时精子活率、顶体完整率.、线粒体活性、T-AOC显著高于其他组(P0.05),其精子活率为51.46%,顶体完整率为67.55%,质膜完整率为50.97%,线粒体活性为50.78%。     

原花青素对青春期前羔羊卵母细胞体外成熟的影响

青春期前羔羊的卵母细胞发育能力低于成年母羊的卵母细胞,这限制了幼畜体外胚胎移植（Juvenile in vitro Embryo Transfer,JIVET）技术的广泛应用。为探讨原花青素B2(Procyanidin B2,PCB2)对提高青春期前羔羊卵母细胞发育能力的影响及其机制,本研究收集了经促性腺激素刺激的4～8周龄羔羊卵母细胞,在体外成熟液中培养。在卵母细胞成熟液中添加5μg/mL PCB2作为PCB2组,未添加PCB2组为对照组,培养24 h后测定卵母细胞第一极体排出率、孤雌激活后的卵裂率和囊胚率,并进一步测定胞内活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）含量、线粒体活性和线粒体膜电位水平等。结果表明：PCB2组卵母细胞第一极体排出率高于对照组（36.76%vs 31.11%,P<0.05）,但卵裂率（49.17%vs 49.68%）及囊胚率（47.47%vs 54.06%）与对照组无显著差异;进一步研究发现在IVM液中添加5μg/mL PCB2降低了卵母细胞ROS水平（P<0.01）,并提高了GSH水平（P<0.05）、线粒体活性（P<0.01）以及线粒...     

螺旋藻激酶对大鼠动脉粥样硬化的影响

本研究旨在观察螺旋藻激酶（SPK）对大鼠动脉粥样硬化（AS）的影响并探讨其可能的作用机制。取SD大鼠60只随机均分为正常对照组、模型组、阳性对照组（辛伐他汀,0.005 g/kg）和SPK低、中、高剂量组（80、160、320 U/kg）。除正常对照组外,其余各组通过高脂饲料建立大鼠AS模型,同时给予相应药物,每天1次,试验期12周。末次给药60 min后股动脉取血,分离血清,测定总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量并计算动脉粥样硬化指数（AI）;测定大鼠血清丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性;通过苏木精-伊红（HE）染色法在光镜下观察腹主动脉血管内膜形态改变。结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠AI及血清MDA含量显著升高（P<0.05）,血清NO含量和SOD活性显著下降（P<0.05）;与模型组比较,SPK高剂量大鼠AI和血清MDA含量显著降低（P<0.05）,NO含量和SOD活性显著升高（P<0.05）;病理结果显示：模型组有明显粥样斑块形成,SPK各剂量组粥样斑块形成明显减少,尤其中、高剂量组与正常对照组无明显差异。综上所述：SPK有明显的预防AS的作用,其作用机制可能与降低MDA、提高NO含量和SOD活性有关。     

苹果原花青素对小鼠运动能力和抗氧化能力的影响

为研究苹果中原花青素对小鼠运动能力和抗氧化能力的影响,选取5周龄健康雄性小鼠45只,随机分为3组,进行3周适应性游泳训练。小鼠运动结束后,通过轻度麻醉条件下采集血液和肌组织,检测血清中乳酸(LD)和丙二醛(MDA)含量,以及测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力。结果表明,各组小鼠的初始体重对比无显著差异(P0.05);运动对照组和试验组小鼠的游泳至力竭的时间明显长于安静对照组;与运动对照组相比,试验组小鼠的游泳至力竭的时间也呈现明显的延长趋势(P0.05)。游泳运动以后,运动对照组和试验组小鼠血清和肌组织中LD和MDA含量明显低于安静对照组;与运动对照组相比,试验组小鼠的血清LD和MDA含量也呈现明显下降趋势(P0.05)。另外,运动对照组和试验组小鼠SOD和CAT活性明显高于安静对照组,且与运动对照组相比,试验组SOD和CAT活性显著升高(P0.05)。说明苹果原花青素能提高小鼠运动能力和抗氧化能力,且与有氧运动相结合能够产生协同效应,具有较好的应用前景。     

福建兔生长模型研究

对693只福建兔黄毛和黑毛2个品系体重进行Logistic曲线模型拟合。结果表明:福建兔黄毛品系公母兔及黑毛品系公母兔的生长模型分别为:y=1(/1/3 679+0.007 1*0.973 1x),y=1(/1/4 197+0.006 6*0.977 8x),y=1/(1/2 830+0.003 2*0.974 3x),y=1(/1/3 290+0.003 5*0.976 7x);2个品系实际生长曲线与Logistic生长模型的拟合度均在0.925以上(P<0.01),其中以福建兔黄毛品系公兔生长模型的拟合度最高(R=0.959);福建兔黄毛品系公兔的生长拐点在120日龄,体重为1 848.2 g,成熟体重为3 696.4 g;福建兔黄毛品系母兔的生长拐点在148日龄,体重为2 099.7 g,成熟体重为4 199.4 g;福建兔黑毛品系公兔的生长拐点在89日龄,体重为1 413.7 g,成熟体重为2 827.4 g;福建兔黑毛品系母兔的生长拐点在104日龄,体重为1 651.8 g,成熟体重为3 303.6 g。     

葡萄籽原花青素对高精料育肥羔羊免疫功能的影响

本试验旨在研究葡萄籽原花青素(GSPs)对高精料育肥羔羊免疫功能的影响。试验选取48只4月龄、体重[(22.75±1.20)kg]相近的杜寒杂交一代公羔羊,随机分为4组,每组12只羊。各组分别在基础饲粮中添加0(对照组)、10(10GSPs组)、20(20GSPs组)、40 mg/(kg BW·d)(40GSPs组)的GSPs。预试期15 d,正试期45 d。结果表明:1)正试期第30天,20GSPs和40GSPs组外周血中CD4^+T细胞比例显著高于对照组(P<0.05),CD8^+T细胞比例显著低于对照组(P<0.05)。正试期第45天,20GSPs和40GSPs组外周血中CD8^+T细胞比例显著低于对照组(P<0.05),CD4^+T细胞比例及CD4^+/CD8^+比值显著高于对照组(P<0.05)。2)随着GSPs添加水平的增加,外周血淋巴细胞转化率线性升高(P<0.05),淋巴细胞凋亡率线性降低(P<0.05)。20GSPs和40GSPs组的外周血淋巴细胞转化率显著高于对照组(P<0.05),淋巴细胞凋亡率显著低于对照组(P<0.05)。3)随着GSPs添加水平的增加,血清白细胞介素-2(IL-2)含量有线性升高的趋势(P=0.057),血清白细胞介素-6(IL-6)含量有线性降低的趋势(P=0.074),但各组间血清IL-2、IL-6含量差异不显著(P>0.05)。20GSPs和40GSPs组血清白细胞介素-4(IL-4)含量显著高于对照组(P<0.05)。随着GSPs添加水平的增加,血清免疫球蛋白G(IgG)含量线性增加(P<0.05);20GSPs组血清IgG含量显著高于10GSPs和对照组(P<0.05)。由此可见,高精料饲粮条件下添加适量的GSPs可以改善羔羊的免疫功能,本试验条件下GSPs的适宜添加水平为20 mg/(kg BW·d)。     

蚯蚓提取液对兔巴氏杆菌病的治疗效果

为探明蚯蚓提取液对兔巴氏杆菌病的治疗效果,采用蚯蚓提取原液对兔巴氏杆菌进行了体内外试验研究。结果表明,通过体外抑菌试验,蚯蚓提取液对巴氏杆菌的抑菌效果明显,最小抑菌浓度为5倍稀释原液,而原液的抑菌率可达100%;体内试验研究显示,6 mL剂量组对兔巴氏杆菌病的治愈率为100%。     

母体铅暴露对仔鼠肝脏MMP-2和MMP-9 mRNA表达的影响

为探讨母体铅暴露对仔鼠肝脏MMP-2和MMP-9 mRNA表达的影响,采用自由饮水模式建立铅暴露动物模型,将40只雌性小鼠自妊娠第1天开始经饮水染铅(1.0,5.0,10.0g/L,对照组饮蒸馏水)至仔鼠出生后21d,随机分为低、中、高剂量染毒组和对照组,仔鼠21日龄,分别测其血液和肝脏中铅的含量,然后取其肝脏组织,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测各组仔鼠肝脏中MMP-2和MMP-9mRNA的表达情况。结果显示,21d后,铅暴露组仔鼠血液和肝脏中铅水平均明显高于对照组(P<0.05);与对照组相比,低、中和高剂量铅暴露组仔鼠肝脏内MMP-2mRNA的表达量明显增高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。中、高剂量铅暴露组仔鼠肝脏组织中MMP-9mRNA的表达明显高于对照组(P<0.05),但低剂量铅暴露组仔鼠肝脏组织中MMP-9mRNA的表达与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结果表明,母体铅暴露可能通过改变仔鼠肝脏中MMP-2 mRNA的表达进而造成肝脏损伤。母体铅暴露使铅在仔鼠体内蓄积,铅暴露可能通过增强仔鼠肝脏中MMP-9mRNA的表达进而造成肝脏损伤,从而引起组织发生病变。     

子宫内膜基质金属蛋白酶-2、-9 mRNA表达与奶牛子宫内膜炎关系的研究

为探讨基质金属蛋白酶(MMPs)-2、MMP-9在奶牛子宫内膜炎中的作用机制,选用产后6～10d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛各10头,分别为对照组和试验组,通过ELISA检测PGF2a、孕酮浓度;免疫组化检测子宫内膜Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达;SYBR Green I荧光定量PCR检测子宫内膜MMP-2和MMP-9mRNA表达。结果表明:试验组PGF2a浓度极显著低于对照组(P<0.01),孕酮含量显著高于对照组(P<0.05),PGF2a与孕酮浓度呈显著负相关(r=0.893);试验组子宫内膜中Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达量均高于对照组,差异极显著(P<0.01);MMP-2和MMP-9mRNA水平则显著低于对照组(P<0.01)。结果提示:产后子宫内膜炎病牛子宫内膜MMP-2、MMP-9低表达,导致Ⅰ型和Ⅳ型胶原降解受阻,使细胞外基质为子宫内膜细胞提供的刺激信号不足,子宫分泌PGF2a量少,黄体消退障碍,血清孕酮含量高;说明子宫内膜MMP-2、MMP-9mRNA表达对产后子宫内膜炎的发生和发展起促进作用。     

家兔抗长角血蜱免疫模型的建立及对长角血蜱成蜱生长发育的影响

每隔2周用长角血蜱成蜱定量感染家兔,成功构建了具有不同抵抗力的家兔免疫模型。ELISA检测结果表明,家兔血清中的抗体效价从初次叮咬后第3周开始呈阳性,随着叮咬次数的增加抗体水平逐渐上升,第11周时达到高峰。具有一定抵抗力的家兔对长角血蜱成蜱的吸血和生长发育影响显著,其抗体水平与长角血蜱成蜱在兔体的吸血周期、死亡率成正相关,与雌蜱的饱血脱落率、饱血体重成负相关。结果进一步证明,蜱的唾液腺是其主要的免疫器官之一。家兔抗体水平的持续期足以使长角血蜱完成一个世代,可以满足试验需求,是抗蜱免疫研究理想的阳性对照模型。同时,血清中特异性抗体的效价也可以作为判断动物对长角血蜱抵抗力强弱的重要指标之一。     

新型豆科植物提取物对獭兔生产性能及免疫功能的影响

选择35日龄力克斯仔幼兔48只，随机分成4组，每组12只。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加1.2 g／kg的新型豆科植物提取物，Ⅳ组为空白对照组，在相同条件下进行饲养试验，比较新型豆科植物提取物对獭兔仔幼兔的免疫器官发育，血液生化指标和生产性能的影响。结果表明：①在35～65日龄阶段，试验组I幼仔兔平均日增重比对照组提高22.80%，料肉比降低18.49% ,差异均极显著（P<0.01）。其余试验组也表现出比对照组有增加体重和提高饲料报酬方面的优势。 ②试验组Ⅰ与对照组仔幼兔的半净膛率相比有提高的趋势，但差异不显著(P>0.05)。免疫器官/体重与对照组相比有降低的趋势，而血液生化指标有提高的趋势。表明新型豆科植物提取物对獭兔仔幼兔具有促生长，提高饲料报酬，提高仔幼兔免疫能力，增强机体抗病力的作用。