党参多糖对鸡IL-2活性和淋巴细胞增殖反应的促进作用

为了筛选有效增强鸡免疫功能的中药单体,采用体外鸡脾淋巴细胞增殖试验和体外诱导白细胞介素2(IL-2)产生试验观察了党参多糖对鸡免疫功能的影响.结果表明党参多糖可明显增强鸡脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生.     

5种硫酸化多糖刺激鸡外周血淋巴细胞增殖的效果比较

比较了硫酸化黄芪多糖(sAPS)、硫酸化淫羊藿多糖(sEPS)、硫酸化香菇多糖(sLNT)、硫酸化当归多糖(sCAPS)和硫酸化枸杞多糖(sLBS)体外对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响。首先测定5种硫酸化多糖对淋巴细胞的安全浓度,然后取安全浓度范围内的各硫酸化多糖分别单独或与ConA一起加入到淋巴细胞的培养体系中,用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明,5种硫酸化多糖在合适的剂量均可单独或协同ConA刺激淋巴细胞增殖,且有一定的量效关系,以sAPS60效果最好,sEPS5次之。     

硫酸化黄芪多糖佐剂活性的比较

14日龄雏鸡200只,随机均分为10组,在用新城疫弱毒苗免疫的同时,6个试验组分别肌肉注射高、低剂量3种修饰的硫酸化黄芪多糖(sAPS)sAPS40、sAPS50和sAPS60,2个多糖对照组注射高、低剂量未修饰的黄芪多糖(APS),无佐剂对照组注射等量生理盐水,每天1次,连续3 d.分别于免疫后7、14、21、28 d翅静脉采血测定血清抗体效价;于免疫后14、21、28、35 d心脏采血测定T淋巴细胞增殖.结果表明,3种修饰多糖均能显著提高血清抗体效价、促进T淋巴细胞增殖,作用强于未修饰多糖,并有一定的量效和时效关系,高剂量提高血清抗体效价、低剂量促进T淋巴细胞增殖的效果较好,综合评价以sAPS60最好,可以作为新型免疫增强剂的候选药.     

鸡白细胞介素-2原核表达与生物学活性初探

根据pGEX-6p-1表达载体多克隆位点,设计带有限制性内切酶酶切位点的IL-2引物,RT-PCR克隆获得目的基因,连接pGEM-T载体,转化JM109感受态细胞,经蓝白斑筛选、测序和双酶切鉴定,与pGEX-6p-1表达载体连接,转化BL21感受态细胞,经双酶切和PCR鉴定,用IPTG诱导表达,通过菌体裂解、包涵体洗涤、溶解、复性、Sepharose 4B柱层析,SDS-PAGE和Western blot检测,证明表达并纯化了IL-2融合蛋白,而且纯化的IL-2融合蛋白具有促进淋巴细胞增殖的特性.     

淫羊藿多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响

为研究淫羊藿多糖脂质体(EPSL)增强免疫的作用机理,采用MTT法和实时荧光定量PCR法测定了EPSL对鸡外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响,以淫羊藿多糖(EPS)作为对照.结果表明,EPSL在体外可以显著促进淋巴细胞的增殖,其中在31.250和3.906 μg·mL-1时,无论是单独作用还是协同PHA作用效果都显著优于EPS;EPSL可提高淋巴细胞IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA的表达,其中在62.500和31.250 μg·mL-1时,EPSL对3种细胞因子的诱生作用显著强于EPS,EPSL在62.500 μg·mL-1时的作用最强,在31.250 μg·mL-1时次之,并与剂量呈正相关.EPS经过脂质体包封后其提高淋巴细胞增殖及细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γmRNA表达的作用明显增强.     

白细胞介素-10对口蹄疫病毒感染小鼠T细胞增殖及其表达TNF-α、IFN-γ和IL-2的影响

白细胞介素-10(IL-10)增高是口蹄疫病毒(FMDV)感染过程中显著特征之一。本研究旨在探讨IL-10对FMDV感染小鼠外周血T细胞增殖及其表达效应功能相关细胞因子的影响。采用CCK-8和流式细胞术分别检测小鼠外周血T细胞增殖和T细胞表达效应功能相关细胞因子(TNF-α、IFN-γ和IL-2)。结果显示,与对照小鼠相比,FMDV感染小鼠(感染12、24、36和48 h)外周血T细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖均显著下降(P<0.05或P<0.01);FMDV感染小鼠的外周血CD4⁺T细胞表达TNF-α和IL-2均显著下降(均P<0.01),CD8⁺T细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-2也显著下降(P<0.01或P<0.000 1)。体内阻断IL-10/IL-10R信号或者敲除IL-10均能显著恢复FMDV感染小鼠外周血T细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),但不影响CD4⁺和CD8⁺T细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-2。本研究首次揭示FMDV能抑...     

刺五加多糖对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响

研究刺五加多糖(ASPS)对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响。将不同浓度的ASPS添加到体外分离培养的血液淋巴细胞中,采用噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖变化,以实时荧光定量PCR方法检测淋巴细胞细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-αmRNA表达水平。结果显示,ASPS可以单独或协同植物血凝素(PHA)或脂多糖(LPS)促进淋巴细胞体外增殖,并且ASPS在质量浓度为200μg/mL时效果最佳。另外,ASPS能够促进淋巴细胞细胞因子mRNA的表达,当200μg/mL的ASPS与淋巴细胞体外共培养至24 h时,IFN-γ、IL-2、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α的mRNA表达量均最高,而IL-4和IL-10 mRNA的相对表达量则以ASPS质量浓度为400μg/mL和培养时间48 h条件下最高,说明IL-4和IL-10 mRNA的表达滞后,而且呈剂量依赖性。结果表明,ASPS能够提高鸡淋巴细胞的体外增殖功能,促进Th1和Th2细胞因子分泌,这为进一步揭示刺五加多糖的免疫调节机制奠定了基础。     

褪黑素和光照对鹌鹑白细胞介素-2的影响

采用褪黑素(MLT)完全抗原主动免疫鹌鹑，在不同光照条件下饲养，研究了MLT参与神经-内分泌-免疫网络调控时对IL-2水平的影响。结果表明：主动免疫后，MLT和IL-2水平明显下降；随着光照时间的延长，IL-2水平也显著下降。一定剂量的MLT可促进机体免疫因子IL-2的分泌。     

益生菌对新城疫疫苗免疫雏鸡免疫器官T细胞增殖能力和IL-2mRNA表达影响

为探索益生菌对新城疫(ND)疫苗免疫雏鸡的免疫效果影响。将100只1日龄AA肉鸡随机分为益生菌组、ND疫苗单独免疫组、益生菌联合ND疫苗应用组和空白对照组。采用MTT法和实时荧光定量PCR法检测各试验雏鸡于ND疫苗两次应用后0、7、14、28、42 d胸腺、脾脏中细胞免疫功能及IL-2 mRNA的表达。结果发现,益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡后,其胸腺和脾脏中T细胞增殖能力和IL-2 mRNA表达,分别于ND疫苗免疫后7~28 d明显(P0.05或P0.01)高于ND疫苗或益生菌单独应用雏鸡。表明益生菌可通过提高雏鸡免疫器官中T细胞增殖功能和IL-2 mRNA表达,发挥增强ND疫苗免疫效应作用。     

鸡白细胞介素-2分子生物学和疾病防治应用研究进展

白细胞介素-2(IL-2)是鸡体内一类重要的细胞因子,参与机体的各项免疫应答作用。近年来,随着鸡IL-2基因克隆的成功,其分子生物学和疾病防治应用等方面的研究也进一步加深。文章对其分子生物学特性和疾病防治应用研究进行了综述。     

硫酸化党参多糖对H2O2致RAW264.7细胞损伤和小鼠急性酒精损伤的保护作用

本试验旨在比较党参多糖(CP)与硫酸化党参多糖(SCP)对H₂O₂诱导RAW264.7细胞急性损伤及小鼠急性酒精损伤的保护作用。采用H₂O₂诱导RAW264.7细胞急性损伤,检测不同浓度CP与SCP对RAW264.7细胞生长、吞噬功能及IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平的影响。随后体内建立小鼠急性酒精损伤模型,将90只4周龄雄性昆明小鼠随机均分为9组：正常对照组(B)、模型对照组(MO)、维生素C对照组(VC)、3个剂量的CP(CPL、CPM、CPH)与SCP(SCPL、SCPM、SCPH)组。检测各组对急性酒精损伤小鼠生长情况、血液生理指标、脏器指数、血清IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ水平的影响。结果显示,H₂O₂诱导RAW264.7细胞急性损伤后,与MO组相比,CP和SCP组细胞贴壁数量增加,细胞密度增大,37 ℃作用30、60、90 min后均能显著提高细胞吞噬能力(P < 0.05),且SCP各组促进细胞增殖及吞噬作用优于CP各组。CP和SCP均能显著促进细胞分泌IL-2、IFN-γ(P < 0.05),抑制IL-4的分泌(P < 0.05),SCP各组对IL-4的抑制作用优于CP,其中SCPL组对IL-4的抑制效果最佳。小鼠急性酒精损伤模型中,与MO组相比,CP和SCP能显著改善小鼠血液生理指标(P < 0.05),使血液中WBC和HGB恢复至正常水平,其中SCPL组效果最佳。CP和SCP还能改善小鼠血生化指标,显著提高血清中TC、LDH含量(P < 0.05),降低TG含量(P < 0.05)。CP和SCP组较MO组小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平显著升高(P < 0.05),IL-4水平显著降低(P < 0.05),其中SCP各组对IL-4的抑制作用最佳。综上所述,SCP可显著提高H₂O₂诱导RAW264.7细胞急性损伤后细胞吞噬能力,促进细胞分泌IL-2、IFN-γ水平,抑制IL-4分泌;改善酒精诱导的急性损伤小鼠的血液生理指标、血清生化指标和免疫因子,具有一定的保护作用,且SCP在一定条件下效果优于CP。     

党参多糖对D-半乳糖衰老模型小鼠的影响

目的：研究党参多糖（CPPS）的抗衰老作用。方法：选用D-半乳糖（D-gal）诱导建立小鼠衰老模型,CPPS分别按250 mg/kg、150 mg/kg、50 mg/kg连续灌胃,观察CPPS对小鼠肝脏组织MDA含量的影响。结果：CPPS可以显著降低小鼠肝脏组织MDA含量（P〈0.01）,减轻D-gal对小鼠肝细胞的毒性。结论：CPPS对D-gal所致衰老小鼠的肝组织毒性具有显著的保护作用,这种保护效应可能与CPPS抗氧化的作用机制有关。     

党参多糖口服液抗应激及抗炎作用的研究

为研究党参多糖口服液的抗应激与抗炎作用,给小鼠灌服不同剂量（每kg体重灌服9、7、5 g生药）的党参多糖口服液后,通过测定小鼠负重游泳时间、常压耐缺氧时间来评价其应激性作用;观察党参多糖口服液对小鼠耳廓二甲苯致炎的影响,考察其抗炎作用.结果显示,党参多糖口服液能显著（P＜0.01）延长小鼠的游泳时间和常压缺氧条件下的存活时间,对二甲苯所致小鼠耳廓炎症具有不同程度的抑制作用.因此,党参多糖口服液具有抗应激、抗炎作用,该试验可为党参多糖口服液的临床应用提供参考.     

鸡肠内菌发酵党参转化多糖实验研究

用最小二乘法模拟制作了肠内混合菌C8GF20、双歧杆菌C4BF12、乳杆菌C4M50F8在含药培养基中的生长数学模型,以单因子14水平拟合并验证了数学模型的准确性,通过发酵液粗多糖水平变化评估3种菌发酵党参转化多糖的活性作用。当培养基中药物添加量在12.5%-15%时,细菌增长最佳;3种菌实验数学模型经拟合验证,对应的RSD分别为5.45%、4.17%和4.19%;党参发酵液中粗多糖增量在驯化7代后趋于稳定并达最高值,C4M50F8的最高值为124.68%、C4BF12的最高值为114.29%、C8GF20的最高值为119.36%。结果提示,党参加入浓度为12.5%时效果最佳,实验菌发酵党参后多糖增加量均在100%以上,其中乳杆菌C4M50F8效果最优。     

鸡脾脏T淋巴细胞增殖试验优化条件的筛选

为了建立鸡脾脏T淋巴细胞转化试验的最佳培养条件,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法,对细胞浓度、小牛血清及刀豆蛋白A(ConA)的浓度,以及培养时间等4个参数进行研究。结果表明,采用5×106/mL细胞、100mL/L小牛血清、10μg/mL的ConA及48h培养时间可获得最大的OD570吸光值。     

白花蛇舌草提取物对肉鸡淋巴细胞增殖功能的影响

为了研究中药白花蛇舌草对肉鸡免疫力的调节作用,探讨其作用机理。在体外培养的肉鸡血液和脾脏淋巴细胞中加入不同浓度的白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮等成分,观测其对淋巴细胞增殖功能的影响。白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮分别在浓度为4 000 mg/L、1 000 mg/L~2 000 mg/L和5 mg/L~100 mg/L时对鸡血液淋巴细胞有明显的刺激增殖作用(P0.05),在浓度为200 mg/L~800 mg/L、10 mg/L~1 600 mg/L和25 mg/L~50 mg/L时对鸡脾脏淋巴细胞的增殖具有明显的刺激作用(P0.05)。研究结果说明白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮对体外培养的肉鸡淋巴细胞的增殖均有促进作用。     

党参多糖对仔猪生长性能、血清细胞因子及肠黏膜分泌型免疫球蛋白A含量的影响

本试验旨在研究党参多糖(CPP)对仔猪生长性能、血清细胞因子及肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIg A)含量的影响。选取1日龄"杜×长×大"三元杂交仔猪60头(6窝),随机分为3组,每组2个重复,每个重复10头猪(公母各占1/2)。14日龄时开始试验,3组仔猪分别饲喂仔猪代乳料(对照组)、仔猪代乳料+1%党参多糖(低剂量组)、仔猪代乳料+2%党参多糖(高剂量组),所有仔猪21日龄断奶,试验期14 d。结果表明:与对照组相比,1)21日龄时,饲粮添加2%党参多糖极显著提高了仔猪的平均体重(P0.01);28日龄时,饲粮添加1%和2%党参多糖显著提高了仔猪的平均体重(P0.05)。22~28日龄时,饲粮添加2%党参多糖显著提高了仔猪的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)(P0.05)。2)21日龄时,饲粮添加2%党参多糖显著提高了仔猪的血清γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)含量(P0.05);28日龄时,饲粮添加1%和2%党参多糖显著提高了仔猪的血清IL-2、白细胞介素-4(IL-4)和IL-6含量(P0.05)。3)饲粮添加2%党参多糖极显著提高了仔猪的十二指肠、空肠和回肠黏膜SIg A含量(P0.01)。由此可见,饲粮添加1%和2%党参多糖能够改善仔猪的生长性能,提高血清细胞因子和肠黏膜SIg A含量,其中添加2%党参多糖的作用效果优于1%党参多糖。     

米糠多糖对健康雏鸡外周血T淋巴细胞转化和体液免疫的影响

为探讨米糠多糖对鸡免疫功能的影响,选用100只10日龄京白939蛋雏鸡,随机平均分为4组。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组从10日龄起分别灌服低、中、高3个剂量米糠多糖(50、100和200mg/(kg.d)),每天一次性灌服规定剂量,连续5d;Ⅰ组同时灌服生理盐水作为对照,1mL/只。在灌服米糠多糖前1d和灌服后7、14和21d,分别测定雏鸡外周血T淋巴细胞转化能力和血清IgG、IgA和IgM含量。在雏鸡14日龄时,对照组和米糠多糖处理组均实施新城疫(ND)疫苗免疫,间隔1周后进行禽流感(AI)疫苗免疫。分别在ND疫苗和AI疫苗免疫前1d和免疫后7、14和21d测定ND抗体和AI抗体效价。结果显示:(1)雏鸡灌服3个不同剂量米糠多糖后的7、14和21d,外周血T淋巴细胞转化能力均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),且以100mg/(kg.d)剂量组效果最好。(2)雏鸡服用3个剂量组米糠多糖后7、14和21d,血清IgG含量均高于对照组(P<0.05或P<0.01);血清中IgA含量,在14d时,低剂量组与对照组无显著差异,中、高剂量组显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);IgM含量在灌服米糠多糖后7d时,Ⅳ组高与对照组无差异(P>0.05);14d时,Ⅲ组与对照组无差异(P>0.05);米糠多糖其他剂量组在7和14d,血清IgM含量均高于对照组(P<0.05或P<0.01);21d时,米糠多糖处理组与对照组比较无显著差异。(3)雏鸡服用米糠多糖可以提高ND疫苗和AI疫苗免疫后的特异性抗体效价,且免疫效果与米糠多糖剂量呈正相关。试验结果表明,米糠多糖能够从促进蛋雏鸡外周血T淋巴细胞转化功能、提高血清免疫球蛋白含量以及提高疫苗免疫特异性抗体效价等方面调节健康雏鸡的免疫功能。     

Effects of Polysaccharides from Ferula sinkiangensis Root on Proliferation of Chicken Peripheral Lymphocyte and Spleen Lymphocyte in vitro

To investigate the effects of Ferula sinkiangensis polysaccharides (FSP) on cell proliferation of chicken splenic lymphocytes and peripheral lymphocyte in vitro. By the method of water extract-alcohol precipitation,total Ferula sinkiangensis polysaccharide (FSP_t) and 30%,50%,70% gradient alcohol precipitation of polysaccharides (FSP₃₀,FSP₅₀ and FSP₇₀) were extracted, and detected by phenol-sulfuric acid method and infrared spectroscopy method. The safe concentration of all classifications of polysaccharide were detected and the effect of FSP on lymphocyte proliferation of chicken spleen and peripheral blood were measured by MTT method. The results showed that the absorption peak of FSP were conformed to belong by polysaccharide compounds. Peripheral blood T lymphocyte proliferation test indicated that FSP_t,FSP₃₀ and FSP₇₀ alone or cooperated with PHA could stimulate T lymphocyte proliferation under a certain concentration,and FSP_t showed a better proliferation effect. Spleen B lymphocyte proliferation test showed that FSP_t,FSP₃₀ and FSP₇₀ alone or cooperated with LPS could stimulate B lymphocyte proliferation under a certain concentration,FSP_t and FSP₇₀ showed a better proliferation effect. In conclusion,FSP showed the strong effect on lymphocyte proliferation of chicken spleen and peripheral blood in vitro,and that would be the materials for further research.     

阿魏根粗多糖对鸡脾脏和外周血淋巴细胞体外增殖作用的影响

为研究新疆阿魏多糖（FSP）对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖作用的影响。本研究用水提醇沉法得到阿魏总多糖（FSP_t）和3种分级多糖（FSP₃₀、FSP₅₀、FSP₇₀）,并通过苯酚-硫酸法和红外光谱对FSP进行检测。通过MTT法测定各级FSP的安全浓度及其对鸡外周血T淋巴细胞及脾脏B淋巴细胞的增殖能力。结果显示,提取的FSP均具有多糖的特征峰,为多糖类化合物。外周血T淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同PHA刺激T淋巴细胞增殖,其中FSP_t的增殖作用较强。脾脏B淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同LPS刺激B淋巴细胞增殖,其中FSP₇₀和FSP_t增殖作用较强。综上所述,各级FSP中,FSP_t对脾脏B淋巴细胞和外周血T淋巴细胞的增殖作用最强,可以作为进一步研究的材料。