黄曲霉毒素M1胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的黄曲霉毒素M1试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为0.5ng/mL,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测.     

黄曲霉毒素B1免疫层析检测方法的研究

以柠檬酸三钠为还原剂,制备了20nm胶体金颗粒,以此胶体金标记纯化的单抗4G6,喷于玻璃纤维上,AFBl蛋白偶联物和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条。结果：组装的试纸条特异性好,与AF类似物无交叉反应,对AFBl标准品最低检测限为3μg／L,检测时间约为10min,批内和批间重复性为100％,假阳性率和假阴性率均为0。操作简便,成本很低,适于AFBl的现场快速检测。在制备了单克隆抗体的基础上,应用胶体金免疫层析技术,建立了食品中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFBl）快速检测方法。     

饲料中黄曲霉毒素 B_1的简易定性测定

<正> 黄曲霉毒素是强烈致癌物质。1960年,英国曾发生震惊世界的10万只火鸡因食用含有黄曲霉毒素的饲料而中毒死亡事件。目前,已分离出10多种黄曲霉毒素异构体。其中最常见、毒性最大的是黄曲霉毒素B_1。因此,对饲料中黄曲霉毒素 B_1进行检测不仅很有必要,而且很有代表性。当今。在对外贸易合同中。对饲料中黄曲霉毒素 B_1要求不得检出。肉眼在紫外光下可观察到的最低限度为5ppb,如果观察不到,可认为未检出。     

饲喂黄曲霉毒素B_1对奶山羊乳中黄曲霉毒素M_1分泌规律与转化率的影响

为研究饲粮中添加单一剂量黄曲霉毒素B1(AFB1)后奶山羊乳中黄曲霉毒素M1(AFM1)的分泌规律及AFB1转化为AFM1的转化率,选择3只健康、体重接近的泌乳中期关中奶山羊,每只羊饲喂1 mg AFB1。饲喂后0、4、8、24、32、48、56、72、80、96、104及120 h采集羊乳,测定AFM1含量。结果表明:1)饲喂AFB1前(0 h),羊乳中未检出AFM1,但是饲喂AFB1后4 h,在收集的羊乳中均检出了AFM1;2)3只试验在羊乳中AFM1含量存在差异,但是其分泌规律非常相似,均呈先升高后急剧下降再缓慢下降的趋势;3)羊乳中AFM1的峰值出现在饲喂AFB1后4~8 h;4)羊乳中AFM1平均含量在56 h时为0.39μg/kg,低于我国限量值(0.5μg/kg),到120 h平均含量为0.02μg/kg,低于欧盟限量值(0.05μg/kg);5)各时间点AFB1转化为AFM1的最大平均转化率为0.19%,出现在4 h;6)饲喂AFB1后24 h内的AFM1平均转化率之和占AFM1总转化率的81%。结果提示,AFM1在奶山羊乳中的排出时间主要集中在采食AFB1后的24 h内。     

高剂量黄曲霉毒素B_1对肉鸭的致病性研究

为了研究饲料中黄曲霉毒素B1(AFB1)对肉鸭的致病性,选用1日龄SM4商品代白羽肉鸭160羽,随机分为2组,每组4个重复,每个重复20只,试验期28 d,分别喂以正常日粮和由霉变玉米配置的日粮。经测定,对照组饲料中黄曲霉毒素B1终浓度为8μg/kg,试验组(AFB1组)饲料中AFB1终浓度为60μg/kg。结果表明:试验组鸭的体重、平均日增重和平均日采食量比对照组鸭显著降低(P0.05),而料重比和死亡率显著增加(P0.05);试验组鸭肝脏病变明显,肝细胞发生空泡变性,部分肝细胞严重肿胀,可见明显的胆管增生情况;肾小管扩张、充血;胰腺局灶性坏死,炎性细胞浸润。     

黄曲霉毒素B_1与M_1对小鼠肠道细菌多样性的影响

试验旨在研究黄曲霉毒素B_1与M_1(AFB_1与AFM_1)对小鼠肠道细菌多样性的影响。选取体况良好的4周龄ICR(CD-1)雄性小鼠40只,随机分成4组,每组10个重复,每个重复1只小鼠,其中AFB_1组小鼠每只每天灌胃0.3mg/kg体重AFB_1,AFM_1组小鼠每只每天灌胃3.0mg/kg体重AFM_1,AFB_1+AFM_1组每只每天灌胃AFB_1与AFM_1的混合溶液,其中AFB_1终浓度0.3mg/kg体重,AFM_1终浓度3.0mg/kg体重,以上3组毒素溶剂均为1.0%二甲基亚砜水溶液。对照组小鼠每只每天灌胃1.0%二甲基亚砜水溶液。每只灌胃剂量均为200μL,每天09∶00灌胃一次,连续灌胃28d。灌胃结束后,处死并解剖小鼠,收集结肠内容物,采用16SrRNA测序的方法对肠内容物细菌多样性进行测序分析。结果显示:在细菌群落的门水平、科水平及属水平,与对照组相比,3个毒素处理组小鼠肠道内容物细菌优势菌群均未发生明显排序变化(P>0.05),但不同的毒素处理仍造成了不同分类水平下细菌菌群丰度的显著变化:与对照组相比,AFB_1组及联合灌胃组小鼠肠内致病菌或条件致病菌,如Facklamia、Staphylococcus、Corynebacterium属细菌丰度显著升高(P<0.05);而AFM_1组与对照组相比未见显著差异(P>0.05)。综合试验结果,AFB_1单独作用或与AFM_1联合作用可诱导小鼠肠道内致病菌或条件致病菌细菌增殖,改变肠道健康微生物区系,损伤肠道微生物屏障功能。     

饲料中黄曲霉毒素B_1对家禽的影响

黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是一种可致癌、致畸、致突变的真菌毒素,能降低家禽的免疫和肝脏机能,严重影响家禽的生长发育。本文就AFB1对家禽的影响进行了综述。     

2016年山东省饲料中黄曲霉毒素B_1污染状况调查

为了解山东省饲料黄曲霉毒素B_1(AFB_1)污染状况,保证饲料质量安全,采集于山东省各地规模化动物养殖场、各大饲料厂及养殖户1 037份样品,利用直接竞争酶联免疫吸附法测定黄曲霉毒素B_1的含量。结果表明,山东省饲料原料AFB_1超标率如下:玉米27.71%、花生饼粕23.27%、DDGS6.90%、玉米胚芽粕4.92%,其他原料均不超标。配合饲料除了奶牛精料补充料不超标外,家禽配合饲料超标率在13.04%~28.57%,需重点关注。     

黄曲霉毒素B_1中毒对犬血液生化指标的影响

为客观、定量了解黄曲霉毒素B1中毒前后犬血液生化指标的变化,本研究采用全自动生化分析仪分别测定30头犬黄曲霉毒素B1中毒前后血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、胆碱酯酶、总胆红素、直接胆红素、总蛋白和白蛋白7项生化指标。结果表明,中毒后血清中总胆红素、直接胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶浓度升高,总蛋白、白蛋白、胆碱酯酶浓度降低,各项指标中毒前后差异极显著(P<0.01)。     

猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡的研制

应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。     

鸡传染性法氏囊病快速诊断试纸的研制

本文简述用胶体金免疫层析技术,构建鸡传染性法氏囊病快速诊断试纸。试纸主要由测试端、显色区和手柄端3部分构成,能在很短的时间内完成对鸡传染性法氏囊病的诊断,且无需任何仪器设备,具有简便、快速、敏感、特异的特点。     

猪瘟快速诊断金标试纸条的研制及应用

运用胶体金免疫层析技术,建立一种操作简单、特异性好、灵敏度高,适合临床诊断的检测猪瘟病毒的方法。本文通过采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,选择15 nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体,组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测,结果显示,用试纸条检测猪瘟病毒,15min左右即可显示结果,并与荧光抗体检测方法加以比较,结果表明用此种方法可以检测猪瘟病,并且可以进行推广使用。     

鉴别布鲁菌病自然感染动物与疫苗免疫动物胶体金检测试纸条的研制

用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）标记胶体金技术制作金标垫,以亲和层析法纯化的BP26蛋白作为检测抗原（T线）,研制胶体金快速检测试纸条。用建立的试纸条检测小鼠布鲁菌感染血清,可成功鉴别牛布鲁菌S19感染和BP26缺失疫苗株YZ-2免疫的小鼠。试纸条检测与布鲁菌属同源性较近的几株细菌的阳性血清,结果无交叉反应;试纸条敏感性高于虎红平板凝集试验检测方法,近似于ELISA方法;准确性同于ELISA法,且更为简便快捷。该试纸条具有鉴别布鲁菌病自然感染和疫苗免疫的应用前景。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫胶体金试剂板的研制

建立了一种快速检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的免疫胶体金检测方法.利用柠檬酸三钠还原法制备直径40 nm的胶体金溶液,利用胶体金标记抗DON单克隆抗体制备胶体金免疫复合物,将DON-BSA和羊抗鼠IgG分别固定在NC膜的检测线和质控线上,依次将样品垫、胶体金结合垫、NC膜和吸水垫粘贴到PVC膜上,组装成试剂板.该试剂板灵敏度可达到500 μg/kg,15 min内即可完成检测;特异性好,与其他霉菌毒素无交叉反应;稳定性、准确性均较好.该胶体金免疫层析试剂板使用方便、快速,且不需要任何仪器设备辅助,可开发作为一种大批量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇样本的筛选手段.     

大片形吸虫免疫胶体金检测试纸条的研制及初步应用

为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛大片形吸虫检测方法,本试验利用抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到单克隆抗体7D1和7D4;采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为30 nm的胶体金,再用胶体金标记纯化单克隆抗体7D1,在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体7D4,经反应条件优化,组装成了大片形吸虫免疫检测试纸条。经测试该检测试纸条对ES抗原的检测下限为0.94 μg/mL,与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫均无交叉反应,特异性好。采集广西地区334份水牛新鲜粪样并用试纸条检测,阳性率为38.62%。结果表明,试纸条方法操作简单、快速、易于判定,特异性好,敏感性高,适合基层大面积普查和现场检测大片形吸虫。     

Preparation and Primary Application of Immunity Colloidal Gold Test Strip for Fasciola gigantica

To establish a rapid, simple, sensitive and adapting field application assay for water buffalo Fasciola gigantica, the monoclonal antibodies of hybridoma cell strains 7D1 and 7D4 against excretory-secretary antigen(ES Ag) of Fasciola gigantica were prepared and purified. Meanwhile, the colloidal gold particle was prepared by the sodium cirrate reduction method, then the affinity purified 7D1 monoclone antibodies was labeled with the 30 nm colloidal gold particles. The 7D4 monoclonal antibodies and the goat anti-mouse IgG antibody using as secondary antibodies were coated on the surface of nitrocellulose filter(NC) membrane as the test line (T line) and control line (C line), respectively. The immune colloidal gold test strip was developed by optimizing the experiment conditions. The test results showed the prepared strip had a detecting prescribed minimum of 0.94 μg/mL of Fasciola gigantica excretory-secretary antigen, and it had no any cross reaction with the antigens of Eurytrema pancreaticum, Paramphistome, Chlamydia, Toxoplasma gondii and Trypanosoma evansi. Using the prepared strip to investigate the 334 fresh feces from buffaloes in Guangxi and the positive rate was 38.62%. These results indicated that this strip method was simple, rapid and easy determination, good specificity, high sensitivity, and adapted field application assay for Fasciola gigantica.     

水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用

为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛伊氏锥虫病诊断方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的OB6单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上包被纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的TB7单克隆抗体和兔抗小鼠IgG,作为检测带和质控带,然后优化条件,研制成检测伊氏锥虫病的免疫胶体金试纸条.通过交叉试验表明该试纸条与衣原体、弓形虫、旋毛虫、巴贝斯焦虫和大片吸虫无交叉反应.该试纸条最低可以检出1∶3 200倍稀释的伊氏锥虫VSG抗原(浓度为3.11 mg·mL-1).应用该试纸条对230份水牛血清样本进行初步检测,同时用ELISA做平行试验,阳性符合率为88.2％.结果证明该试纸条是一种快速、灵敏、特异的水牛伊氏锥虫病的检测方法,为水牛伊氏锥虫病的现场检测诊断和预控提供了有效的方法.